本文關(guān)鍵詞：人臍血間充質(zhì)干細胞對糖尿病血管性癡呆大鼠的影響

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【摘要】：第一部分人臍血間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定和標記目的:研究人臍帶血間充質(zhì)干細胞體外分離、培養(yǎng)條件。方法選擇剖腹產(chǎn)手術(shù),取出胎兒后,將新生兒側(cè)臍帶結(jié)扎,用取血袋取臍帶血,共取20份,使用CAPD-1復合抗凝劑抗凝。將臍血稀釋后,6小時內(nèi)采取Ficoll密度梯度離心法收集單個核細胞。分離的單個核細胞以106/ml的密度接種于培養(yǎng)基中,放于37°C、5%二氧化碳細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),貼壁細胞達80%時消化傳代。流式細胞儀鑒定細胞。CM-Di I標記人臍血間充質(zhì)干細胞。結(jié)果20份人臍帶血有10份分離培養(yǎng)出HUCB-MSCs,成功率為50%。收集的單個核細胞接種于培養(yǎng)基后,24小時才開始有少部分細胞貼壁,貼壁的細胞開始增殖緩慢,5天后可見較多的細胞貼壁,4周左右能達到80%融合,以1:3比例進行傳代,細胞形態(tài)逐漸呈長梭狀和圓形。經(jīng)傳代擴增,有3份出現(xiàn)旋渦狀排列的間充質(zhì)樣細胞,其余冷保持但和楊的圓形細胞及少量梭形細胞混雜。培養(yǎng)的第3代細胞經(jīng)流式細胞儀鑒定表達了HUCB-MSCs抗原標記CD44,不表達造血細胞系表面標記CD34。結(jié)論人臍血可以分離培養(yǎng)出間充質(zhì)干細胞。能力的影響第二部分人臍血間充質(zhì)干細胞對糖尿病血管性癡呆大鼠學習記憶目的建立可復制的糖尿病血管性癡呆大鼠模型,探討人臍血間充質(zhì)干細胞對糖尿病血管性癡呆大鼠學習記憶能力的影響方法50只健康雄性Wistar大鼠隨機選擇40只,腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制作糖尿病模型,有30只大鼠造模成功。1周后2-VO制備血管性癡呆模型。存活的40只大鼠分為正常組(SHAM)、糖尿病(DM)組、血管性癡呆(DM+VD)組、人臍血間充質(zhì)干細胞(HUCB-MSCs)組,每組10只。DM組僅分離出雙側(cè)頸總動脈但不結(jié)扎;HUCB-MSCs組先經(jīng)頸總動脈注入HUCB-MSCs 2×106再結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈;DM+VD組先經(jīng)頸總動脈注入等量生理鹽水再結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈。HUCB-MSCs移植后4周進行Morris水迷宮實驗,測試大鼠學習記憶能力的變化結(jié)果與SHAM組相比,其余各組大鼠平均逃避潛伏期延長,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與DM+VD組比較,HUCB-MSCs組大鼠平均逃避潛伏期縮短,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與SHAM組相比,其余各組組大鼠穿越原平臺象限次數(shù)下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與DM+VD組比較,HUCB-MSCs組大鼠穿越原平臺象限次數(shù)增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論HUCB-MSCs經(jīng)頸總動脈移植后能改善糖尿病血管性癡呆大鼠的學習記憶能力。第三部分人臍血間充質(zhì)干細胞對糖尿病血管性癡呆大鼠海馬區(qū)Ch AT、神經(jīng)細胞凋亡的影響目的研究人臍血間充質(zhì)干細胞對糖尿病血管性癡呆大鼠海馬區(qū)Ch AT和神經(jīng)細胞凋亡的影響方法從健康雄性Wistar大鼠50只中隨機選擇40只,腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制作糖尿病模型,有30只大鼠造模成功。1周后2-VO制備血管性癡呆模型。40只大鼠分為正常組(SHAM)、糖尿病(DM)組、血管性癡呆(DM+VD)組、人臍血間充質(zhì)干細胞(HUCB-MSCs)組,每組10只。DM組僅分離出雙側(cè)頸總動脈但不結(jié)扎;HUCB-MSCs組先經(jīng)頸總動脈注入HUCB-MSCs 2×106再結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈;DM+VD組先經(jīng)頸總動脈注入等量生理鹽水再結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈。Morris水迷宮實驗后,免疫組化法觀察各組大鼠海馬神經(jīng)元膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(Ch AT)的變化。流式細胞儀檢測各組大鼠海馬組織神經(jīng)細胞凋亡。免疫熒光觀察CM-Di I標記的HUCB-MSCs是否能通過血腦屏障作用于大鼠腦組織中。結(jié)果熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)在糖尿病血管性癡呆大鼠腦組織中可見CM-Di I標記的HUCB-MSCs,證明HUCB-MSCs能透過血腦屏障作用于大鼠腦組織。與SHAM組相比,其余各組大鼠海馬Ch AT陽性神經(jīng)細胞數(shù)量降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與DM+VD組比較,HUCB-MSCs組大鼠海馬Ch AT陽性神經(jīng)細胞數(shù)量增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。流式細胞儀檢測大鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡:與SHAM組相比,其余各組大鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與DM+VD組比較,HUCB-MSCs組大鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論人臍血間充質(zhì)干細胞能通過增加糖尿病血管性癡呆大鼠海馬區(qū)Ch AT陽性神經(jīng)元數(shù)量,抑制海馬區(qū)神經(jīng)細胞凋亡,來改善糖尿病血管性癡呆大鼠學習記憶能力。小結(jié)1、可從人臍血中分離培養(yǎng)出間充質(zhì)干細胞。2、高糖高脂飲食加鏈脲佐菌素誘導糖尿病模型,2-VO制作血管性癡呆模型是一種可復制的糖尿病血管性癡呆模型。HUCB-MSCs經(jīng)頸總動脈移植后可進入大鼠腦組織,能夠改善糖尿病血管性癡呆大鼠的學習記憶能力。3、HUCB-MSCs能使糖尿病血管性癡呆大鼠海馬Ch AT陽性神經(jīng)元數(shù)量顯著增多,海馬區(qū)神經(jīng)細胞凋亡減少。
【關(guān)鍵詞】：人臍血 間充質(zhì)干細胞 血管性癡呆 移植 糖尿病 血管性癡呆 學習記憶能力 海馬 膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶 細胞凋亡
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R749.13
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 符號說明13-14
• 前言14
• 第一部分 人臍血間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定和標記14-20
• （一）材料和方法14-17
• （二）結(jié)果17-18
• （三）結(jié)論18-19
• （四）討論19-20
• 第二部分 人臍血間充質(zhì)干細胞對糖尿病血管性癡呆大鼠學習記憶能力的影響20-30
• （一）材料和方法20-24
• （二）結(jié)果24-27
• （三）結(jié)論27
• （四）討論27-30
• 第三部分 人臍血間充質(zhì)干細胞移植后糖尿病血管性癡呆大鼠海馬Ch AT、神經(jīng)細胞凋亡的變化30-41
• （一）材料和方法30-34
• （二）結(jié)果34-37
• （三）結(jié)論37-38
• （四）討論38-41
• 參考文獻41-50
• 文獻綜述50-63
• 參考文獻59-63
• 攻讀學位期間的研究成果63-64
• 致謝64-66

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1 陳同度,張昌穎;素食大鼠的貧血現(xiàn)象[J];營養(yǎng)學報;1957年04期

2 陳偉強;趙善廣;;自制注射用大鼠固定裝置[J];上海實驗動物科學;1992年04期

3 肖柳英,林培英,馮昭明,張丹;不同周齡的SD大鼠生理、生化及體重的正常值測定[J];中藥新藥與臨床藥理;1996年03期

4 李淑云;簡易大鼠灌胃器的制作[J];錦州醫(yī)學院學報;2001年04期

5 楊明智,陳積圣;一種大鼠抓取與固定的新工具介紹[J];上海實驗動物科學;2001年03期

6 戴英,陸群;復方H_(505)對Wistar大鼠外周血的血液流變學指標的影響[J];中國血液流變學雜志;2001年01期

7 韋應(yīng)波,孫喜慶,曹新生,姚永杰,馮岱雅,楊長斌;+Gz暴露時間對大鼠記憶功能和行為的影響[J];航天醫(yī)學與醫(yī)學工程;2003年01期

8 呂學軍,郭俊生,李敏,周利梅,張永娟;暈船大鼠體內(nèi)鐵含量的變化[J];中國職業(yè)醫(yī)學;2003年04期

9 湯仁仙,王迎偉,王慧,周峰;201A中藥合劑對大鼠抗腎小球基底膜腎炎病變的影響[J];徐州醫(yī)學院學報;2003年06期

10 孫同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陳偉;介紹一種簡易的大鼠保定方法[J];上海實驗動物科學;2004年01期

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1 尹音;孫振宇;胡敏;李冬霞;;持續(xù)性高正加速度對大鼠顳頜關(guān)節(jié)損傷的作用[A];第八屆全國顳下頜關(guān)節(jié)病學及（牙合）學大會論文匯編[C];2011年

2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號：799332