本文關鍵詞：視黃醇X受體出核抑制對神經元細胞凋亡的影響

  更多相關文章： Aβ 9-cis-RA 阿爾茨海默病 RXRα Nur77 核質穿梭 凋亡

【摘要】：目的:檢測AD病理狀態(tài)下N2a細胞、小鼠海馬組織RXRα亞細胞定位及神經元過度凋亡的改變,利用RXRα配體9-cis-RA抑制RXRα出核,研究這種抑制作用對神經元細胞過度凋亡的影響。方法:以分別經過Aβ、Aβ及9-cis-RA共處理的N2a細胞、C57BL/6小鼠及其對照組為研究對象。N2a細胞采用細胞培養(yǎng)方法進行培養(yǎng),按照實驗要求和目的分組培養(yǎng)以及細胞搜集與處理,包括蛋白提取、核質分離與細胞爬片等;C57BL/6小鼠根據實驗要求和目的分組進行藥物海馬定位注射并在規(guī)定時間內進行飼養(yǎng),并及時取腦,對海馬組織進行蛋白提取、核質分離與制作腦切片等。N2a細胞應用Western Blot、實時熒光定量PCR及核質分離等技術分別檢測RXRα、Nur77蛋白總含量、mRNA表達水平及其在細胞核與細胞質中含量的變化,并通過細胞免疫熒光染色技術觀察RXRα、Nur77亞細胞定位;應用MTT、DAPI染色、流式細胞儀以及Bcl-2與Bax含量檢測等方法觀察細胞凋亡情況,并與上述RXRα、Nur77亞細胞定位關聯。C57BL/6小鼠應用Western Blot及核質分離等技術檢測海馬區(qū)RXRα、Nur77蛋白總含量及其在細胞核與細胞質中含量的變化,并在小鼠腦切片海馬區(qū)通過免疫熒光染色技術觀察RXRα、Nur77亞細胞定位;應用DAPI染色以及Bcl-2與Bax含量檢測等方法觀察細胞凋亡情況,并與上述RXRα、Nur77亞細胞定位關聯。結果:N2a細胞經Aβ處理24h后,RXRα和Nur77的mRNA表達水平及蛋白量均無明顯變化,但RXRα、Nur77在細胞質中的含量與分布增多,RXRα與Nur77分別從對照組的5.26%、4.85%增至Aβ25-35處理組的42.2%、35.5%;細胞凋亡率從對照組4.36%增至Aβ25-35處理組15.1%。而N2a細胞經9-cis-RA預先處理12h,再經Aβ處理24h后,與未經9-cis-RA預先處理的對照組比較,RXRα和Nur77的mRNA表達水平及總蛋白量均無明顯變化,但RXRα、Nur77在細胞質中的含量與分布明顯減少,分別從對照組的42.2%、35.5%減少至9-cis-RA處理組的6.67%、5.44%;細胞凋亡率從對照組15.1%減至9-cis-RA處理組5.31%。C57BL/6小鼠經Aβ處理24h后,RXRα、Nur77總蛋白量變化無明顯差異,但RXRα、Nur77在細胞質中的含量與分布增多,分別從對照組的26.1%、11.1%增至Aβ25-35處理組的59.2%、73.7%;細胞凋亡也明顯增多。而C57BL/6小鼠經9-cis-RA預先處理12h,再經Aβ處理24h后,與未經9-cis-RA預先處理的對照組比較,RXRα、Nur77總蛋白量變化無明顯差異,但RXRα、Nur77在細胞質中的含量與分布減少,分別從對照組的59.2%、73.7%減少至9-cis-RA處理組的30.2%、19.8%;細胞凋亡也明顯相應減少。結論:Aβ處理可導致RXRα、Nur77出核;Aβ處理可誘導神經元細胞凋亡;RXRα出核抑制可降低由Aβ引發(fā)的神經元細胞凋亡。
【關鍵詞】：Aβ 9-cis-RA 阿爾茨海默病 RXRα Nur77 核質穿梭 凋亡
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-26
• 1. 材料13-15
• 2. 方法15-26
• 2.1 細胞培養(yǎng)15-16
• 2.2 AD模型小鼠構建16
• 2.3 Western Blot檢測 N2a 細胞和腦海馬中 RXRα、Nur77、Bax16-21
• 2.4 熒光定量PCR測定細胞中的 RXRα/Nur77 基因的 m RNA 表21-22
• 2.5 細胞免疫熒光測定細胞 RXRα 和 Nur77 蛋白的細胞亞定位22-23
• 2.6 冰凍切片免疫熒光測定 RXRα 和 Nur77 蛋白的亞細胞定位23-24
• 2.7 細胞凋亡檢測24-26
• 結果26-42
• 1. N2a細胞26-36
• 1.1 9-cis-RA抑制由Aβ 引發(fā)的RXRα 與Nur77出核26-32
• 1.2 9-cis-RA抑制由Aβ 引發(fā)的細胞凋亡32-36
• 2. 小鼠腦海馬組織36-42
• 2.1 9-cis-RA抑制由Aβ 引發(fā)的RXRα 與Nur77出核36-39
• 2.2 9-cis-RA抑制由Aβ 引發(fā)的細胞凋亡39-42
• 討論42-45
• 結論45-46
• 參考文獻46-49
• 綜述49-58
• 參考文獻55-58
• 致謝58

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 鄧鈺蕾;陳生弟;;阿爾茨海默病治療研究在困境中進展[J];中國實用內科雜志;2011年01期

2 賈敏;劉靜yN;劉毅;栗莉;裴海峰;劉佩林;王瀚;王海昌;陶凌;;Nur77在缺氧/復氧誘導的心肌細胞凋亡中的作用及其機制的研究[J];現代生物醫(yī)學進展;2012年03期

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本文編號：831120