本文關(guān)鍵詞：視黃醇X受體出核抑制對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： Aβ 9-cis-RA 阿爾茨海默病 RXRα Nur77 核質(zhì)穿梭 凋亡

【摘要】：目的:檢測(cè)AD病理狀態(tài)下N2a細(xì)胞、小鼠海馬組織RXRα亞細(xì)胞定位及神經(jīng)元過度凋亡的改變,利用RXRα配體9-cis-RA抑制RXRα出核,研究這種抑制作用對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞過度凋亡的影響。方法:以分別經(jīng)過Aβ、Aβ及9-cis-RA共處理的N2a細(xì)胞、C57BL/6小鼠及其對(duì)照組為研究對(duì)象。N2a細(xì)胞采用細(xì)胞培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng),按照實(shí)驗(yàn)要求和目的分組培養(yǎng)以及細(xì)胞搜集與處理,包括蛋白提取、核質(zhì)分離與細(xì)胞爬片等;C57BL/6小鼠根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和目的分組進(jìn)行藥物海馬定位注射并在規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行飼養(yǎng),并及時(shí)取腦,對(duì)海馬組織進(jìn)行蛋白提取、核質(zhì)分離與制作腦切片等。N2a細(xì)胞應(yīng)用Western Blot、實(shí)時(shí)熒光定量PCR及核質(zhì)分離等技術(shù)分別檢測(cè)RXRα、Nur77蛋白總含量、mRNA表達(dá)水平及其在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中含量的變化,并通過細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)觀察RXRα、Nur77亞細(xì)胞定位;應(yīng)用MTT、DAPI染色、流式細(xì)胞儀以及Bcl-2與Bax含量檢測(cè)等方法觀察細(xì)胞凋亡情況,并與上述RXRα、Nur77亞細(xì)胞定位關(guān)聯(lián)。C57BL/6小鼠應(yīng)用Western Blot及核質(zhì)分離等技術(shù)檢測(cè)海馬區(qū)RXRα、Nur77蛋白總含量及其在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中含量的變化,并在小鼠腦切片海馬區(qū)通過免疫熒光染色技術(shù)觀察RXRα、Nur77亞細(xì)胞定位;應(yīng)用DAPI染色以及Bcl-2與Bax含量檢測(cè)等方法觀察細(xì)胞凋亡情況,并與上述RXRα、Nur77亞細(xì)胞定位關(guān)聯(lián)。結(jié)果:N2a細(xì)胞經(jīng)Aβ處理24h后,RXRα和Nur77的mRNA表達(dá)水平及蛋白量均無明顯變化,但RXRα、Nur77在細(xì)胞質(zhì)中的含量與分布增多,RXRα與Nur77分別從對(duì)照組的5.26%、4.85%增至Aβ25-35處理組的42.2%、35.5%;細(xì)胞凋亡率從對(duì)照組4.36%增至Aβ25-35處理組15.1%。而N2a細(xì)胞經(jīng)9-cis-RA預(yù)先處理12h,再經(jīng)Aβ處理24h后,與未經(jīng)9-cis-RA預(yù)先處理的對(duì)照組比較,RXRα和Nur77的mRNA表達(dá)水平及總蛋白量均無明顯變化,但RXRα、Nur77在細(xì)胞質(zhì)中的含量與分布明顯減少,分別從對(duì)照組的42.2%、35.5%減少至9-cis-RA處理組的6.67%、5.44%;細(xì)胞凋亡率從對(duì)照組15.1%減至9-cis-RA處理組5.31%。C57BL/6小鼠經(jīng)Aβ處理24h后,RXRα、Nur77總蛋白量變化無明顯差異,但RXRα、Nur77在細(xì)胞質(zhì)中的含量與分布增多,分別從對(duì)照組的26.1%、11.1%增至Aβ25-35處理組的59.2%、73.7%;細(xì)胞凋亡也明顯增多。而C57BL/6小鼠經(jīng)9-cis-RA預(yù)先處理12h,再經(jīng)Aβ處理24h后,與未經(jīng)9-cis-RA預(yù)先處理的對(duì)照組比較,RXRα、Nur77總蛋白量變化無明顯差異,但RXRα、Nur77在細(xì)胞質(zhì)中的含量與分布減少,分別從對(duì)照組的59.2%、73.7%減少至9-cis-RA處理組的30.2%、19.8%;細(xì)胞凋亡也明顯相應(yīng)減少。結(jié)論:Aβ處理可導(dǎo)致RXRα、Nur77出核;Aβ處理可誘導(dǎo)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡;RXRα出核抑制可降低由Aβ引發(fā)的神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：Aβ 9-cis-RA 阿爾茨海默病 RXRα Nur77 核質(zhì)穿梭 凋亡
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-26
• 1. 材料13-15
• 2. 方法15-26
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)15-16
• 2.2 AD模型小鼠構(gòu)建16
• 2.3 Western Blot檢測(cè) N2a 細(xì)胞和腦海馬中 RXRα、Nur77、Bax16-21
• 2.4 熒光定量PCR測(cè)定細(xì)胞中的 RXRα/Nur77 基因的 m RNA 表21-22
• 2.5 細(xì)胞免疫熒光測(cè)定細(xì)胞 RXRα 和 Nur77 蛋白的細(xì)胞亞定位22-23
• 2.6 冰凍切片免疫熒光測(cè)定 RXRα 和 Nur77 蛋白的亞細(xì)胞定位23-24
• 2.7 細(xì)胞凋亡檢測(cè)24-26
• 結(jié)果26-42
• 1. N2a細(xì)胞26-36
• 1.1 9-cis-RA抑制由Aβ 引發(fā)的RXRα 與Nur77出核26-32
• 1.2 9-cis-RA抑制由Aβ 引發(fā)的細(xì)胞凋亡32-36
• 2. 小鼠腦海馬組織36-42
• 2.1 9-cis-RA抑制由Aβ 引發(fā)的RXRα 與Nur77出核36-39
• 2.2 9-cis-RA抑制由Aβ 引發(fā)的細(xì)胞凋亡39-42
• 討論42-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 綜述49-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 鄧鈺蕾;陳生弟;;阿爾茨海默病治療研究在困境中進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志;2011年01期

2 賈敏;劉靜yN;劉毅;栗莉;裴海峰;劉佩林;王瀚;王海昌;陶凌;;Nur77在缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制的研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年03期

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本文編號(hào)：831120