本文關(guān)鍵詞：伏隔核CART肽抑制可卡因行為敏感性產(chǎn)生的相關(guān)機(jī)制研究

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【摘要】：目的:反復(fù)使用成癮藥物能夠上調(diào)多巴胺信號通路,激活伏隔核區(qū)突觸后神經(jīng)元的DA受體,激活環(huán)磷酸腺苷-蛋白激酶A(c AMP-PKA)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,激活核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子c AMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB),產(chǎn)生引起和維持行為敏感性所需的蛋白質(zhì)。這些多巴胺信號通路的相關(guān)變化將促使行為敏感化的表達(dá)。可卡因安非他明調(diào)節(jié)肽(Cocaine and amphetamine regulator transcript,CART)是成癮藥物獎賞的關(guān)鍵性調(diào)控因子。經(jīng)研究報道證實伏隔核的CART活性肽不僅能夠改變大鼠的活動性,并且還可稀釋成癮藥物產(chǎn)生的獎賞效應(yīng)。本研究通過一系列實驗將CART肽通過腦立體定位注射途徑注射到伏隔核區(qū)域,觀察其對(1)CREB蛋白磷酸化水平的影響,(2)多巴胺受體信號和(3)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)磷酸化激酶信號的影響。方法:選取健康的成年雄性SD(Sprague Dawley)大鼠,體重為260-280g。隨機(jī)分為4組:(1)生理鹽水組(伏隔核腦立體定位注射生理鹽水+腹腔注射生理鹽水);(2)可卡因組(伏隔核腦立體定位注射生理鹽水+腹腔注射可卡因15mg/kg);(3)CART肽低劑量組(伏隔核腦立體定位注射CART肽1.0μg+腹腔注射可卡因15mg/kg);(4)CART肽高劑量組(伏隔核腦立體定位注射CART肽2.5μg+腹腔注射可卡因15mg/kg);分組完成后,(1)對實驗用SD大鼠做腦部立體定位注射手術(shù),植入微量注射套管至腦伏隔核區(qū)域(A/P+1.7,L/M±1.6,D/V 7.5)。檢測如下指標(biāo):(1)行為學(xué)大鼠運(yùn)動活性的測定;(2)尼氏染色確定注射部位為伏隔核位置;(3)Western Blot檢測D1R、D2R蛋白表達(dá)水平;(4)免疫共沉淀方法檢測伏隔核區(qū)D3R蛋白的磷酸化水平;(5)Western Blot檢測ERK、P-ERK、CREB、P-CREB蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1、大鼠行為學(xué)分析結(jié)果表明,CART肽呈劑量依賴型抑制可卡因引起的行為敏感化。與生理鹽水組相比,可卡因組連續(xù)七天的活動水平均明顯增加(***p0.001)。與第一天注射可卡因引起的行為活動性相比,從第二天起可卡因引起的行為活動性明顯增強(qiáng),行為敏感性表達(dá),并且在注射可卡因后第五天行為敏感性達(dá)最高峰(+++p0.001)。與可卡因組相比,CART肽低劑量組與CART肽高劑量組中可卡因引起的自發(fā)活動性與行為敏感性顯著性降低(##p0.01和###p0.001),其中CART肽高劑量組的自發(fā)活動性與行為敏感性較生理鹽水組的無顯著差異。因此可以推斷,CART肽低劑量組部分抑制可卡因誘導(dǎo)的自發(fā)活動性和行為敏感性的產(chǎn)生,CART肽高劑量組則可以完全抑制。2、蛋白印跡分析結(jié)果表明,CART肽呈劑量依賴型抑制可卡因誘導(dǎo)的D1R、D2R蛋白過表達(dá)。與生理鹽水組相比,可卡因組中D1R、D2R蛋白表達(dá)水平顯著性增加(**p0.01和***p0.001)。與可卡因組相比,CART肽低劑量組與CART肽高劑量組中D1R、D2R蛋白表達(dá)水平顯著性降低(#p0.05和##p0.01)。3、免疫共沉淀分析結(jié)果表明,連續(xù)5天伏隔核腦立體定位注射CART肽能夠降低可卡因誘導(dǎo)的D3R蛋白磷酸化水平。與生理鹽水組相比,可卡因組中D3R蛋白磷酸化水平顯著性增加(***p0.001)。與可卡因組相比,CART肽低劑量組與CART肽高劑量組中D3R蛋白磷酸化水平均顯著性降低(##p0.01)。4、蛋白印跡分析結(jié)果表明,伏隔核微量注射CART肽能夠呈劑量依賴型阻斷可卡因誘導(dǎo)的細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)與c AMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)的磷酸化水平。結(jié)果顯示,與生理鹽水組相比,可卡因組的ERK、CREB蛋白磷酸化水平均顯著性升高(***p0.001)。與可卡因組相比,CART肽低劑量組與CART肽高劑量組中ERK、CREB蛋白磷酸化水平均顯著性降低(##p0.01和###p0.001)。結(jié)論:定位注射至伏隔核的CART活性肽呈劑量依賴型抑制可卡因引起的大鼠行為敏感性的表達(dá),其作用機(jī)制與阻斷可卡因引起的大鼠腦中多巴胺信號通路(DR-ERK/CREB)的激活相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：伏隔核 CART 可卡因 多巴胺信號通路
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.6
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 中英文縮略詞表8-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料與方法14-24
• 2.1 實驗材料14-18
• 2.1.1 實驗動物14
• 2.1.2 實驗藥品14
• 2.1.3 主要試劑14-15
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備15-16
• 2.1.5 主要試劑的配制16-18
• 2.1.6 主要溶液的配制18
• 2.2 實驗方法18-24
• 2.2.1 實驗分組18
• 2.2.2 腦部立體定位手術(shù)18-19
• 2.2.3 伏隔核微量注射及可卡因腹腔注射19
• 2.2.4 樣本制備19-21
• 2.2.4.1 蛋白樣品制備19-20
• 2.2.4.2 組織切片標(biāo)本的制備20-21
• 2.2.5 行為學(xué)大鼠運(yùn)動活性的測定21
• 2.2.6 尼氏染色（Nissl染色）21
• 2.2.7 免疫蛋白印跡21-22
• 2.2.8 免疫共沉淀22-23
• 2.2.9 統(tǒng)計學(xué)處理23-24
• 第3章 結(jié)果24-30
• 3.1 大鼠行為學(xué)實驗的測定結(jié)果24-26
• 3.2 免疫蛋白印跡檢測D1R、D2R蛋白表達(dá)水平26-27
• 3.3 免疫共沉淀檢測D3R蛋白的磷酸化水平27-28
• 3.4 免疫蛋白印跡檢測ERK、P-ERK、CREB、P-CREB蛋白表達(dá)水平28-30
• 第4章 討論30-34
• 4.1 伏隔核CART肽對可卡因成癮有重要的負(fù)調(diào)控作用30-31
• 4.2 伏隔核CART肽通過調(diào)控DR-ERK-CREB信號通路抑制可卡因成癮31-32
• 4.3 總結(jié)32-34
• 第5章 結(jié)論與展望34-35
• 5.1 結(jié)論34
• 5.2 展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻(xiàn)36-41
• 附圖41-42
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果42-43
• 綜述43-49
• 參考文獻(xiàn)47-49

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張芳;顏玲娣;宮澤輝;;CART肽參與疼痛、鎮(zhèn)痛調(diào)節(jié)及可能機(jī)制[J];中國藥物依賴性雜志;2006年02期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫習(xí);伏隔核CART肽抑制可卡因行為敏感性產(chǎn)生的相關(guān)機(jī)制研究[D];南昌大學(xué);2016年

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本文編號：630997