本文關(guān)鍵詞：慢性可卡因戒斷大鼠稽延性癥狀變化及其與海馬GSK3 β介導(dǎo)的晝夜節(jié)律基因bmal1表達(dá)的關(guān)系

  更多相關(guān)文章： 可卡因 稽延性癥狀 節(jié)律紊亂 GSK3β bmal1

【摘要】：目的:藥物戒斷后的節(jié)律紊亂、負(fù)性情緒和軀體癥狀等稽延性癥狀是導(dǎo)致復(fù)吸的一個重要原因。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),慢性可卡因戒斷不同時間后,其稽延性癥狀表現(xiàn)不同,并在探索稽延性癥狀發(fā)生的腦內(nèi)分子機(jī)制時發(fā)現(xiàn),生理狀態(tài)的大鼠磷酸化糖原合成酶激酶3β(p GSK3β)在中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)、伏隔核(Nac)、前額皮層(PFC)及視交叉上核(SCN)表現(xiàn)出顯著的晝夜節(jié)律性,而慢性可卡因處理后p GSK3β在藥物獎賞相關(guān)的上述四個腦區(qū)表達(dá)水平和節(jié)律性出現(xiàn)異常。有研究顯示,糖原合成酶激酶3β(GSK3β)可以間接地影響晝夜節(jié)律基因bmal1的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)通過研究在正常生理狀態(tài)下及慢性可卡因處理后大鼠GSK3β及晝夜節(jié)律基因bmal1在藥物成癮相關(guān)腦區(qū)——海馬中的變化規(guī)律,以探討GSK3β通過影響bmal1的表達(dá)在慢性可卡因戒斷后稽延性癥狀產(chǎn)生中的作用及機(jī)制,為開發(fā)有效防復(fù)吸藥物奠定理論基礎(chǔ)。方法:在本研究中,我們分別探索了慢性可卡因大鼠戒斷3天、10天和30天后稽延性癥狀變化及海馬中GSK3β、p GSK3β、bmal1 m RNA的晝夜節(jié)律表達(dá)情況。首先實(shí)驗(yàn)大鼠在12h/12h晝夜環(huán)境(早上8:00開燈,下午20:00關(guān)燈)適應(yīng)飼養(yǎng)7天后,分為生理鹽水組(saline組)和可卡因組(cocaine組)兩大組。對saline組大鼠給予1ml/kg生理鹽水連續(xù)腹腔注射14天;對cocaine組,給予20mg/kg劑量的可卡因連續(xù)腹腔注射14天,然后戒斷3天、10天和30天,分別命名為d3、d10和d30組。上述四組的大鼠再分別設(shè)置7個時間點(diǎn),即:ZT0(8:00)、ZT4(12:00)、ZT8(16:00)、ZT12(20:00)、ZT16(24:00)、ZT20(4:00)和ZT24(8:00)。大鼠連續(xù)14天腹腔注射后,戒斷3天、10天和30天,分別測定各組的大鼠體重增重,采用曠場實(shí)驗(yàn)和糖水偏愛實(shí)驗(yàn),觀察大鼠活動節(jié)律和抑郁癥狀等稽延性癥狀,采用western-blot檢測海馬GSK3β和p GSK3β在上述7個時間點(diǎn)的表達(dá)量,采用Realtime-PCR檢測bmal1 m RNA在上述7個時間點(diǎn)的表達(dá)量。結(jié)果:生理鹽水處理組大鼠活動具有明顯的節(jié)律性,晚上活動水平大于白天,在時間點(diǎn)(24:00,ZT16),大鼠活動水平最大,此時GSK3β/p GSK3β的比值最大,而bmal1m RNA表達(dá)量最低;慢性可卡因處理后戒斷3天時,大鼠稽延性癥狀主要表現(xiàn)為體重增重減少,抑郁,總體活動水平降低,活動仍有節(jié)律性,白天活動水平大于晚上,在時間點(diǎn)(16:00,ZT8),大鼠活動水平最大,此時GSK3β/p GSK3β的比值最大,而bmal1m RNA表達(dá)量最低;戒斷10天時,主要表現(xiàn)為體重增重減少,輕度抑郁,活動仍有節(jié)律性,白天活動水平大于晚上,在時間點(diǎn)(12:00,ZT4),大鼠活動水平最大,此時GSK3β/p GSK3β的比值最大,而bmal1m RNA表達(dá)量最低;戒斷30天時,主要表現(xiàn)為大鼠活動無晝夜節(jié)律性,GSK3β/p GSK3β的比值及bmal1m RNA表達(dá)量也無節(jié)律性。結(jié)論:慢性可卡因大鼠戒斷不同時間后其稽延性癥狀表現(xiàn)各不相同,晝夜節(jié)律紊亂會在可卡因戒斷后長期存在,可能是導(dǎo)致復(fù)吸的主要原因之一;海馬GSK3β介導(dǎo)的晝夜節(jié)律基因bmal1表達(dá)可能在可卡因戒斷后晝夜活動節(jié)律紊亂中發(fā)揮著重要作用。
【關(guān)鍵詞】：可卡因 稽延性癥狀 節(jié)律紊亂 GSK3β bmal1
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.6
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 一、材料和方法14-26
• 1 材料14-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 1.2 藥品和試劑15-17
• 1.3 相關(guān)試劑及配制17-19
• 2 方法19-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動物分組及可卡因給藥方案19
• 2.2 可卡因慢性處理大鼠戒斷后體重增重的變化19-20
• 2.3 糖水偏愛測試20
• 2.4 可卡因慢性處理大鼠戒斷后曠場行為變化20
• 2.5 Western blot法檢測GSK3β 和pGSK3β 的蛋白表達(dá)水平20-22
• 2.5.1 組織總蛋白質(zhì)的提取20-21
• 2.5.2 蛋白質(zhì)濃度的測定21
• 2.5.3 western blot操作步驟21-22
• 2.5.4 數(shù)據(jù)處理22
• 2.6 Realtime-PCR法檢測bmal1的mRNA表達(dá)水平22-25
• 2.6.1 組織總RNA的提取22-23
• 2.6.2 組織總RNA的濃度及純度的測定23
• 2.6.3 組織總RNA的完整性測定23
• 2.6.4 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)23-24
• 2.6.5 PCR反應(yīng)24
• 2.6.6 實(shí)驗(yàn)原理和數(shù)據(jù)處理24-25
• 2.7 統(tǒng)計(jì)分析25-26
• 二、結(jié)果26-32
• 1 可卡因慢性處理大鼠戒斷后體重增重的變化26-27
• 2 可卡因慢性處理大鼠戒斷后糖水偏愛行為的變化27-28
• 3 可卡因慢性處理大鼠戒斷后曠場行為的變化28-29
• 4 海馬GSK3β/pGSK3β 表達(dá)水平及節(jié)律的變化29-31
• 5 海馬晝夜節(jié)律基因bmal1 mRNA表達(dá)的變化31-32
• 三、討論32-36
• 1 慢性可卡因戒斷后稽延性戒斷癥狀變化的分析32-33
• 1.1 慢性可卡因戒斷后軀體癥狀變化的分析32
• 1.2 慢性可卡因戒斷后情緒變化的分析32-33
• 1.3 慢性可卡因戒斷后節(jié)律紊亂的分析33
• 2 慢性可卡因戒斷后大鼠海馬GSK3β/pGSK3β 表達(dá)水平變化的分析33-34
• 3 慢性可卡因戒斷后大鼠海馬晝夜節(jié)律基因bmal1 mRNA表達(dá)水平變化的分析34-36
• 四、結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 致謝41-42
• 綜述42-48
• 參考文獻(xiàn)47-48

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