本文關(guān)鍵詞：化學交聯(lián)Aβ的神經(jīng)毒性及與胰島素受體相互作用研究

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【摘要】：淀粉樣蛋白β(Amyloid β,Aβ)是阿爾茨海默癥的重要特征分子之一,同時也被認為是該病的主要風險因子。Aβ單體能夠進行自我聚集形成分子量各異的多種聚集體,并通過多種方式損傷神經(jīng)系統(tǒng),其中寡聚體Ap與重要信號通路的受體相互作用被認為是其發(fā)揮神經(jīng)毒性的核心方式�；瘜W交聯(lián)方法是Ap研究中用于制備寡聚體Aβ的主要手段,但化學交聯(lián)過程是否對Aβ聚集體的性質(zhì)和神經(jīng)毒性產(chǎn)生影響尚未得到明確的闡釋；。本論文以傳統(tǒng)的非交聯(lián)方法制備的Aβ寡聚體為對照,對非修飾蛋白的光催化交聯(lián)法(photo-induced cross-linking of unmodified proteins, PICUP)和Cu2+氧化交聯(lián)法制備的Aβ聚集體的性質(zhì)和神經(jīng)毒性進行了研究；另外,已有研究報道不同的Aβ寡聚體具有不同的神經(jīng)毒性,而對于不同的Aβ寡聚體是否通過不同的途徑產(chǎn)生不同的病理作用還沒有明確的報道,本論文以神經(jīng)元胰島素受體(insulin receptor, IR)為研究對象,研究了PICUP法制備的不同的寡聚體對胰島素受體分布的影響。研究結(jié)果如下 1),通過控制PICUP和Cu2+氧化交聯(lián)的反應條件,獲得了兩種不同方法制備的一定分子量范圍的Aβ聚集體,并通過透析方法除去了溶液中的交聯(lián)劑。通過tricine-SDS-PAGE檢測發(fā)現(xiàn),不同制備方法獲得的Ap中,Ap單體所占總體比例存在明顯差異,不同分子量大小的Ap寡聚體所占比例略有不同,其中PICUP法制備Ap聚集體的效率最高,非交聯(lián)法獲得Ap聚集體的量最低；Zeta電位檢測發(fā)現(xiàn),三種Ap溶液的Zeta電位均處于-10-15mV區(qū)間,屬于具有進一步聚集趨勢的非穩(wěn)定狀態(tài)。硫磺素T檢測表明,Cu2+氧化交聯(lián)Aβ具有遠低于非交聯(lián)Aβ和PICUP-Aβ的β-片層結(jié)構(gòu)密度,顯示其可能具有不同于其他兩者的神經(jīng)毒性。 2)本論文使用上述3種Ap對新生SD大鼠海馬神經(jīng)元進行了濃度梯度處理,通過MTT檢測、流式細胞術(shù)以及Western印跡法對神經(jīng)元存活率、不同時期凋亡率以及關(guān)鍵凋亡蛋白的活化程度的檢測,比較了不同方法制備的Ap的神經(jīng)毒性。結(jié)果表明在三種Ap中,Cu2+氧化交聯(lián)Ap降低神經(jīng)元存活率的能力最強,能夠最高程度地誘導神經(jīng)元進入早期／中晚期凋亡,引起了凋亡蛋白Caspase3活化程度的顯著上調(diào),并且導致細胞漿中細胞色素c含量升高。然而,在Cu2+氧化交聯(lián)Aβ引起Caspase9活化的過程中,可能存在對Caspase9上游信號的調(diào)控而最終體現(xiàn)為和另外兩種Aβ相似的Caspase9活性。此外,三種Aβ都具有引起T-NOS和CAT酶活上調(diào)的能力,其中Cu2+/H2O2交聯(lián)Aβ較強的CAT活力上調(diào)功能表明該交聯(lián)Aβ具有更復雜的毒性機理。 3)利用電洗脫回收和有機溶劑沉淀法,成功分離和富集了2-4聚體Aβ,分別使用不同寡聚態(tài)的Aβ進行了神經(jīng)元處理,并觀測了神經(jīng)元R受到的影響。細胞免疫熒光試驗結(jié)果表明：二聚體Aβ主要具有誘導IR重新分布的作用,而三聚體和四聚體更傾向于競爭性結(jié)合IR并引起IR密度降低。
【關(guān)鍵詞】：淀粉樣蛋白β 化學交聯(lián) 神經(jīng)毒性 胰島素受體
【學位授予單位】：大連理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-11
• 引言11-12
• 1 文獻綜述12-30
• 1.1 阿爾茨海默癥及其致病學說12-13
• 1.1.1 阿爾茨海默癥及其危害12
• 1.1.2 Aβ致病學說12-13
• 1.2 oAβ的形成及毒性機理13-28
• 1.2.1 Aβ的產(chǎn)生和oAβ的形成13-15
• 1.2.2 oAβ的毒性機理15-17
• 1.2.3 oAβ的修飾和制備17-19
• 1.2.4 oAβ的主要相互作用蛋白19-27
• 1.2.5 oAβ-IR相互作用對IR信號通路的影響27-28
• 1.3 本論文的研究目標及內(nèi)容28-30
• 2 化學交聯(lián)方法制備Aβ30-43
• 2.1 引言30
• 2.2 儀器與試劑30-31
• 2.2.1 實驗儀器30-31
• 2.2.2 實驗試劑31
• 2.3 實驗方法31-35
• 2.3.1 Aβ_(1-40)粉末的預處理31
• 2.3.2 Aβ的制備31-33
• 2.3.3 對Aβ聚集度的檢測33-35
• 2.4 結(jié)果與討論35-41
• 2.4.1 Aβ聚集情況35-37
• 2.4.2 Aβ結(jié)構(gòu)檢測37-40
• 2.4.3 不同Aβ的Zeta電位檢測40-41
• 2.4.4 化學交聯(lián)Aβ中金屬離子的測定41
• 2.5 小結(jié)41-43
• 3 化學交聯(lián)對Aβ神經(jīng)毒性的影響43-60
• 3.1 引言43
• 3.2 儀器與試劑43-44
• 3.2.1 實驗儀器43-44
• 3.2.2 實驗試劑44
• 3.3 實驗方法44-49
• 3.3.1 SD大鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)44-45
• 3.3.2 MTT法測定細胞存活率45-46
• 3.3.3 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率46-47
• 3.3.4 凋亡蛋白Caspase 3/9激活檢測47
• 3.3.5 Western blotting47-48
• 3.3.6 總一氧化氮合酶的測定48
• 3.3.7 過氧化氫酶的測定48-49
• 3.4 結(jié)果與討論49-58
• 3.4.1 MTT法測定Aβ處理后的神經(jīng)元存活率49-52
• 3.4.2 流式細胞術(shù)檢測Aβ引發(fā)的神經(jīng)元凋亡52-54
• 3.4.3 神經(jīng)元接受Aβ處理后的Caspase 3/9活化量檢測54-55
• 3.4.4 Western印跡法檢測Ap處理后細胞色素c的含量55-56
• 3.4.5 Aβ處理神經(jīng)元后T-NOS活力的測定56-57
• 3.4.6 Aβ處理神經(jīng)元后對過氧化氫酶的測定57-58
• 3.5 小結(jié)58-60
• 4. 不同寡聚態(tài)Aβ-IR相互作用研究60-67
• 4.1 引言60
• 4.2 儀器與試劑60-61
• 4.2.1 實驗儀器60-61
• 4.2.2 實驗試劑61
• 4.3 實驗方法61-63
• 4.3.1 電洗脫法分離不同寡聚態(tài)oAβ61-62
• 4.3.2 細胞免疫熒光62-63
• 4.4 結(jié)果與討論63-66
• 4.4.1 電洗脫沉淀回收oAβ條件的優(yōu)化63-65
• 4.4.2 不同寡聚態(tài)Aβ對神經(jīng)元IR的影響65-66
• 4.5 小結(jié)66-67
• 結(jié)論67-68
• 參考文獻68-72
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表學術(shù)論文情況72-73
• 致謝73-74

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 盧祖琳;李芳;劉敬;;配對免疫球蛋白樣受體B與神經(jīng)軸突再生障礙[J];中國兒童保健雜志;2014年04期

2 周鵬;吉邢虎;何治柯;;蛋白質(zhì)自組裝及分析應用[J];分析科學學報;2014年02期

3 Nahid Jivad;Zahra Rabiei;;A review study on medicinal plants used in the treatment of learning and memory impairments[J];Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine;2014年10期

4 楊卉;徐運;;低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1在阿爾茨海默病中的研究進展[J];國際神經(jīng)病學神經(jīng)外科學雜志;2014年06期

5 王雪松;杜為紅;王保懷;;淀粉樣蛋白聚集纖維化的抑制作用研究[J];中國科學:化學;2014年06期

6 步青云;高堂珂;李芙;高楊;薛衛(wèi)國;;阿爾茨海默病腦內(nèi)β-淀粉樣蛋白經(jīng)血-腦屏障清除相關(guān)研究概況[J];中國腦血管病雜志;2014年12期

7 孫永安;金海強;黃一寧;;β淀粉樣蛋白與血腦屏障的功能障礙在阿爾茨海默病發(fā)病中的關(guān)系分析[J];中華老年心腦血管病雜志;2015年03期

8 張勇;艾思凡;張順林;秦訓浩;何丹丹;陳雪梅;;識別和解聚金屬-Aβ42聚集體的苯并噻唑類雙功能螯合劑[J];湖北理工學院學報;2015年02期

9 Farfán-García Eunice Dalet;Trujillo-Ferrara José Guadalupe;Castillo-Hernández María del Carmen;Guerra-Araiza Christian Humberto;Soriano-Ursúa Marvin Antonio;;Insights into the structural biology of G-protein coupled receptors impacts drug design for central nervous system neurodegenerative processes[J];Neural Regeneration Research;2013年24期

10 宇小婷;謝莉;占蒙娜;鄭俊克;于卓;;免疫抑制性受體LILRB2對白血病細胞系增殖和凋亡的影響[J];上海交通大學學報(醫(yī)學版);2014年07期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊洪娜;自組裝IKVAV納米纖維對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的作用及可能的機制的研究[D];山東大學;2014年

2 高存繼;基于有機小分子及稀土配合物的熒光化學傳感器研究[D];蘭州大學;2014年

3 韓曉娟;Alzheimer病星形膠質(zhì)細胞和海馬神經(jīng)元胰島素信號通路蛋白變化的研究[D];山東大學;2014年

4 蔡紅艷;Lixisenatide對淀粉樣β蛋白所致大鼠認知障礙的拮抗效應研究[D];山西醫(yī)科大學;2014年

5 毛國江;基于香豆素、萘等衍生物的新型熒光探針的設計合成與應用研究[D];湖南大學;2014年

6 吳學文;金屬離子配位調(diào)控高分子亞組分自組裝[D];湘潭大學;2014年

7 劉曉巖;Ghrelin對高糖誘導PC12細胞凋亡的抑制作用及其機制探討[D];重慶醫(yī)科大學;2014年

8 鹿麗娜;年齡對腦鐵平衡和帕金森病及阿爾茨海默病相關(guān)蛋白聚集情況的影響[D];中南大學;2014年

9 郝瑞文;絲肽的制備及其組裝行為研究[D];復旦大學;2011年

10 劉玉;石菖蒲活性成分配伍對APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠學習記憶影響的相關(guān)機制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李蒙蒙;吡唑啉熒光探針的合成，結(jié)構(gòu)表征及性質(zhì)研究[D];山東大學;2013年

2 張瑋;金釵石斛生物總堿對Aβ_(25-35)所致原代大鼠神經(jīng)元損傷的保護作用[D];遵義醫(yī)學院;2013年

3 姚寅;金釵石斛總生物堿對阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因模型Tg2576小鼠的影響[D];遵義醫(yī)學院;2013年

4 馮唐鎮(zhèn);香豆素類熒光探針的合成及其性能研究[D];海南師范大學;2013年

5 張方圓;血清白蛋白及多肽與小分子的相互作用研究及納米材料在其中的應用[D];南昌大學;2013年

6 徐要輝;表面功能化Fe_3O_4@SiO_2復合納米材料與金屬離子光響應行為研究[D];昆明理工大學;2013年

7 白苗;炎性反應在阿爾茨海默病認知功能障礙發(fā)生與發(fā)展中的作用[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

8 鄒燕;缺氧相關(guān)因素與認知功能障礙的關(guān)系[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

9 劉峰;多肽與蛋白質(zhì)對Ap-Cu（Ⅱ）絡合物誘導的氧化應激效應影響的研究[D];中南大學;2013年

10 戴璇;卷柏提取物作用于β-淀粉樣蛋白的藥物篩選[D];中南大學;2013年

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本文編號：743485