本文關(guān)鍵詞：阻斷內(nèi)源性p75NTR對PTSD大鼠的治療作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙 p75NTR 海馬 凋亡 突觸可塑性

【摘要】：創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(Post-traumatic stress disorder,PTSD)是指個體經(jīng)歷突發(fā)性、威脅性或災(zāi)難性生活事件后,使個體延遲出現(xiàn)和長期持續(xù)存在的精神障礙。目前,臨床上PTSD的癥狀主要有重現(xiàn)創(chuàng)傷性體驗、情感麻痹冷漠、警覺性增高且易激惹、失眠、情緒起伏大等。PTSD不僅導(dǎo)致個體生活質(zhì)量下降、社會職業(yè)功能受損,而且還經(jīng)常和物質(zhì)濫用、抑郁障礙、焦慮障礙、恐懼癥等共病,給家庭及社會造成長期而持續(xù)的負(fù)面影響。因此,深入探討PTSD的發(fā)生機(jī)制、尋求有效的治療靶點,對于發(fā)展持久有效的預(yù)防和治療措施具有重要的指導(dǎo)意義。p75神經(jīng)營養(yǎng)素受體(p75 neurotrophic receptor,p75NTR)作為一種低親和力、多效能的神經(jīng)營養(yǎng)素受體,在調(diào)控細(xì)胞凋亡、軸突生長、細(xì)胞周期等方面具有重要作用。p75NTR的激活除可促進(jìn)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)與酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase B,Trk B)高親和性受體結(jié)合介導(dǎo)神經(jīng)元的再生,還可作為Nogo-66受體(Nogo-66 recptor,Ng R)的協(xié)同受體參與神經(jīng)元突起生長的抑制作用。臨床資料顯示,p75NTR可通過Caspase-9和pro-BDNF介導(dǎo)神經(jīng)元的凋亡,導(dǎo)致PTSD患者海馬和杏仁核體積減小;另一方面,PTSD患者的創(chuàng)傷性記憶持久存在并易于激活,這種恐懼性記憶可通過p75NTR和pro-BDNF介導(dǎo)突觸可塑性的雙向調(diào)節(jié)來實現(xiàn)。因此,p75NTR作為一個新的治療靶點,可能參與PTSD的病理生理過程。基于以上研究,本實驗通過側(cè)腦室注射(Intracerebroventricular injection,ICV)前期我們通過基因工程方法制備的p75NTR胞外域(extracellular domain,ED)與Ig G Fc融合蛋白(p75NTR-ED-Fc)來拮抗內(nèi)源性p75NTR的活性,并通過行為學(xué)鑒定和組織學(xué)檢測評價治療效果,同時探討p75NTR在海馬神經(jīng)元凋亡及突觸改變中的作用及分子機(jī)制,為篩選治療PTSD患者的藥物提供可靠的新型靶點。主要研究內(nèi)容:1.動物模型的制備與給藥干預(yù)將8周齡的雌性SD大鼠隨機(jī)分為Control組、PTSD+p75NTR-ED-Fc組、PTSD+NS組及PTSD組,采用單一連續(xù)刺激(Single-prolonged stress,SPS)法制備PTSD動物模型,對PTSD+p75NTR-ED-Fc組進(jìn)行給藥干預(yù),對PTSD+NS組給予等量的生理鹽水。2.行為學(xué)鑒定采用曠場實驗、高架十字迷宮、Morris水迷宮實驗對實驗大鼠進(jìn)行行為學(xué)測定,通過行為學(xué)數(shù)據(jù)比較各組之間的差異,初步評價治療效果。3.組織形態(tài)學(xué)研究采用HE染色、NISSL染色及Golgi-cox染色的方法觀察各組海馬神經(jīng)元及樹突棘的基本結(jié)構(gòu)與形態(tài)。4.分子機(jī)制研究采用免疫熒光染色的方法檢測與神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白如p75NTR、Bcl-2及Caspase-3的表達(dá),檢測與神經(jīng)突觸可塑性相關(guān)因子如Synapsin I、p CREB及ROCK-2的表達(dá)。評價治療效果的同時,探討PTSD發(fā)生機(jī)制。主要結(jié)果及結(jié)論:1.行為學(xué)結(jié)果:(1)拒俘反應(yīng):PTSD組大鼠拒俘反應(yīng)性得分顯著高于Control組(P0.01),而PTSD+p75NTR-ED-Fc組拒俘得分顯著低于PTSD組(P0.05)。(2)曠場實驗:PTSD組與Control組的梳理次數(shù)、站立次數(shù)、靜止時間均有顯著性差異(P0.01),PTSD+p75NTR-ED-Fc組大鼠在中央?yún)^(qū)域停留時間顯著高于PTSD組(P0.01)。(3)高架十字迷宮:PTSD+p75NTR-ED-Fc組前往開臂的次數(shù)與開臂停留時間均顯著高于PTSD組(P0.01);(4)在水迷宮實驗:PTSD組與Control組在定位航行的第2、3、6天第一次尋靶潛伏期無顯著性差異,而PTSD組在第1、4、5天潛伏期顯著性延長(P0.01),PTSD+p75NTR-ED-Fc組的與PTSD組在定位航行的第1、4、5天有顯著性差異;空間探索實驗中,PTSD+p75NTR-ED-Fc組與PTSD組在象限停留時間與穿臺次數(shù)也有顯著性差異。上述結(jié)果表明,側(cè)腦室注射p75NTR-ED-Fc能在一定程度上降低攻擊行為和逃避行為、增加其活動能力、緩解焦慮狀態(tài)、增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶水平,對PTSD大鼠行為學(xué)具有一定程度的改善作用。2.組織形態(tài)學(xué)實驗結(jié)果:Control組CA3區(qū)細(xì)胞密集均勻分布,結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞大小均一,CA1區(qū)椎體細(xì)胞的基樹突數(shù)目較多,且輻射層中椎體細(xì)胞的頂樹突干均勻發(fā)出側(cè)枝;PTSD組CA3區(qū)神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清晰,細(xì)胞碎片多,CA1區(qū)椎體細(xì)胞數(shù)目幾乎可數(shù),分布稀疏,且只有少數(shù)椎體細(xì)胞著色;PTSD+p75NTR-ED-Fc組CA3區(qū)細(xì)胞密集,形態(tài)大小無明顯差異,結(jié)構(gòu)較清晰,CA1區(qū)的輻射層中可見明顯的椎體細(xì)胞,分布均勻,分支夾角大,DG區(qū)可見多個大型苔蘚細(xì)胞,密集程度明顯比PTSD高。表明,p75NTR-ED-Fc對PTSD大鼠的行為學(xué)改善作用可能與海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用及樹突棘數(shù)目及形態(tài)有關(guān)。3.分子機(jī)制實驗結(jié)果:TUNEL凋亡檢測結(jié)果顯示,與Control組相比,PTSD組海馬凋亡神經(jīng)元數(shù)量顯著偏高,且海馬體DG區(qū)Bcl-2、Synapsin I及p CREB表達(dá)水平顯著降低,而p75NTR、Caspase-3及ROCK-2表達(dá)量則顯著上調(diào)。而與PTSD組比,PTSD+p75NTR-ED-Fc組海馬DG區(qū)被TUNEL染色標(biāo)記的陽性細(xì)胞數(shù)量顯著降低(P0.01),且Bcl-2、Synapsin I及p CREB的表達(dá)量明顯上調(diào),而p75NTR、Caspase-3及ROCK-2的表達(dá)量則顯著下調(diào)。提示,p75NTR-ED-Fc對PTSD大鼠的行為學(xué)改善作用可能是通過海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用及突觸可塑性調(diào)節(jié)來實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙 p75NTR 海馬 凋亡 突觸可塑性
【學(xué)位授予單位】：重慶理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.5
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 英文縮寫標(biāo)注12-14
• 緒論14-20
• 1. 創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙14-15
• 2. p75NTR神經(jīng)營養(yǎng)素受體15-17
• 3. p75NTR與PTSD的關(guān)系17-20
• 3.1 p75NTR是介導(dǎo)PTSD發(fā)生的一個新的作用靶點17
• 3.2 p75NTR可能通過促凋亡效應(yīng)介導(dǎo)PTSD的發(fā)生17-18
• 3.3 p75NTR可能通過調(diào)節(jié)突觸可塑性介導(dǎo)PTSD的發(fā)生18-20
• 第一部分 PTSD動物模型的制備和給藥干預(yù)20-26
• 1.1 實驗材料20-21
• 1.1.1 實驗動物20
• 1.1.2 主要實驗儀器20
• 1.1.3 主要試劑20-21
• 1.2 實驗方法21-24
• 1.2.1 實驗動物分組21
• 1.2.2 實驗路線21
• 1.2.3 PTSD動物模型的制備21-22
• 1.2.4 側(cè)腦室連續(xù)給藥22-23
• 1.2.5 實驗動物EAE檢測23-24
• 1.3 實驗結(jié)果24-26
• 1.3.1 制備動物模型及給藥模型24
• 1.3.2 動物行為的初步評估24-26
• 第二部分 側(cè)腦室注射p75NTR-ED-Fc對PTSD大鼠治療效果評價26-54
• 2.1 實驗材料26-29
• 2.1.1 主要實驗儀器26
• 2.1.2 主要實驗試劑26-28
• 2.1.3 主要實驗試劑配置28-29
• 2.1.4 主要實驗軟件29
• 2.2 實驗方法29-36
• 2.2.1 行為學(xué)方法評價29-32
• 2.2.1.1 拒俘反應(yīng)性檢測30
• 2.2.1.2 曠場實驗30
• 2.2.1.3 高架十字迷宮實驗30-31
• 2.2.1.4 Morris水迷宮實驗31
• 2.2.1.5 統(tǒng)計學(xué)處理方法31-32
• 2.2.2 組織學(xué)方法評價32-36
• 2.2.2.1 病理染色32-34
• 2.2.2.2 Golgo-Cox染色34
• 2.2.2.3 TUNEL檢測34-35
• 2.2.2.4 免疫熒光35-36
• 2.2.3 數(shù)據(jù)的采集及分析36
• 2.3 實驗結(jié)果36-52
• 2.3.1 行為學(xué)數(shù)據(jù)結(jié)果36-44
• 2.3.1.1 拒俘反應(yīng)36-37
• 2.3.1.2 曠場實驗37-39
• 2.3.1.3 高架十字迷宮實驗39-40
• 2.3.1.4 Morris水迷宮實驗40-44
• 2.3.2 組織學(xué)檢測結(jié)果44-52
• 2.3.2.1 病理染色44-47
• 2.3.2.2 Golgi-Cox染色47-48
• 2.3.2.3 TUNEL檢測48-49
• 2.3.2.4 免疫熒光染色49-52
• 2.4 結(jié)論52-54
• 討論54-57
• 全文總結(jié)57-58
• 致謝58-60
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 個人簡歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及取得的研究成果64-65

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號：888150