本文關(guān)鍵詞：同一患者“炎癥”和健康牙周膜干細(xì)胞共培養(yǎng)體系中的相互作用

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【摘要】：研究背景:近年來,隨著對(duì)牙周膜干細(xì)胞(PDLSCs)研究的深入,相對(duì)于來源于牙周組織健康牙齒的健康PDLSCs(H-PDLSCs),從人牙周炎患牙處牙周組織中分離培養(yǎng)出的“炎癥”PDLSCs(I-PDLSCs),因來源廣泛、倫理學(xué)爭(zhēng)議較小、易于患者接受等優(yōu)點(diǎn),逐漸受到科研工作者的重視�？上У氖�,迄今為止,大量體外體內(nèi)研究均表明,和H-PDLSCs相比,I-PDLSCs的部分生物學(xué)性能,特別是成骨分化能力明顯受損,這在很大程度上限制了I-PDLSCs在細(xì)胞移植治療中的應(yīng)用潛能。同樣地,本課題組已經(jīng)通過對(duì)比同一患者來源I-PDLSCs和H-PDLSCs的生物學(xué)性能,進(jìn)一步證實(shí)以上結(jié)果。因此,本研究擬采用兩種PDLSCs間接或直接共培養(yǎng)的方式,探索適用于I-PDLSCs的臨床應(yīng)用策略:一方面,從I-PDLSCs和H-PDLSCs條件培養(yǎng)基(I-CM和H-CM)對(duì)兩種PDLSCs生物學(xué)性能影響的角度出發(fā),探討是否可以通過改變I-PDLSCs的細(xì)胞培養(yǎng)微環(huán)境,進(jìn)而改善I-PDLSCs受損的細(xì)胞性能;另一方面,將兩種PDLSCs按照不同比例直接混合共培養(yǎng)后,通過觀察混合細(xì)胞生物學(xué)性能的變化,分析是否可以將I-PDLSCs作為H-PDLSCs的輔助添加物,以彌補(bǔ)臨床工作中H-PDLSCs來源受限的缺陷。研究方法:1、同一患者i-pdlscs和h-pdlscs的分離、培養(yǎng)和鑒定。為避免不同患者來源細(xì)胞之間復(fù)雜的免疫作用,本研究選擇6組同一患者來源的i-pdlscs和h-pdlscs作為研究對(duì)象。同時(shí),采用免疫熒光染色方法,分析兩種pdlscs的表面標(biāo)記物表達(dá)情況。2、同一患者i-pdlscs和h-pdlscs間接共培養(yǎng)體系中的相互作用。首先,分別收集同一患者來源i-pdlscs和h-pdlscs的體外培養(yǎng)上清液,并分別制作出“炎癥”和健康條件培養(yǎng)基(i-cm和h-cm)及其相應(yīng)的成脂和成骨誘導(dǎo)液。然后,觀察細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),兩種cms對(duì)兩種pdlscs克隆形成、增殖和成脂/成骨分化潛能的影響。本實(shí)驗(yàn)分為4組:h-pdlscs在健康條件培養(yǎng)基(h-cm)中培養(yǎng)(hc-hm);h-pdlscs在“炎癥”條件培養(yǎng)基(i-cm)中培養(yǎng)(hc-im);i-pdlscs在健康條件培養(yǎng)基(h-cm)中培養(yǎng)(ic-hm);i-pdlscs在“炎癥”條件培養(yǎng)基(i-cm)中培養(yǎng)(ic-im)。其中hc-hm作為陽性對(duì)照組;ic-im作為陰性對(duì)照組。3、同一患者i-pdlscs和h-pdlscs直接共培養(yǎng)體系中的相互作用。將來源于同一患者的i-pdlscs和h-pdlscs按照不同比例直接混合共培養(yǎng),通過觀察混合細(xì)胞整體的增殖、成骨分化、膜片形成能力以及膜片體內(nèi)新骨形成能力,進(jìn)一步分析兩種pdlscs混合后,細(xì)胞生物學(xué)性能的變化情況。實(shí)驗(yàn)分為5組,其中75%i-pdlscs混合25%h-pdlscs共培養(yǎng)組(75%ic+25%hc),50%i-pdlscs混合50%h-pdlscs共培養(yǎng)組(50%ic+50%hc)和25%i-pdlscs混合75%h-pdlscs共培養(yǎng)組(25%ic+75%hc)為3個(gè)細(xì)胞共培養(yǎng)組。i-pdlscs單獨(dú)培養(yǎng)組(100%ic)和h-pdlscs單獨(dú)培養(yǎng)組(100%hc)分別為“炎癥”和健康細(xì)胞對(duì)照組。4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。本研究中的每個(gè)實(shí)驗(yàn)均設(shè)置了3個(gè)平行組并求平均值,以盡量減少人為操作所產(chǎn)生的誤差。然后,采用spss18.0軟件中的隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)方差分析和tukey事后檢驗(yàn)方法,對(duì)各樣本所得平均值(6組)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。研究結(jié)果中所有計(jì)量資料均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示。p0.05表示相應(yīng)兩組之間存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。研究結(jié)果:1、第一部分顯示,I-PDLSCs和H-PDLSCs均陽性表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物(STRO-1、CD146、CD105和CD90),而陰性表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)記物(CD31和CD34)。2、第二部分顯示,細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí),盡管I-PDLSCs和H-PDLSCs在I-CM和H-CM培養(yǎng)微環(huán)境中的成脂分化潛能相似,但是,和H-CM相比,兩種PDLSCs在I-CM體外培養(yǎng)微環(huán)境中的增殖能力明顯增高,而成骨分化能力明顯減弱。更重要的是,本研究表明,當(dāng)I-PDLSCs的體外培養(yǎng)微環(huán)境更換為H-CM成骨誘導(dǎo)液時(shí)(IC-HM),其受損的成骨分化潛能可以得到一定程度的恢復(fù)。3、第三部分顯示,I-PDLSCs和H-PDLSCs直接共培養(yǎng)時(shí),兩種細(xì)胞可以共存,且I-PDLSCs所占的百分比呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)。同時(shí),相對(duì)于H-PDLSCs單獨(dú)培養(yǎng),添加的I-PDLSCs可以促進(jìn)細(xì)胞的整體增殖速度。相對(duì)于I-PDLSCs單獨(dú)培養(yǎng),含有H-PDLSCs共培養(yǎng)組的成骨分化能力明顯增高,而且在共培養(yǎng)體系中,只要H-PDLSCs的添加量達(dá)到50%以上,混合細(xì)胞整體的體外成骨能力和體內(nèi)新骨再生潛能均接近于H-PDLSCs單獨(dú)培養(yǎng)組。研究結(jié)論:1、從同一患者口內(nèi)是可以同時(shí)分離培養(yǎng)出I-PDLSCs和H-PDLSCs,且其均具有間充質(zhì)干細(xì)胞的典型表征,是深入研究I-PDLSCs的良好研究對(duì)象。2、同一患者來源的I-CM和H-CM存在差異,且通過改變I-PDLSCs的體外培養(yǎng)微環(huán)境(H-CM),可以在一定程度上恢復(fù)其受損的成骨分化潛能。3、在一些臨床情況下,同一患者來源I-PDLSCs和H-PDLSCs直接共培養(yǎng),可以作為一種簡(jiǎn)單有效的獲得自體PDLSCs材料的方法,即當(dāng)H-PDLSCs來源不足時(shí),I-PDLSCs可以作為一種輔助的細(xì)胞來源,直接和H-PDLSCs混合后,應(yīng)用于組織再生治療;當(dāng)H-PDLSCs來源充足時(shí),添加少量的同一患者來源I-PDLSCs(低于總體的25%),可以在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)得到更多的PDLSCs。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 牙周膜 炎癥 細(xì)胞條件培養(yǎng)基 細(xì)胞共培養(yǎng) 細(xì)胞增殖分化 細(xì)胞材料
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781.4
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-26
• 1 牙周膜干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)17-18
• 2 健康牙周膜干細(xì)胞（H-PDLSCs）的研究進(jìn)展18-20
• 2.1 H-PDLSCs的定義18
• 2.2 H-PDLSCs臨床前研究18-19
• 2.3 H-PDLSCs臨床研究19-20
• 3 “炎癥”牙周膜干細(xì)胞（I-PDLSCs）的研究進(jìn)展20-21
• 3.1 I-PDLSCs的發(fā)現(xiàn)和定義20
• 3.2 I-PDLSCs的性能特點(diǎn)20-21
• 4 I-PDLSCs臨床應(yīng)用策略探討21-26
• 4.1 細(xì)胞間接共培養(yǎng)方法22-24
• 4.2 細(xì)胞直接共培養(yǎng)方法24-26
• 第一部分 同一患者I-PDLSCs和H-PDLSCs的分離、培養(yǎng)和鑒定26-31
• 1 材料27
• 2 方法27-28
• 3 結(jié)果28-29
• 4 討論29-31
• 第二部分 同一患者I-PDLSCs和H-PDLSCs間接共培養(yǎng)體系中的相互作用31-43
• 1 材料32
• 2 方法32-36
• 3 結(jié)果36-41
• 4 討論41-43
• 第三部分 同一患者I-PDLSCs和H-PDLSCs直接共培養(yǎng)體系中的相互作用43-57
• 1 材料44
• 2 方法44-48
• 3 結(jié)果48-55
• 4 討論55-57
• 小結(jié)57-59
• 參考文獻(xiàn)59-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果69-70
• 致謝70-71

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本文編號(hào)：1009661