本文關(guān)鍵詞：抗精神病藥物奧氮平和氯氮平對BMSCs成脂分化的作用及機(jī)制

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【摘要】：背景第二代抗精神病藥物(Second generation antipsychotics drugs,SGA)是治療精神分裂癥最常見的藥物,與第一代抗精神病藥物相比有很大的優(yōu)勢[1,2]。這些藥物也越來越多地運(yùn)用到其他精神疾病的治療上,如精神障礙、孤獨(dú)癥及抑郁癥等[3,4,5]。然而,在臨床應(yīng)用中,SGA主要的副作用是體重增加和代謝異常,包括高血糖、胰島素耐受、Ⅱ型糖尿病、血脂異常和心血管疾病等[6,7]。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種頗具潛力的基因工程細(xì)胞,在體外能夠誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞,是體外研究脂肪細(xì)胞分化應(yīng)用最為廣泛的細(xì)胞系。關(guān)于SGA對小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的作用研究較少。SGA引起體重增加的機(jī)制研究可以幫助指導(dǎo)臨床用藥及新的治療方法的設(shè)計,以減少這些藥物的副作用。目的1.探討奧氮平和氯氮平對小鼠BMSCs增殖、成脂分化的影響;2.探究奧氮平和氯氮平在BMSCs增殖、成脂分化中的作用機(jī)制,為SGA可能導(dǎo)致肥胖及糖尿病的發(fā)生機(jī)制提供理論依據(jù)。方法1.細(xì)胞培養(yǎng):BMSCs采用低糖DMEM+10%FBS進(jìn)行培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)到80-90%時,按照1:2或者1:3的比例進(jìn)行傳代。2.細(xì)胞誘導(dǎo):(1)成脂誘導(dǎo):用含有10 mg/L胰島素、0.5 mmol/L IBMX、1.0μmol/L地塞米松、10%胎牛血清的DMEM低糖培養(yǎng)基(即成脂培養(yǎng)基)培養(yǎng)細(xì)胞2 d,隨后換成含有10 mg/L胰島素、10%胎牛血清的DMEM低糖培養(yǎng)基,每2 d換一次液直到細(xì)胞分化成熟;(2)加入一定濃度的第二代抗精神病藥物誘導(dǎo)。(3)成脂培養(yǎng)基與藥物同時加入BMSCs進(jìn)行誘導(dǎo)。3.采用MTT比色法和細(xì)胞計數(shù)法測定不同濃度的奧氮平、氯氮平對細(xì)胞增殖的影響,選取適宜濃度的奧氮平進(jìn)行隨后的實(shí)驗(yàn)。4.采用油紅O染色、Western bloting、q RT-PCR等方法檢測奧氮平對細(xì)胞成脂分化的作用及相關(guān)機(jī)制。結(jié)果1.MTT比色法和細(xì)胞計數(shù)法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示高濃度(80μM和100μM)奧氮平和氯氮平顯著抑制細(xì)胞生長,20μM奧氮平和20μM氯氮平對BMSCs的的增殖幾乎沒有影響;2.油紅O染色可見加入奧氮平的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)脂肪滴明顯多于陰性對照組;而MDI(成脂培養(yǎng)基)+奧氮平組、MDI+氯氮平組細(xì)胞內(nèi)脂肪滴較MDI組(陽性對照組)有明顯減少。3.Western blot結(jié)果顯示:單獨(dú)使用奧氮平時,脂肪分化標(biāo)志基因αp2和C/EBPβ的蛋白表達(dá)水平與對照組相比分別上升了36%(P0.01)、25%(P0.05),均具有統(tǒng)計學(xué)意義;單獨(dú)使用氯氮平時,C/EBPβ和αP2蛋白質(zhì)表達(dá)水平分別上升35%(P0.01)、25%(P0.05),前者具統(tǒng)計學(xué)意義,后者差異不顯著,無統(tǒng)計學(xué)意義;MDI和奧氮平共同作用時,MDI+20μM奧氮平組C/EBPβ和αP2的蛋白表達(dá)水平都比MDI組有所降低,灰度值分析表明降低水平差異性顯著,具有統(tǒng)計學(xué)意義;MDI和氯氮平共同作用時,MDI+20μM氯氮平組C/EBPβ和αP2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平也較MDI組明顯降低。4.RT-q PCR結(jié)果顯示:單獨(dú)使用奧氮平時,成脂相關(guān)基因Leptin、C/EBPα和Tnf-α的表達(dá)水平較對照組顯著升高,分別上升68%(P0.001)、79%(P0.01)和60%(P0.01);單獨(dú)使用氯氮平時,成脂相關(guān)基因PPARγ、Leptin和Tnf-α的m RNA表達(dá)水平分別上升52%(P0.01)、66%(P0.05)、65%(P0.05),均具有統(tǒng)計學(xué)意義;MDI和奧氮平共同作用時,Leptin和C/EBPα的m RNA表達(dá)水平較MDI組顯著降低,分別下調(diào)了65%(P0.01)、84%(P0.05),均具有統(tǒng)計學(xué)意義;MDI和氯氮平共同作用時,MDI+奧氮平組Leptin的m RNA表達(dá)水平較MDI組顯著降低,下調(diào)了50%(P0.001),具統(tǒng)計學(xué)意義;而PPARγ的基因表達(dá)水平有所升高;脂肪分化的負(fù)調(diào)控因子Tnf-α的m RNA表達(dá)水平較對照組和MDI組都有所上升,且具有統(tǒng)計學(xué)意義。5.Western blot檢測結(jié)果顯示:單獨(dú)使用奧氮平時,p-Akt的含量明顯高于對照組、p-GSK-3β的表達(dá)隨著p-Akt表達(dá)的增加逐漸減少,加入PI3K/Akt特異性阻斷劑(LY294002)后αp2和C/EBPβ的表達(dá)受到抑制,油紅O染色結(jié)果顯示細(xì)胞中的脂肪滴也明顯減少;MDI和奧氮平共同作用時,下調(diào)了p-Akt的表達(dá),而其上下游p-IRS和p-GSK-3β的表達(dá)也有變化。其中,p-Akt和p-IRS的表達(dá)較MDI組有所下調(diào),且隨著濃度的增加,逐漸下調(diào)。結(jié)論1.單獨(dú)使用奧氮平、氯氮平可以促進(jìn)小鼠BMSCs的成脂分化,且奧氮平的促進(jìn)作用明顯強(qiáng)于氯氮平;奧氮平可能通過促使PI3K/Akt信號通路中Akt磷酸化水平的升高來促進(jìn)小鼠BMSCs的脂肪分化。2.MDI分別與奧氮平、氯氮平共同作用,與單獨(dú)使用MDI相比,抑制了小鼠BMSCs的成脂分化。MDI和奧氮平共同作用時,胰島素信號通路受到抑制,可能引起胰島素耐受,其具體的機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：奧氮平 氯氮平 第二代抗精神病藥物 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 脂肪分化 PI3K/Akt信號通路
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.3
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 1 材料與方法14-26
• 2 結(jié)果26-41
• 3 討論41-44
• 4 小結(jié)44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 綜述：第二代抗精神病藥物誘導(dǎo)脂肪組織代謝變化的研究48-60
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況60-61
• 致謝61-62
• 個人簡歷62

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張德亮,孟慶玲;奧氮平致嚴(yán)重低血鉀1例[J];中國臨床藥學(xué)雜志;2000年05期

2 吳向平,范小琴;超量服奧氮平搶救成功1例[J];上海精神醫(yī)學(xué);2004年05期

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5 王德林;孟慶豐;;國產(chǎn)奧氮平對腦器質(zhì)性精神障礙的療效分析[J];中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2008年01期

6 何凡;鄭毅;;奧氮平治療難治性Tourette綜合征1例[J];臨床精神醫(yī)學(xué)雜志;2008年06期

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9 任季冬;戢彬;蔡旭明;;奧氮平與利培酮治療老年期精神障礙的對照研究[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年09期

10 楊雀屏;張恒;包pせ，

本文編號：630986