本文關(guān)鍵詞：Notch信號(hào)通路在非典型抗精神病藥物喹硫平促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生中的作用

  更多相關(guān)文章： 精神分裂癥 非典型抗精神病藥物 喹硫平 Notch信號(hào)通路 髓鞘相關(guān)蛋白 小鼠

【摘要】：研究目的： 1.構(gòu)建cuprizone誘導(dǎo)的小鼠精神分裂癥動(dòng)物模型，觀察其精神分裂樣行為、大腦髓鞘相關(guān)蛋白及Notch通路信號(hào)分子的改變。 2.觀察喹硫平干預(yù)對(duì)cuprizone模型小鼠精神分裂樣行為、髓鞘相關(guān)蛋白表達(dá)以及Notch信號(hào)通路的影響，探討Notch信號(hào)通路在喹硫平促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生中的作用。 研究方法： 本研究分為兩部分進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)一主要觀察喹硫平對(duì)cuprizone精神分裂癥模型小鼠的精神分裂樣行為的作用以及對(duì)大腦髓鞘相關(guān)蛋白（髓鞘堿性蛋白myelin basicprotein, MBP、2’,3’-環(huán)核苷酸3’磷酸二酯酶2',3'-Cyclic-nucleotide3'-phosphodiesterase, CNPase）、Notch1受體及其下游效應(yīng)分子Hes1表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)二經(jīng)側(cè)腦室給予Notch信號(hào)通路γ-內(nèi)分泌酶抑制劑MW167，探究給藥前后小鼠行為學(xué)及腦組織上述蛋白表達(dá)的改變情況。 在實(shí)驗(yàn)一，C57BL/6小鼠被隨機(jī)分為四組：（1）陰性對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)小鼠常規(guī)飼養(yǎng)6周；（2）對(duì)照+喹硫平組，實(shí)驗(yàn)小鼠常規(guī)飼養(yǎng)6周，同時(shí)給予喹硫平干預(yù)；（3）cuprizone模型組，實(shí)驗(yàn)小鼠給予cuprizone處理6周；（4）cuprizone+喹硫平組，實(shí)驗(yàn)小鼠同時(shí)給予cuprizone處理及喹硫平干預(yù)6周。觀察指標(biāo)包括：1.曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、Y-迷宮實(shí)驗(yàn)、三箱實(shí)驗(yàn)和筑巢實(shí)驗(yàn)；2.采用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)大腦MBP、 CNPase蛋白表達(dá)情況；3.采用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)及RT-PCR方法檢測(cè)腦組織Notch1受體及Hes1蛋白表達(dá)及其mRNA豐度。 在實(shí)驗(yàn)二，C57BL/6小鼠被隨機(jī)分為六組：（1）陰性對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)小鼠常規(guī)飼養(yǎng)6周；（2）對(duì)照+喹硫平組，實(shí)驗(yàn)小鼠常規(guī)飼養(yǎng)6周，同時(shí)給予喹硫平干預(yù)；（3）cuprizone模型組，實(shí)驗(yàn)小鼠給予cuprizone處理6周；（4）cuprizone+喹硫平組，實(shí)驗(yàn)小鼠同時(shí)給予cuprizone處理及喹硫平干預(yù)6周；（5）對(duì)照+MW167組，實(shí)驗(yàn)小鼠于實(shí)驗(yàn)的適應(yīng)性飼養(yǎng)時(shí)期行右側(cè)腦室置管術(shù)，待小鼠從手術(shù)中恢復(fù)、充分適應(yīng)置管1星期之后進(jìn)入模型制作階段，即常規(guī)飼養(yǎng)6周，自第6周開(kāi)始經(jīng)側(cè)腦室給予MW167，每天給藥1次，連續(xù)給藥7天；（6）cuprizone+喹硫平+MW167組，實(shí)驗(yàn)小鼠經(jīng)過(guò)置管適應(yīng)期后同時(shí)給予cuprizone處理及喹硫平干預(yù)6周，自第6周開(kāi)始經(jīng)側(cè)腦室給予MW167，每天給藥1次，連續(xù)給藥7天。觀察指標(biāo)包括：1.曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、Y-迷宮實(shí)驗(yàn)和三箱實(shí)驗(yàn)；2.采用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)大腦MBP、Hes1和Hes5蛋白表達(dá)量。研究結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)一發(fā)現(xiàn)，小鼠經(jīng)cuprizone處理后出現(xiàn)精神分裂樣行為學(xué)表現(xiàn)，并且MBP,CNPase蛋白表達(dá)降低，Notch1受體、Hes1分子的表達(dá)下調(diào)；經(jīng)喹硫平干預(yù)后，cuprizone模型小鼠的分裂癥樣行為得以改善，并且MBP, CNPase表達(dá)升高， Notch1受體、Hes1分子的表達(dá)上調(diào)。具體結(jié)果如下： 1．與陰性對(duì)照組相比，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，CPZ組小鼠的水平運(yùn)動(dòng)距離、中央?yún)^(qū)滯留時(shí)間及中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)距離百分比均減少（P 0.01）；高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中，CPZ組小鼠進(jìn)入各個(gè)臂的總次數(shù)、開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)百分比以及開(kāi)臂滯留時(shí)間百分比均明顯增高（P均0.01）；Y迷宮實(shí)驗(yàn)中，CPZ組小鼠的正確轉(zhuǎn)換率明顯降低（P 0.01）；三箱實(shí)驗(yàn)中，CPZ組小鼠在空金屬網(wǎng)實(shí)驗(yàn)箱與在stranger1實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而在stranger1實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間明顯多于在stranger2實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間（P 0.01）；筑巢實(shí)驗(yàn)中，CPZ組小鼠的筑巢評(píng)分明顯降低（P 0.01）。Western blot結(jié)果顯示CPZ組小鼠大腦MBP，CNPase表達(dá)降低（P均0.05）；免疫熒光染色結(jié)果表明CPZ組小鼠大腦MBP熒光強(qiáng)度減弱（P 0.01）；Western blot及RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明CPZ組小鼠大腦Notch1受體、Hes1轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)下調(diào)（P均0.05）。 2.與CPZ組相比，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平組小鼠的水平運(yùn)動(dòng)距離、中央?yún)^(qū)滯留時(shí)間、中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)距離百分比均明顯增加（P 0.05）；高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平組小鼠進(jìn)入各個(gè)臂的總次數(shù)、開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)百分比以及開(kāi)臂滯留時(shí)間百分比均明顯增高（P 0.01）；Y迷宮實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平組小鼠的正確轉(zhuǎn)換率明顯增高（P 0.01）；三箱實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平組小鼠在stranger1實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間明顯多于在空金屬網(wǎng)實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間，而在stranger2實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間明顯多于在stranger1實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間（P均0.01）；筑巢實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平組小鼠的筑巢評(píng)分增高（P 0.05）。Western blot結(jié)果顯示CPZ+喹硫平組小鼠大腦MBP，CNPase表達(dá)升高（P均0.05）；免疫熒光染色結(jié)果表明CPZ+喹硫平組小鼠大腦MBP熒光強(qiáng)度增強(qiáng)（P 0.05）；Western blot及RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明CPZ+喹硫平組小鼠大腦Notch1受體、Hes1蛋白的表達(dá)上調(diào)（P均0.05）。 實(shí)驗(yàn)二發(fā)現(xiàn)，，小鼠經(jīng)cuprizone處理后出現(xiàn)精神分裂樣行為學(xué)表現(xiàn)，并且MBP表達(dá)降低，Notch信號(hào)通路的下游分子Hes1、Hes5的表達(dá)下調(diào)；經(jīng)喹硫平干預(yù)后，cuprizone模型小鼠的分裂樣行為得以改善，并且MBP表達(dá)升高，Hes1、Hes5分子的表達(dá)上調(diào)；預(yù)先給予MW167干預(yù)，小鼠腦組織Hes1、Hes5分子表達(dá)量降低，同時(shí)喹硫平的促進(jìn)髓鞘形成作用與改善精神分裂樣行為作用消失。具體結(jié)果如下： 1．與陰性對(duì)照組相比，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，CPZ組、CPZ+喹硫平組、對(duì)照+MW167組以及CPZ+喹硫平+MW167組小鼠的水平運(yùn)動(dòng)距離均減少（P 0.01），CPZ組和CPZ+喹硫平+MW167組小鼠中央?yún)^(qū)滯留時(shí)間及中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)距離百分比均減少（P 0.01）；Y迷宮實(shí)驗(yàn)中，CPZ組和CPZ+喹硫平+MW167組小鼠的正確轉(zhuǎn)換率明顯降低（P 0.05）；三箱實(shí)驗(yàn)中，CPZ組和CPZ+喹硫平+MW167組小鼠在空金屬網(wǎng)所在實(shí)驗(yàn)箱、stranger1所在實(shí)驗(yàn)箱以及stranger2所在實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Western blot結(jié)果顯示CPZ組小鼠大腦Hes1, Hes5及MBP表達(dá)降低（P0.05）；免疫熒光染色結(jié)果表明CPZ組和CPZ+喹硫平+MW167組小鼠大腦MBP熒光強(qiáng)度降低（P均0.01）。 2.與CPZ組相比，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平組小鼠的水平運(yùn)動(dòng)距離明顯增多（P 0.01），中央?yún)^(qū)滯留時(shí)間延長(zhǎng)（P 0.05），中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)距離百分比增加（P 0.01）；Y迷宮實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平組小鼠的正確轉(zhuǎn)換率明顯增高（P 0.01）；三箱實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平組小鼠在stranger1實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間明顯多于在空金屬網(wǎng)實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間，而在stranger2實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間明顯多于在stranger1實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間（P均0.05）。Western blot結(jié)果顯示CPZ+喹硫平組小鼠大腦Hes1, Hes5以及MBP表達(dá)升高（P均0.05）；免疫熒光染色結(jié)果表明不同區(qū)域CPZ+喹硫平組小鼠大腦MBP熒光強(qiáng)度增強(qiáng)（P均0.01）。 3.與CPZ+喹硫平組比較，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平+MW167組小鼠的水平運(yùn)動(dòng)距離、中央?yún)^(qū)滯留時(shí)間及中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)距離百分比均明顯減�。≒均0.05）；Y迷宮實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平+MW167組小鼠的正確轉(zhuǎn)換率顯著降低（P 0.05）；三箱實(shí)驗(yàn)中，CPZ+喹硫平+MW167組小鼠在stranger1實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間與之在空金屬網(wǎng)實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間無(wú)顯著性差異，而在stranger1實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間明顯多于在stranger2實(shí)驗(yàn)箱停留時(shí)間（P 0.05）。Western blot結(jié)果顯示CPZ+喹硫平+MW167組小鼠大腦Hes1, Hes5以及MBP表達(dá)降低（P均0.05）；免疫熒光染色結(jié)果表明不同區(qū)域CPZ+喹硫平+MW167組小鼠大腦MBP熒光強(qiáng)度減弱（P均0.01）。結(jié)論： cuprizone抑制小鼠腦組織Notch信號(hào)通路，損傷髓鞘及少突膠質(zhì)細(xì)胞，導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)精神分裂樣行為；非典型抗精神病藥物喹硫平激活腦組織Notch信號(hào)通路，上調(diào)大腦MBP，CNPase表達(dá)并改善模型小鼠的分裂樣行為學(xué)表現(xiàn)；使用γ-內(nèi)分泌酶抑制劑MW167阻斷Notch信號(hào)通路，喹硫平的抗精神病作用及促進(jìn)髓鞘形成作用均消失。Notch信號(hào)通路的激活介導(dǎo)了非典型抗精神病藥物喹硫平的促少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生及抗精神病作用。
【關(guān)鍵詞】：精神分裂癥 非典型抗精神病藥物 喹硫平 Notch信號(hào)通路 髓鞘相關(guān)蛋白 小鼠
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.3
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表6-7
• 中文摘要7-11
• Abstract11-17
• 前言17-18
• 文獻(xiàn)回顧18-31
• 1. 精神分裂癥綜述18-26
• 1.1 精神分裂癥的病因18-19
• 1.2 精神分裂癥的發(fā)病機(jī)制19-25
• 1.2.1 神經(jīng)遞質(zhì)異常假說(shuō)19-21
• 多巴胺功能亢進(jìn)假說(shuō)19-20
• 5-HT 功能亢進(jìn)假說(shuō)20
• 谷氨酸功能低下假說(shuō)20-21
• GABA 氨基丁酸功能損傷假說(shuō)21
• 1.2.2 神經(jīng)發(fā)育障礙假說(shuō)21-22
• 神經(jīng)可塑性異常21-22
• 精神分裂癥的結(jié)構(gòu)失連接22
• 1.2.3 神經(jīng)免疫和炎癥假說(shuō)22-23
• 1.2.4 白質(zhì)髓鞘異常假說(shuō)23-25
• 1.3 精神分裂癥的治療25-26
• 1.3.1 藥物治療25
• 1.3.2 胰島素治療25
• 1.3.3 電痙攣治療25-26
• 1.3.4 心理治療26
• 2. 非典型抗精神病藥物（SGAs）對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞的作用26-27
• 3. Notch 信號(hào)通路與少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育及精神分裂癥發(fā)病的關(guān)系27-30
• 3.1 Notch 信號(hào)通路概況27-28
• 3.2 Notch 信號(hào)通路對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育調(diào)控28-29
• 3.3 Notch 信號(hào)通路和精神分裂癥的關(guān)系29-30
• 4. Cuprizone 誘導(dǎo)的 C57BL/6 小鼠精神分裂癥模型：優(yōu)勢(shì)與特殊性30-31
• 實(shí)驗(yàn)一 喹硫平對(duì) CPZ 小鼠精神分裂樣行為及 NOTCH 信號(hào)通路的影響31-57
• 1 材料31-34
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物31
• 1.2 抗體及相關(guān)試劑31-32
• 1.3 常用試劑及緩沖液配置32-33
• 1.4 主要儀器和器材33-34
• 2 方法34-43
• 2.1 Cuprizone 精神分裂癥模型構(gòu)建34-35
• 2.2 實(shí)驗(yàn)分組及實(shí)驗(yàn)流程35-36
• 2.3 動(dòng)物行為學(xué)檢測(cè)方法36-39
• 2.3.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)36
• 2.3.2 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)36-37
• 2.3.3 Y-迷宮實(shí)驗(yàn)37
• 2.3.4 三箱實(shí)驗(yàn)37-38
• 2.3.5 筑巢實(shí)驗(yàn)38-39
• 2.4 Western-Blot 方法39-40
• 2.4.1 蛋白樣品的制備39
• 2.4.2 蛋白含量的測(cè)定39
• 2.4.3 電泳及轉(zhuǎn)膜39-40
• 2.4.4 免疫顯色40
• 2.4.5 凝膠圖像分析40
• 2.5 免疫熒光化學(xué)染色方法40-41
• 2.5.1 小鼠腦組織取材以及冰凍切片的獲取40-41
• 2.5.2 MBP 免疫熒光染色操作流程41
• 2.5.3 采圖及熒光強(qiáng)度分析41
• 2.6 RT-PCR 方法41-43
• 2.6.1 總 RNA 提取41-42
• 2.6.2 逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA42
• 2.6.3 PCR 反應(yīng)42-43
• 2.7 統(tǒng)計(jì)分析43
• 3 結(jié)果43-55
• 3.1 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-51
• 3.1.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-45
• 3.1.2 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-46
• 3.1.3 Y-迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-47
• 3.1.4 三箱實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-49
• 3.1.5 筑巢實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-51
• 3.2 Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-52
• 3.2.1 髓鞘相關(guān)蛋白（MBP、CNPase）表達(dá)結(jié)果51
• 3.2.2 Hes 1 蛋白表達(dá)結(jié)果51-52
• 3.3 免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-53
• 3.4 RT-PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-55
• 4 討論55-57
• 實(shí)驗(yàn)二 NOTCH 信號(hào)通路在喹硫平促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生中的作用57-70
• 1 材料58
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物58
• 1.2 試劑及主要儀器58
• 1.3 干預(yù)藥物58
• 2 方法58-61
• 2.1 Cuprizone 小鼠精神分裂癥模型的構(gòu)建58-59
• 2.2 實(shí)驗(yàn)分組及實(shí)驗(yàn)流程59-60
• 2.3 側(cè)腦室置管手術(shù)60
• 2.4 側(cè)腦室給藥方法60
• 2.5 動(dòng)物行為學(xué)檢測(cè)方法60
• 2.6 Western blot 檢測(cè)方法60
• 2.7 免疫熒光化學(xué)染色方法60-61
• 3 結(jié)果61-68
• 3.1 MW167 干預(yù)阻斷了喹硫平治療改善 CPZ 小鼠精神分裂樣行為表現(xiàn)的作用61-66
• 3.1.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果61-63
• 3.1.2 Y-迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果63-64
• 3.1.3 三箱實(shí)驗(yàn)結(jié)果64-66
• 3.2 MW167 干預(yù)阻斷了喹硫平促進(jìn) CPZ 小鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生的作用66-68
• 4 討論68-70
• 小結(jié)70-71
• 參考文獻(xiàn)71-81
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果81-82
• 致謝82

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 汪作為,方貽儒,洪武,汪棟祥,江三多;混合家系中NOTCH4基因多態(tài)與精神分裂癥、心境障礙關(guān)聯(lián)的研究[J];遺傳;2005年06期

本文編號(hào)：626947