本文關(guān)鍵詞：HIF-1α與Notch-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的相互作用在AD發(fā)病中的機(jī)制研究

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【摘要】：目的：本研究旨在應(yīng)用ADDLs對(duì)原代培養(yǎng)小鼠皮層神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞混合體系進(jìn)行干預(yù)作為體外AD模型,進(jìn)而探討缺氧誘導(dǎo)因子-1α與Notch-1信號(hào)通路的相互作用在阿爾茨海默病(AD)的發(fā)病中可能發(fā)揮的作用。 方法：本研究應(yīng)用Aβ寡聚體(ADDLs)對(duì)體外培養(yǎng)小鼠皮層神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)體系進(jìn)行干預(yù)以模擬體外AD模型。采用細(xì)胞免疫熒光的方法鑒定混合體系中神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞中HIF-1α及Notch-1蛋白表達(dá)的情況；應(yīng)用HIF-1αa誘導(dǎo)劑DMOG. HIF-1α抑制劑YC-1及Notch-1信號(hào)通路阻斷劑(γ-分泌酶抑制劑)DAPT對(duì)體外AD模型進(jìn)行干預(yù)；應(yīng)用CCK-8法對(duì)各種條件下體外培養(yǎng)小鼠皮層神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細(xì)胞混合體系的細(xì)胞活力進(jìn)行檢測(cè)；應(yīng)用Western Blot法對(duì)不同條件下混合體系的HIF-1α水平、NICD (Notch-1intracellular domain, Notch-1胞內(nèi)段)水平進(jìn)行檢測(cè),采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR法對(duì)不同條件下混合體系中凋亡相關(guān)蛋白caspase-3的mRNA水平進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果：首先HIF-1α在原代培養(yǎng)混合體系的部分神經(jīng)元和部分星形膠質(zhì)細(xì)胞中存在表達(dá),而Notch-1則主要在大部分星形膠質(zhì)細(xì)胞中存在表達(dá),皮層神經(jīng)元中未發(fā)現(xiàn)明確表達(dá)；其次,CCK-8實(shí)驗(yàn)顯示,相對(duì)低濃度的ADDLs對(duì)原代培養(yǎng)小鼠皮層神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞混合體系的細(xì)胞活力無顯著影響,但ADDLs在較高濃度情況下對(duì)原代培養(yǎng)混合體系的細(xì)胞活力則表現(xiàn)出明顯的毒性作用,并且呈現(xiàn)時(shí)間和濃度依賴性。伴隨著這種毒性作用,ADDLs的干預(yù)使得原代培養(yǎng)混合體系的HIF-1α及NICD水平均呈現(xiàn)出先升高后減低的類似變化趨勢(shì)。針對(duì)以上毒性作用,YC-1及DAPT在4小時(shí)點(diǎn)對(duì)原代培養(yǎng)混合體系的細(xì)胞活力表現(xiàn)出明顯的保護(hù)作用,并且可以明顯抑制ADDLs所誘導(dǎo)原代培養(yǎng)混合體系中凋亡相關(guān)蛋白caspase-3mRNA的表達(dá)水平,同時(shí)YC-1及DAPT顯著抑制了ADDLs誘導(dǎo)的原代培養(yǎng)混合體系中HIF-1α及NICD水平的上調(diào)。YC-1及DAPT在24小時(shí)點(diǎn)對(duì)原代培養(yǎng)混合體系的細(xì)胞活力、HIF-1α及NICD水平的影響不明顯。 結(jié)論：Aβ寡聚體(ADDLs)的毒性作用和HIF-1α及NICD水平的一過性上調(diào)有關(guān),同時(shí)HIF-1α和Notch-1信號(hào)通路的相互作用與ADDLs的毒性作用有密切關(guān)系：YC-1及DAPT均可拮抗ADDLs的毒性作用及凋亡誘導(dǎo)作用,這些保護(hù)作用可能與調(diào)節(jié)HIF-1α及Notch-1信號(hào)通路的相互作用密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 缺氧誘導(dǎo)因子-1α Notch-1信號(hào)通路 NICD 相互作用
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 研究背景6-14
• 參考文獻(xiàn)9-14
• 中文摘要14-16
• ABSTRACT16-18
• 第一部分 ADDLs對(duì)原代培養(yǎng)小鼠皮層神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞混合體系細(xì)胞活力及HIF-1α、NICD水平的影響18-43
• 摘要18-19
• ABSTRACT19-21
• 材料和方法21-33
• 結(jié)果33-38
• 討論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 第二部分 YC-1對(duì)體外AD模型的保護(hù)作用及HIF-1α、NICD蛋白水平的影響43-63
• 摘要43
• Abstract43-45
• 材料和方法45-55
• 結(jié)果55-58
• 討論58-61
• 參考文獻(xiàn)61-63
• 第三部分 DAPT對(duì)體外AD模型的保護(hù)作用及HIF-1α、NICD蛋白水平的影響63-83
• 摘要63
• Abstract63-65
• 材料和方法65-75
• 結(jié)果75-79
• 討論79-80
• 參考文獻(xiàn)80-83
• 全文小結(jié)83-84
• 綜述84-99
• 參考文獻(xiàn)90-99
• 附件 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文及參與課題情況99-101
• 英文縮略詞表101-102
• 致謝102

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙煥新;李曉宇;姚紅;武燁;楊蓉;趙榮瑞;劉慧榮;;低氧后處理誘導(dǎo)的低氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)上調(diào)減輕H9c2心肌細(xì)胞低氧/復(fù)氧損傷[J];生理學(xué)報(bào);2013年03期

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本文編號(hào)：745938