本文關(guān)鍵詞：維甲酸類化合物影響星形膠質(zhì)細(xì)胞載脂蛋白-E（AoiE）分泌水平及相關(guān)機(jī)制的研究

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【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是老年人群中主要的癡呆類型。腦內(nèi)淀粉樣前體蛋白水解產(chǎn)生的淀粉樣蛋白(Amyloid-β, Aβ)的聚集和沉積被認(rèn)為是AD病理發(fā)生的中心事件。盡管多種基因和環(huán)境相關(guān)因素參與了AD的病理發(fā)生,而在晚發(fā)型AD病人中,載脂蛋白E4 (apolipoprotein E,ApoE)基因是迄今為止公認(rèn)的最重要的風(fēng)險(xiǎn)因子,ApoE2則被認(rèn)為是保護(hù)因子。不同的ApoE亞型通過(guò)Ap依賴性和Ap非依賴性的途徑調(diào)節(jié)著AD的病理發(fā)生。和ApoE3相比,ApoE4抑制腦內(nèi)Ap清除,繼而加劇Ap沉積導(dǎo)致老年斑形成和血管淀粉樣變性。有趣的是,在ApoE4攜帶者和AD病人中,腦脊液中ApoE蛋白水平均明顯降低[7],而且有報(bào)道稱腦內(nèi)總膽固醇水平低下可以增加AD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。因此,增高腦內(nèi)ApoE和膽固醇水平可能會(huì)是有效的AD治療策略。事實(shí)上,已經(jīng)有研究證實(shí)肝X受體(liver X receptor, LXR)激動(dòng)劑T0091317和維甲酸X受體(retinoid X receptor, RXR)激動(dòng)劑貝沙羅汀可以通過(guò)升高ApoE水平和ApoE脂質(zhì)化從而改善記憶和降低Ap水平。然而,盡管現(xiàn)有相關(guān)藥物在嚙齒類動(dòng)物模型中表現(xiàn)出明顯的效果,但仍然因?yàn)槠涠拘远绊懥怂幬镌谌梭w臨床試驗(yàn)的開(kāi)展。為尋找新的ApoE調(diào)節(jié)藥物,我們使用永生化ApoE3定向置換小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)一個(gè)由480個(gè)已知生物活性的化合物組成的庫(kù)進(jìn)行篩選,隨后對(duì)篩選出的結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證和分析,并對(duì)部分化合物進(jìn)行相關(guān)機(jī)制研究,得到如下結(jié)果：1.通過(guò)對(duì)480個(gè)化合物的篩選,我們發(fā)現(xiàn)了14個(gè)升高ApoE分泌水平的化合物和27個(gè)降低ApoE水平的化合物。而在這14個(gè)升高ApoE的化合物中包括維甲酸家族成員全反式維甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA),9-順式維甲酸(9-cis retinoic acid,9RA)和13-順式維甲酸(13-cis retinoic acid,13RA)。我們通過(guò)進(jìn)一步的驗(yàn)證研究發(fā)現(xiàn)這三種維甲酸類化合物和貝沙羅汀能夠以劑量依賴性的方式升高ApoE蛋白水平,同時(shí)qRT-PCR檢測(cè)出在這些藥物作用下,ApoE的轉(zhuǎn)錄水平也有明顯升高。我們還證實(shí)維甲酸類化合物能增高原代ApoE3和ApoE4定向置換(targeted replacement,TR)小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的分泌型ApoE水平,表明維甲酸類化合物的作用并非細(xì)胞系特異性反應(yīng)。2.在隨后的機(jī)制研究中,我們首先發(fā)現(xiàn)維甲酸類化合物和貝沙羅汀通過(guò)升高ATP結(jié)合盒運(yùn)載蛋白A1 (ATP binding cassette A1 protein, ABCA1)和ATP結(jié)合盒運(yùn)載蛋白G1 (ATP binding cassette G1 protein, ABCG1)的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平,從而升高ApoE旨質(zhì)化,間接升高ApoE水平。維甲酸類化合物和貝沙羅汀并不影響ApoE的清除降解過(guò)程,其不改變ApoE相關(guān)受體LRP1和LDLR的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平。同時(shí)我們證實(shí)維甲酸類化合物和貝沙羅汀通過(guò)維甲酸X受體/維甲酸受體(retinoid X receptor/retinoic acid receptor, RXR/RAR)通路影響ApoE的生成和脂質(zhì)化,而LXR可能也在整個(gè)通路中發(fā)揮了重要的作用。我們?cè)隗w外研究了維甲酸類化合物和Aβ直接的相互作用,表明維甲酸類化合物以ApoE依賴性的方式影響星形膠質(zhì)細(xì)胞Ap內(nèi)吞,同時(shí)能夠在Ap毒性作用下保護(hù)神經(jīng)元。3.最后,我們?cè)趧?dòng)物模型上對(duì)維甲酸類化合物的作用和毒性進(jìn)行了基礎(chǔ)性的評(píng)估,證實(shí)了9-順式維甲酸和貝沙羅汀能夠增高ApoE-TR小鼠腦內(nèi)ApoE、ABCAl、ABCG1水平,同時(shí)無(wú)明顯的毒性作用,為我們進(jìn)一步的動(dòng)物模型研究奠定了基礎(chǔ)。綜上,我們的研究發(fā)現(xiàn)包括多個(gè)維甲酸類化合物在內(nèi)的RXR/RAR通路激動(dòng)劑能夠有效的調(diào)節(jié)ApoE水平和脂質(zhì)化,或許可以成為有效的AD治療藥物。
【關(guān)鍵詞】：淀粉樣蛋白 載脂蛋白-E 阿爾茨海默病 維甲酸 維甲酸受體 維甲酸X受體
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 縮略詞表8-10
• 前言10-14
• 第一部分14-31
• 材料和方法14-20
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-28
• 討論28-31
• 第二部分31-67
• 第一節(jié) 維甲酸類化合物通過(guò)調(diào)節(jié)ABCA1和ABCG1影響ApoE分泌水平31-45
• 材料和方法31-40
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-45
• 第二節(jié) LXR/RXR/RAR通路參與維甲酸類化合物的作用機(jī)制45-53
• 材料和方法45-48
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-53
• 第三節(jié) 維甲酸類化合物在體外對(duì)AP清除和及其神經(jīng)毒性的影響53-67
• 材料和方法53-58
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果58-63
• 討論63-67
• 第三部分67-73
• 材料和方法67-69
• 結(jié)果69-71
• 討論71-73
• 全文總結(jié)73-75
• 參考文獻(xiàn)75-86
• 綜述86-98
• 參考文獻(xiàn)93-98
• 附錄98-99
• 致謝99-100

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本文編號(hào)：808440