本文關(guān)鍵詞：胞外三磷酸腺苷在淀粉樣蛋白β誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷中的功能和機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 阿爾茲海默癥 淀粉樣蛋白β 神經(jīng)細(xì)胞損傷 三磷酸腺苷 P2X7受體

【摘要】：阿爾茨海默癥(Alzheimer's disease, AD)是一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,嚴(yán)重危害了中、老年人的生活質(zhì)量,而隨著全球老齡化的到來,其發(fā)病人數(shù)逐年增加,對社會所造成的危害也日益加劇。AD患者的記憶、認(rèn)知、學(xué)習(xí)能力呈現(xiàn)漸進(jìn)式的衰退且不可逆轉(zhuǎn),生活自理能力逐漸喪失,多數(shù)病人最終死于感染。AD的發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚不明確,但淀粉樣蛋白β(amyloid β, Aβ)在AD中的核心作用是受到廣泛認(rèn)同的。AD發(fā)生過程中,Ap過量表達(dá),形成寡聚物以及不溶性的Ap纖維逐漸沉積為斑塊,最終形成老年斑。大量的老年斑作為病灶,產(chǎn)生神經(jīng)毒性,是AD的重要病理特征。然而,Aβ的神經(jīng)毒性機(jī)制十分復(fù)雜,目前仍然無法完整解釋。因此,Aβ細(xì)胞毒性機(jī)制一直是研究的熱點,并且對于AD的診斷以及治療具有重大意義。為探討Aβ誘導(dǎo)神經(jīng)損傷的分子機(jī)制,實驗中采用Neuro-2a細(xì)胞和小鼠原代大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞建立了Aβ誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞損傷的細(xì)胞模型,通過MTT細(xì)胞活性檢測、顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)觀察、Hoechst熒光染色、TUNEL檢測等多種方法,研究不同濃度Aβ25-35對于神經(jīng)細(xì)胞活性與存活的影響。結(jié)果顯示,Aβ25-35能夠造成神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞活性降低,表現(xiàn)為濃度依賴性。Aβ25-35能夠引起N2a細(xì)胞形態(tài)改變,出現(xiàn)分化、變小、細(xì)胞破碎等現(xiàn)象；原代皮層神經(jīng)細(xì)胞在Aβ的作用下出現(xiàn)突觸斷裂丟失,胞體變小、皺縮等細(xì)胞損傷表現(xiàn),并且出現(xiàn)較多凋亡細(xì)胞。實驗表明,Aβ25-35能夠引起神經(jīng)細(xì)胞的損傷。據(jù)報道神經(jīng)系統(tǒng)損傷釋放的核苷酸可能參與介導(dǎo)細(xì)胞的損傷,胞外核苷酸包括ATP、 ADP、UTP、UDP及其衍生物。為探究Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷是否與胞外核苷酸有關(guān),本文在細(xì)胞實驗中先用胞外核酸酶Apyrase處理細(xì)胞后,再加入Aβ25-35刺激N2a細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)Apyrase加入后,相對于Aβ25-35單獨刺激組,Apyrase處理細(xì)胞的活性有所回升,說明胞外核苷酸可能參與了神經(jīng)細(xì)胞損傷。我們進(jìn)一步用不同濃度ATP、ADP、UTP、 UDP直接刺激N2a細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn),只有3、5、10mmol/L等高濃度的ATP會引起N2a細(xì)胞活性顯著的下降,并且存在濃度依賴。顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)觀察、Hoechst熒光染色、TUNEL檢測的結(jié)果也證實了這個現(xiàn)象。隨后我們利用生物素?zé)晒夥▽β25-35刺激N2a以及N9細(xì)胞上清中的ATP進(jìn)行了檢測,發(fā)現(xiàn)Aβ25-35能夠引起N2a神經(jīng)細(xì)胞和N9小膠質(zhì)細(xì)胞釋放ATP,并且具有時間依賴性。通過熒光定量PCR實驗,我們發(fā)現(xiàn)Aβ25-35刺激N2a細(xì)胞后,作為ATP的受體P2X7表達(dá)上調(diào)。我們進(jìn)一步利用P2X7受體抑制劑BBG預(yù)處理神經(jīng)細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)Aβ25-35及ATP引起的細(xì)胞損傷得到顯著的緩解。說明胞外ATP是通過與P2X7受體結(jié)合,在Ap引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷中發(fā)揮作用的。最后,通過熒光定量PCR與蛋白免疫印跡實驗,我們發(fā)現(xiàn)Aβ通過胞外ATP引起的神經(jīng)損傷,在細(xì)胞內(nèi)是通過激活BAX表達(dá),并且引起Caspase-3激活以及剪切實現(xiàn)的。提示我們ATP誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷可能是通過線粒體凋亡途徑,引起Caspase-3激活而引起的。綜上所述,Aβ25-35能夠引起ATP釋放,胞外ATP與神經(jīng)細(xì)胞質(zhì)膜上P2X7受體結(jié)合后,引起下游BAX、Caspase-3等凋亡相關(guān)蛋白激活,進(jìn)而造成神經(jīng)細(xì)胞損傷。而P2X7受體抑制劑BBG能夠部分阻斷Aβ25-35引起的神經(jīng)損傷。本文為Aβ的細(xì)胞毒性機(jī)理研究提供了新的思路,也為P2X7受體作為AD治療靶點的研究提供了理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茲海默癥 淀粉樣蛋白β 神經(jīng)細(xì)胞損傷 三磷酸腺苷 P2X7受體
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 第一章 Aβ可以明顯誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的損傷14-29
• 1 引言14-15
• 2 實驗材料15-16
• 3 實驗方法16-19
• 4 實驗結(jié)果19-26
• 5 分析與討論26-29
• 第二章 胞外ATP在Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷發(fā)揮重要作用29-44
• 1 引言29-30
• 2 實驗材料30
• 3 實驗方法30-32
• 4 實驗結(jié)果32-42
• 5 分析與討論42-44
• 第三章 Aβ通過胞外ATP引起神經(jīng)細(xì)胞損傷的信號通路44-71
• 1 引言44-45
• 2 實驗材料45-46
• 3 實驗方法46-50
• 4 實驗結(jié)果50-68
• 5 分析與討論68-71
• 全文總結(jié)71-73
• 綜述73-80
• 1 阿爾茲海默癥73-75
• 2 Aβ與阿爾茲海默癥75-77
• 3 P2X7受體在阿爾茲海默癥中的功能77-80
• 參考文獻(xiàn)80-86
• 附錄86-87
• 致謝87

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 寶福凱;防止神經(jīng)細(xì)胞損傷的新策略[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1995年02期

2 張廣云;胡曉;婁磊;王建怡;;雌激素及其受體對谷氨酸誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞損傷的作用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年07期

3 相洪琴;;鋅與中風(fēng)后神經(jīng)細(xì)胞損傷的聯(lián)系[J];國外醫(yī)學(xué)情報;1998年05期

4 張予陽;史琳琳;郝冬海;潘麗紅;;Bcl-2在缺血性神經(jīng)細(xì)胞損傷中的作用及藥物的影響[J];中國藥理學(xué)通報;2010年01期

5 孫向紅;劉洪玲;耿美玉;;�？奠`含藥血清在體外對SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];中國藥學(xué)雜志;2006年19期

6 劉岌虹,游國雄;噪音對大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞損傷的機(jī)制研究[J];現(xiàn)代康復(fù);2000年03期

7 裴麗春;張一娜;張震環(huán);劉美玲;韓晶;張艷橋;;15-脫氧前列腺素J2在大鼠缺氧性神經(jīng)細(xì)胞損傷中的作用[J];重慶醫(yī)學(xué);2010年14期

8 莫永炎,邢飛躍,陳瑗,周玫;ACM對tbOOH致原代神經(jīng)細(xì)胞損傷及凋亡的影響[J];中國老年學(xué)雜志;2004年06期

9 王華;徐志州;高向東;錢云飛;姚文兵;;沙棘總黃酮對改善神經(jīng)細(xì)胞損傷的作用[J];中國生化藥物雜志;2007年03期

10 劉洪玲;孫向紅;姜惠卿;孫偉;岳旺;;康壽靈含藥血清對H_2O_2誘導(dǎo)的SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];齊魯醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 薄豐山;季振鵬;胡元威;馬勇;;亞低溫預(yù)處理對谷氨酸誘導(dǎo)原代鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[A];山東省第十六次麻醉學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

2 吳鵬飛;程瑾;顧軍;王芳;陳建國;;PICK1蛋白參與氧糖剝奪再灌注引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷[A];中國藥理學(xué)會第十次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 唐民科;丹酚酸B對Aβ引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 佘飛;Cdk5在電磁暴露致神經(jīng)細(xì)胞損傷的作用初步探討[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

2 程大龍;胞外三磷酸腺苷在淀粉樣蛋白β誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷中的功能和機(jī)制研究[D];華東師范大學(xué);2015年

，

本文編號：653324