本文關(guān)鍵詞：磷酸二酯酶-4抑制劑FFPM對(duì)阿爾茨海默病的防治作用及機(jī)制的研究

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【摘要】：研究背景與目的：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)俗稱老年癡呆癥,是一種多發(fā)于老年期或老年前以進(jìn)行性認(rèn)知障礙為主要特征的中樞神經(jīng)退行性疾病,由德國(guó)神經(jīng)精神病學(xué)家Alois Alzheimer于1907年首次報(bào)道,并以其名字命名該疾病。AD的臨床癥狀主要表現(xiàn)為記憶力下降、行為異常、語(yǔ)言障礙和人格、運(yùn)動(dòng)能力的變化。p-淀粉樣蛋白(β-Amyloid, Aβ)假說(shuō)是目前最為公認(rèn)的病因?qū)W假說(shuō),一直以來(lái)科學(xué)家期望通過(guò)抑制腦內(nèi)Aβ的合成或清除Ap的方法來(lái)開(kāi)發(fā)新的AD治療藥物均未成功,提示Aβ也許并不是最理想的抗AD藥物靶標(biāo)。近年來(lái),隨著對(duì)AD發(fā)病機(jī)制的深入研究,大部分學(xué)者認(rèn)為簡(jiǎn)單的神經(jīng)遞質(zhì)和受體理論不能完全解釋AD的發(fā)病機(jī)制,也無(wú)從正確地指引新的抗AD藥物的開(kāi)發(fā)和疾病治療。AD的研究重點(diǎn)逐步從神經(jīng)遞質(zhì)和受體理論的研究深入到基因分子水平,尤其是腦內(nèi)第二信使系統(tǒng)、轉(zhuǎn)錄因子和突觸蛋白的表達(dá)等成為研究的熱點(diǎn)。磷酸二酯酶4 (Phosphodiesterase 4, PDE4)是環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)的特異性水解酶之一,根據(jù)基因型的不同分為PDE4A、 PDE4B、PDE4C和PDE4D四個(gè)亞型,可進(jìn)一步細(xì)分為25種亞亞型。PDE4作為抑郁癥、阿爾茨海默病和慢性阻塞性肺病等潛在治療靶點(diǎn)已被研究二十余年,但由于其高發(fā)的惡心嘔吐副作用至今仍未有被批準(zhǔn)用于精神類、神經(jīng)退行性疾病的PDE4抑制劑。PDE4抑制劑可通過(guò)抑制PDE4對(duì)cAMP的水解作用,使細(xì)胞內(nèi)cAMP水平升高,激活cAMP依賴性蛋白激酶A (protein kinase A, PKA),促使cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP response element binding protein, CREB)的第133位絲氨酸(ser133)磷酸化,即激活cAMP/PKA/CREB信號(hào)通路而發(fā)揮抗抑郁和促認(rèn)知作用。本課題組通過(guò)對(duì)現(xiàn)有PDE4抑制劑的結(jié)構(gòu)以及PDE4晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析,同時(shí)結(jié)合咯利普蘭發(fā)生不良反應(yīng)的可能機(jī)制,認(rèn)為尋找有效透過(guò)血腦屏障且對(duì)PDE4D有較好的選擇性和抑制活性的化合物,可能是發(fā)現(xiàn)安全有效PDE4抑制劑的途徑之一。前期研究顯示FFPM對(duì)PDE4D2的選擇性較PDE2A3、PDE5A1、PDE7A1和PDE9A2要高達(dá)2000倍,顯示出較好PDE4D抑制作用,對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷及炎癥反應(yīng)具有很好的改善和調(diào)節(jié)作用。然而關(guān)于其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中研究,尤其是AD,至今仍未有報(bào)道。因此,本研究將從PDE4酶活性抑制、藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)、作用機(jī)制、以及化合物致嘔吐不良反應(yīng)等多方面對(duì)FFPM進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià),以期發(fā)現(xiàn)安全有效的PDE4抑制劑為防治阿爾茨海默病提供理論支持。研究方法：(1)采用部分純化的人重組PDE4CAT、PDE4A4、PDE4B2、 PDE4C1及PDE4D4的cDNA表達(dá)蛋白,檢測(cè)多個(gè)濃度的FFPM對(duì)上述重組酶的抑制作用,并同時(shí)以PDE4抑制劑Rolipram作為對(duì)照藥,得到酶活性抑制曲線并計(jì)算FFPM的IC50值,確證FFPM是否為特異性PDE4抑制劑；采用氫溴酸東莨菪堿誘導(dǎo)C57小鼠AD模型,評(píng)價(jià)FFPM (0.06,0.12,0.24,0.48 mg/kg)對(duì)AD小鼠在Morris水迷宮獲得性實(shí)驗(yàn)和探索性實(shí)驗(yàn)中改善認(rèn)知功能的作用；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定C57小鼠血漿和腦組織中FFPM的濃度,研究FFPM在小鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)過(guò)程及血腦組織分布特點(diǎn),獲得主要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Tmax、Cmax、t1/2、MRT0-t、AUC0-t和AUC0-∞,以證明FFPM可有效地透過(guò)血腦屏障；采用氯胺酮和賽拉嗪聯(lián)合麻醉小鼠替代模型,0.50 mg/kg FFPM灌胃給藥,觀察其對(duì)小鼠麻醉蘇醒潛伏期,并以PDE4抑制劑Rolipram作為對(duì)照藥物,評(píng)價(jià)FFPM對(duì)小鼠的致嘔吐潛能；進(jìn)一步使用非嚙齒類動(dòng)物比格犬灌胃給予不同劑量(0.25 mg/kg,0.50 mg/kg,1.0 mg/kg) FFPM和對(duì)照藥Rolipram (1.0 mg/kg),觀察給藥后比格犬是否出現(xiàn)惡心嘔吐副作用；(2) APPswe/PSlde9 (APP/PS1)轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)尾組織提取DNA、RT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)及瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行基因型鑒定；采用行為學(xué)評(píng)價(jià)模型新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)4、6、8月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠與相同月齡野生型小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能的差別,以期用于后續(xù)為FFPM藥效學(xué)評(píng)價(jià)提供可靠的干預(yù)時(shí)間點(diǎn)；采用免疫組化方法和剛果紅染色方法檢測(cè)各組小鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化標(biāo)記物CD68、剛果紅斑塊以及兩者共定位的分布情況；采用ELISA法檢測(cè)6、8月齡小鼠腦內(nèi)可溶性Aβ40和Aβ42、不溶性Aβ40和Aβ42的水平,檢測(cè)8月齡小鼠腦內(nèi)腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor TNF-a)和白介素-1β (Interleukin-1β, IL-1β)的釋放水平；(3)7月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠連續(xù)21天FFPM (0.125,0.25,0.50 mg/kg)灌胃給藥,以Rolipram (0.50 mg/kg)作為陽(yáng)性對(duì)照藥,采用自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)、新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn),評(píng)價(jià)FFPM對(duì)8月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠(即連續(xù)給藥后月齡)的自主活動(dòng)和學(xué)習(xí)記憶能力的影響：采用ELISA法檢測(cè)各組小鼠海馬內(nèi)cAMP的含量；采用免疫印跡檢測(cè)各組小鼠海馬內(nèi)磷酸化PKA (p-PKA)、磷酸化CREB (p-CREB)、CREB、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor, BDNF、Synapsin-1、PSD95、NF-κB p65、 Histone H3、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase, iNOS)、環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2, COX-2)、TNF-α、IL-1β和GAPDH的蛋白表達(dá)變化；采用Real time PCR檢測(cè)各組小鼠海馬內(nèi)BDNFmRNA水平；采用免疫熒光檢測(cè)各組小鼠海馬及海馬各亞區(qū)內(nèi)BDNF、NeuN以及兩者共定位的熒光活性；(4)MTT法檢測(cè)FFPM (0.625-80 μM)和Aβ42(1.25～20 μM)分別對(duì)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞活性的影響：采用ELISA法檢測(cè)FFPM (2.5,5.0,10 μM)和Rolipram (20 μM)對(duì)Aβ42(2.5μM)刺激BV-2細(xì)胞,以及當(dāng)加入PKA抑制劑H89阻斷,24小時(shí)后細(xì)胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6相應(yīng)的分泌水平的影響；采用免疫印跡法檢測(cè)2.5μMAβ42處理BV-2細(xì)胞0.5,1,2,4小時(shí),10μM FFPM預(yù)處理1小時(shí)后與Aβ42共孵育1小時(shí)以及加入PKA抑制劑H89阻斷,細(xì)胞內(nèi)p-PKA、p-CREB和GAPDH的蛋白表達(dá)變化；采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)FFPM預(yù)處理1小時(shí)后與Aβ4M2共孵育1小時(shí),細(xì)胞內(nèi)NF-κBp65的核轉(zhuǎn)移情況；采用免疫印跡進(jìn)一步明確經(jīng)FFPM和(或)Aβ42處理后BV-2細(xì)胞核內(nèi)外NF-κB p65、細(xì)胞內(nèi)p-ERK1/2的蛋白表達(dá)變化；收集Aβ42刺激或(和)FFPM(和)或H89處理BV-2細(xì)胞后的上清液作為條件培養(yǎng)基,與SH-SY5Y細(xì)胞共培養(yǎng)后,采用免疫印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)Synapsin-1和PSD95的蛋白表達(dá)變化。研究結(jié)果：(1)FFPM對(duì)PDE4CAT、PDE4A、PDE4B2、PDE4C1和PDE4D4的抑制IC50值分別為56.2 nM、31 nM、42.9 nM、230 nM和11.8 nM,而Rolipram對(duì)PDE4CAT、PDE4A4、PDE4B2、PDE4C1和PDE4D4的抑制IC5o值分別2480nM、159 nM、783 nM、118 nM和260 nM;FFPM可改善氫溴酸東莨菪堿誘導(dǎo)的小鼠癡呆癥狀,表現(xiàn)為縮短小鼠在Morris水迷宮獲得性實(shí)驗(yàn)找到隱藏平臺(tái)的潛伏期和顯著性增加小鼠在探索性實(shí)驗(yàn)原有平臺(tái)象限的探索時(shí)間,其中FFPM在0.12,0.24,0.48 mg/kg的作用效果均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；藥代動(dòng)力學(xué)的結(jié)果顯示,C57小鼠經(jīng)灌胃給予0.5 mg/kg FFPM后,血漿Tmx為2 h,Cmax為9.723±2.994ng/ml,t1/2為1.487±0.198 h,MRT0-t為：2.816±0.121 h；用梯形法計(jì)算,AUC0-t分別為32.5 ±0.959 ng/ml·min,AUC0-∞分別為33.91±10.675 ng/ml·min;從血漿-大腦濃度-時(shí)間分布曲線發(fā)現(xiàn),小鼠口服給予FFPM后,15 min即可在腦組織中檢測(cè)到FFPM,在2小時(shí)達(dá)到藥物峰值,表明FFPM能有效透過(guò)小鼠血腦屏障；賽拉嗪/氯胺酮聯(lián)合麻醉C57小鼠的結(jié)果顯示,與溶劑組比較,0.50 mg/kg Rolipram明顯縮短小鼠麻醉持續(xù)時(shí)間,而0.5 mg/kg FFPM則無(wú)明顯差別,表明FFPM對(duì)小鼠的致嘔吐潛能低；比格犬的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步顯示,1.0 mg/kgRolipram灌胃給藥在9.60±1.373 min即產(chǎn)生明顯嘔吐反應(yīng),而FFPM (0.25,0.50,1.0 mg/kg)和溶劑在120 min的觀察期內(nèi),所有比格犬均未出現(xiàn)嘔吐作用,提示FFPM對(duì)比格犬致嘔吐潛能極低。(2)所有小鼠經(jīng)基因型鑒定后,同時(shí)具有APP、PS1突變基因擴(kuò)增條帶的即為APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠,相反,無(wú)陽(yáng)性擴(kuò)增條帶的即為野生型小鼠；新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,各月齡小鼠對(duì)相同物體的識(shí)別指數(shù)并無(wú)明顯區(qū)別,而對(duì)新物體的識(shí)別指數(shù)僅有8月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠較野生型小鼠出現(xiàn)顯著性下降,4、6月齡小鼠則無(wú)明顯差異；Morris水迷宮獲得性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,各月齡小鼠隨著學(xué)習(xí)時(shí)間的增加,找到隱藏平臺(tái)的潛伏期逐漸縮短,其中8月齡的APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的逃避潛伏期較野生型小鼠要長(zhǎng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;水迷宮探索性實(shí)驗(yàn)顯示,與野生型小鼠比較,6、8月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠在原有平臺(tái)象限的探索時(shí)間顯著性減少；跳臺(tái)被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,各月齡小鼠跳下平臺(tái)的潛伏期逐漸縮短,與野生型小鼠比較,6、8月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠顯著性減少了在平臺(tái)停留的時(shí)間；此外,6、8月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)Aβ水平一定程度地增加,其中不溶性Aβ40、Aβ42的增加十分明顯；免疫組化結(jié)果和剛果紅染色顯示,8月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞被激活,表現(xiàn)為CD68和剛果紅斑塊的表達(dá)增加,而且剛果紅斑塊周?chē)奂写罅炕罨男∧z質(zhì)細(xì)胞；ELISA結(jié)果顯示,與野生型小鼠比較,8月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)TNF-α和IL-1p分泌顯著性增加。(3)連續(xù)21天灌胃給予PDE4抑制劑FFPM、Rolipram或溶劑后,各組小鼠的自主活動(dòng)無(wú)明顯差異,說(shuō)明慢性給藥對(duì)小鼠的自主活動(dòng)能力無(wú)影響；與野生型小鼠比較,0.50 mg/kg FFPM可顯著性提高APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠在新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)中對(duì)新物體的識(shí)別指數(shù)。Morris水迷宮結(jié)果顯示,FFPM連續(xù)給藥具有縮短各組小鼠在獲得性實(shí)驗(yàn)找到隱藏平臺(tái)的潛伏期,其中在第4、5天,與APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠溶劑處理組比較,FFPM縮短效果顯著；在探索性實(shí)驗(yàn)中,FFPM可顯著性增加APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠在原有平臺(tái)象限的游泳路程和探索時(shí)間,其中劑量0.25 mg/kg和0.50 mg/kg的劑量效應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠溶劑處理組比較,FFPM能延長(zhǎng)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠在平臺(tái)停留時(shí)間,表現(xiàn)為跳臺(tái)潛伏期明顯增長(zhǎng),其中0.25 mg/kg和0.50mg/kg效果顯著。FFPM連續(xù)給藥可逆轉(zhuǎn)APP/PS1轉(zhuǎn)基因海馬內(nèi)cAMP含量的減少,同時(shí)增加海馬內(nèi)p-PKA、p-CREB和BDNF、Synapsin-1和PSD95的蛋白表達(dá)而不影響CREB和GAPDH的水平。與Western blotting的結(jié)果相似,免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果表明FFPM可逆轉(zhuǎn)APP/PS1轉(zhuǎn)基因BDNF和NeuN的免疫熒光活性表達(dá)的下調(diào),即FFPM增加BDNF的表達(dá)可能起到促進(jìn)神經(jīng)元存活的作用。此外,Real time PCR的結(jié)果顯示,FFPM能增加APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬BDNF mRNA水平。免疫印跡的結(jié)果證明,FFPM連續(xù)給藥還可以減少APP/PS1轉(zhuǎn)基因海馬核內(nèi)NF-κB p65及其介導(dǎo)的炎癥因子如iNOS、COX-2、TNF-a和IL-1p的蛋白表達(dá)。(4)MTT結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組對(duì)比,FFPM在檢測(cè)濃度范圍(0.625～80μM)內(nèi)對(duì)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞的活性不產(chǎn)生明顯影響；而Aβ42在5-20μM對(duì)BV-2細(xì)胞則產(chǎn)生顯著性毒性,細(xì)胞存活率下降至80%以下。ELISA結(jié)果顯示,FFPM處理1小時(shí)后,各濃度(2.5,5.0,10μM)均能不同程度地抑制由2.5μM Aβ42引起的BV-2細(xì)胞炎癥因子的釋放。其中,FFPM在劑量為10μM時(shí)對(duì)TNF-α[L-1β和IL-6的抑制效果最為顯著,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,并且作用強(qiáng)于對(duì)照藥Rolipram。當(dāng)預(yù)處理PKA抑制劑H89,10 μM FFPM介導(dǎo)的抗炎作用(TNF-α、[L-1β和IL-6的分泌)的抑制作用則被阻斷。Aβ42與BV-2細(xì)胞孵育1h即可顯著性減少p-PKA、p-CREB的蛋白表達(dá),且隨時(shí)間逐漸增加,兩者的表達(dá)減少更為明顯,而10μMFFPM預(yù)處理1h可逆轉(zhuǎn)p-PKA、p-CREB的表達(dá)減少。而PKA抑制劑H89能有效阻斷FFPM對(duì)BV-2細(xì)胞p-PKA、p-CREB的蛋白表達(dá)上調(diào)。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示,2.5μM Aβ42處理BV-2細(xì)胞1h可誘導(dǎo)NF-κB p65由胞漿向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移,而10μM FFPM能抑制NF-κB p65的核轉(zhuǎn)移；免疫印跡的結(jié)果進(jìn)一步顯示,FFPM可顯著性逆轉(zhuǎn)Aβ42引起的BV-2細(xì)胞胞漿NF-κB p65的減少和細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65的增加。Aβ42孵育1 h,可使BV-2細(xì)胞p-ERK1/2的蛋白表達(dá)明顯減少,然而FFPM預(yù)處理對(duì)Aβ42引起的p-ERK1/2表達(dá)減少并無(wú)顯著性作用。此外,FFPM能逆轉(zhuǎn)Aβ42激活的BV-2細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞突觸蛋白Synapsin-1和PSD95的減少。結(jié)論：FFPM為特異性的PDE4抑制劑,可有效透過(guò)血腦屏障,對(duì)PDE4CAT、 PDE4A、PDE4B和PDE4D的抑制作用要明顯優(yōu)于第一代PDE4抑制劑Rolipram,具有改善氫溴酸東莨菪堿模型小鼠和APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶損傷的作用。更重要的是FFPM對(duì)小鼠和比格犬未表現(xiàn)出致嘔吐反應(yīng)。FFPM增強(qiáng)AD認(rèn)知功能主要是激活cAMP/PKA/CREB信號(hào)通路,介導(dǎo)BDNF的轉(zhuǎn)錄和翻譯和增加突觸相關(guān)蛋白Synapsin-1、PSD95的蛋白表達(dá)水平以及抑制NF-κB核轉(zhuǎn)移介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),從而防止腦內(nèi)神經(jīng)元和突觸的丟失。此外,FFPM還可通過(guò)抑制Aβ誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞NF-κB的核轉(zhuǎn)移,調(diào)控Aβ介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)對(duì)神經(jīng)元和突觸的損傷。
【關(guān)鍵詞】：FFPM阿爾茨海默病 磷酸二酯酶4抑制劑 APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠認(rèn)知與記憶 小膠質(zhì)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 摘要3-10
• ABSTRACT10-21
• 第一部分 FFPM對(duì)磷酸二酯酶4抑制作用及在阿爾茨海默病中應(yīng)用的初步探討21-49
• 前言21-25
• 第一節(jié) PDE4抑制劑FFPM對(duì)氫溴酸東莨菪堿誘導(dǎo)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙作用的研究25-31
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與方法25-26
• 2 實(shí)驗(yàn)方法26-28
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-30
• 4 小結(jié)30-31
• 第二節(jié) PDE4抑制劑FFPM在小鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的研究31-42
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與方法31-32
• 2 實(shí)驗(yàn)方法32-34
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-41
• 4 小結(jié)41-42
• 第三節(jié) PDE4抑制劑FFPM致嘔吐潛能的研究42-49
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與方法42-43
• 2 實(shí)驗(yàn)方法43
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-45
• 4 小結(jié)45
• 5 討論45-49
• 第二部分 APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠行為表型和腦內(nèi)病理學(xué)特征研究49-70
• 前言49-50
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和方法50-51
• 2 實(shí)驗(yàn)方法51-57
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-65
• 4 討論65-70
• 第三部分 FFPM對(duì)APPswe/PS1de9轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶的作用及機(jī)制的研究70-104
• 前言70-71
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與方法71-73
• 2 實(shí)驗(yàn)方法73-83
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果83-97
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)論97-98
• 5 討論98-104
• 第四部分 FFPM對(duì)β-淀粉樣蛋白介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)的作用及機(jī)制的探討104-124
• 前言104-105
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與方法105-106
• 2 實(shí)驗(yàn)方法106-110
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果110-120
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)論120
• 5 討論120-124
• 全文總結(jié)124-125
• 參考文獻(xiàn)125-141
• 中英文縮略詞表141-142
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文142-144
• 致謝144-146

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 郭海彪;磷酸二酯酶-4抑制劑FFPM對(duì)阿爾茨海默病的防治作用及機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：795922