本文關(guān)鍵詞：淀粉樣前體蛋白β位點(diǎn)單鏈抗體抑制β淀粉樣肽的分泌

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【摘要】：目的觀察淀粉樣前體蛋白(APP)β位點(diǎn)單鏈抗體(sc Fv)對APP的α和β代謝的影響,為其作為APPβ分泌酶特異抑制劑奠定基礎(chǔ)。方法以APPβ位點(diǎn)sc Fv 2H10基因序列為模板,通過PCR引入Igκ輕鏈信號序列和myc標(biāo)簽,與真核表達(dá)載體pc DNA3.1hyg(~+)相連,轉(zhuǎn)染過表達(dá)人瑞典突變型淀粉樣前體蛋白695(APP695)的CHO細(xì)胞株(APP695sw/CHO),經(jīng)潮霉素B篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,用夾心ELISA檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株培養(yǎng)上清中Aβ40和分泌型APPα(s APPα)的含量,并分別比較兩者的變化。結(jié)果經(jīng)PCR、酶切和測序鑒定證明,獲得引入Igκ分泌信號和myc標(biāo)簽的APPβ位點(diǎn)sc Fv基因片段,且與真核表達(dá)載體正確相連。轉(zhuǎn)染APP695sw/CHO細(xì)胞后,經(jīng)潮霉素B篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株;Western blot法可檢測到目的蛋白表達(dá),ELISA結(jié)果顯示,與對照相比,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)上清Aβ40分泌量約下降30.4%、s APPα水平上升23.1%。結(jié)論 APPβ位點(diǎn)sc Fv在抑制Aβ分泌的同時(shí)還可能有利于APP的α代謝,可作為β分泌酶高特異性抑制劑。
【作者單位】： 武漢市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所;武漢大學(xué)人民醫(yī)院兒科;
【關(guān)鍵詞】： 淀粉樣前體蛋白 β位點(diǎn) 單鏈抗體 β淀粉樣肽 α代謝 阿爾茨海默病
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30500085,81000094) 湖北省自然科學(xué)基金(2009CDB336) 武漢市衛(wèi)計(jì)委課題(WX09B13,WX14C71)
【分類號】：R749.16
【正文快照】： 阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)最主要的病理改變包括腦組織細(xì)胞外淀粉樣斑塊形成和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié),而一種名為β淀粉樣肽(β-amyloid peptide,Aβ)的小分子多肽過量產(chǎn)生、聚集和沉積,是形成淀粉樣變的重要早期事件,Aβ可通過自組裝形成腦組織中可溶性寡聚

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5 李e，

本文編號：948569