本文關鍵詞：β-淀粉樣蛋白42核酸適配體的篩選及其性質的考察

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【摘要】：阿爾茲海默癥（Alzheimer’s disease，AD）是病因至今不明的神經退行性疾病，它的病理學特征是淀粉樣斑塊與神經纖維纏結。到目前為止，還沒有找到根治AD的有效方法。-淀粉樣蛋白（A）容易聚集形成淀粉樣斑塊沉積在大腦中，在AD的形成中具有非常關鍵的作用。A主要分為A和A，盡管在腦脊液中A含量比A42高幾倍，但是，A42更容易積聚導致AD的產生；此外，腦脊液A42已經被確立為AD的生物標志物。因此，獲得A特異性結合的配體對于AD診療技術的發(fā)展具有重要的意義。 核酸適配體作為一種新型分子識別元件，具有一些獨特的優(yōu)勢，如靶標范圍廣、易于合成與修飾，穩(wěn)定性好、親和力高，特異性好等，從而使得它們在生物醫(yī)藥、臨床治療及生化傳感等多個領域具有廣闊的應用前景。A核酸適配體的缺乏在一定程度上制約了核酸適配體在AD診斷和防治方面的應用。為了有效促進AD診療的發(fā)展，篩選A的核酸適配體是非常有必要的。 本論文采用固定文庫的篩選策略，以A42為靶標進行核酸適配體的篩選；并且對篩選得到的核酸適配體的性質進行了考察。研究內容主要包括： （1）A42核酸適配體的篩選 利用生物素化的反義鏈與DNA的雜交將ssDNA文庫固定至鏈霉親和素化的磁珠上，然后文庫因與目標物結合發(fā)生構型變化而被從磁珠上洗脫至溶液中。通過簡單快速的磁分離得到DNA-A42復合物。經過十輪篩選，得到富集度比較好的第七輪和第九輪文庫，進行克隆測序并對測序結果進行分析，挑選出三條序列進行下一步的考察。 （2）A核酸適配體性質的考察 主要考察核酸適配體的親和力和特異性。結果表明，三條待考察序列中有兩條序列對A具有高親和力和特異性，分別為A7-92和A9-103。然后為了使其更好地應用于實際工作中，對以上兩條核酸適配體進行了序列優(yōu)化，得到四條較短的能夠特異性結合A42的序列。其中有一條優(yōu)化鏈保持了與全長鏈相近的親和力，，為A7-92-1。有趣的是，篩選和優(yōu)化得到的序列都可以區(qū)分A和A，盡管A只是在C-末端比A多了兩個氨基酸。此外，運用動態(tài)光散射和原子力顯微鏡考察了優(yōu)化鏈A7-92-1對A42聚集的抑制效果。結果表明，A7-92-1對A42聚集具有一定程度的抑制作用。
【關鍵詞】：阿爾茲海默癥 β-淀粉樣蛋白42 核酸適配體 SELEX
【學位授予單位】：湖南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 本文所用英文縮略詞表10-11
• 第1章 緒論11-25
• 1.1 阿爾茲海默癥的概述11-13
• 1.1.1 阿爾茲海默癥的發(fā)展現(xiàn)狀及危害11-12
• 1.1.2 阿爾茲海默癥的病理學特征和致病機理12-13
• 1.2 淀粉樣蛋白及其研究13-17
• 1.2.1 β-淀粉樣蛋白的產生13-14
• 1.2.2 β-淀粉樣蛋白的聚集及其毒性14-16
• 1.2.3 β-淀粉樣蛋白 42 和 β-淀粉樣蛋白16
• 1.2.4 β-淀粉樣蛋白在阿爾茲海默癥治療和診斷中的作用16-17
• 1.3 β-淀粉樣蛋白核酸適配體篩選的現(xiàn)狀17-23
• 1.3.1 核酸適配體的特點及 SELEX 技術的發(fā)展17-20
• 1.3.2 β-淀粉樣蛋白及阿爾茲海默癥相關蛋白核酸適配體的篩選20-22
• 1.3.3 β-淀粉樣蛋白核酸適配體在阿爾茲海默癥診療中的應用前景22-23
• 1.4 本文擬開展的工作23-25
• 第2章 基于固定文庫的 SELEX 技術篩選淀粉樣蛋白 42 的核酸適配體25-43
• 2.1 前言25-26
• 2.2 實驗部分26-33
• 2.2.1 實驗試劑和儀器26-28
• 2.2.2 溶液的配制28-29
• 2.2.3 文庫與引物的設計及質量鑒定29-30
• 2.2.4 PCR 退火溫度的優(yōu)化30
• 2.2.5 目標蛋白的預處理30
• 2.2.6 篩選過程30-32
• 2.2.7 文庫結合率的考察32-33
• 2.2.8 克隆與測序33
• 2.2.9 序列分析及二級結構模擬33
• 2.3 結果與討論33-42
• 2.3.1 文庫與引物合成質量的鑒定33-34
• 2.3.2 PCR 條件的優(yōu)化34-36
• 2.3.3 目標蛋白的處理和表征36-37
• 2.3.4 磁珠上 DNA 文庫修飾效果的考察37-38
• 2.3.5 篩選文庫結合率的監(jiān)測38-39
• 2.3.6 測序結果及分析39-40
• 2.3.7 二級結構的模擬40-42
• 2.4 小結42-43
• 第3章 淀粉樣蛋白 42 的核酸適配體性質的考察43-57
• 3.1 前言43
• 3.2 實驗部分43-46
• 3.2.1 儀器和試劑43-44
• 3.2.2 序列親和力的測定44-46
• 3.2.3 序列特異性的考察46
• 3.2.4 核酸適配體對β淀粉樣蛋白 42 聚集抑制作用的考察46
• 3.3 結果與討論46-56
• 3.3.1 序列親和力測定結果46-48
• 3.3.2 序列特異性的考察結果48-49
• 3.3.3 核酸適配體的序列優(yōu)化策略49-50
• 3.3.4 核酸適配體優(yōu)化后序列親和力和特異性的考察50-54
• 3.3.5 核酸適配體 Aβ7-92-1 對淀粉樣蛋白 42 聚集抑制作用的初步考察54-56
• 3.4 小結56-57
• 結論57-58
• 參考文獻58-66
• 附錄 A 攻讀學位期間所發(fā)表的學術論文目錄66-67
• 致謝67-68

【參考文獻】

中國博士學位論文全文數(shù)據庫 前1條

1 王詩卉;淀粉樣蛋白與茶多酚的分子相互作用[D];天津大學;2012年

本文編號：749291