發(fā)布時間：2017-08-05 11:34

  本文關(guān)鍵詞：人HSP75基因重組腺病毒載體構(gòu)建及在C17.2神經(jīng)干細胞的表達

  更多相關(guān)文章： 熱休克蛋白 重組腺病毒載體 C.神經(jīng)干細胞

【摘要】：目的構(gòu)建HSP75基因重組腺病毒載體,觀察HSP75蛋白在C17.2神經(jīng)干細胞中的表達。方法采用PCR方法從含人HSP75基因質(zhì)粒中擴增HSP75基因,連接到腺病毒穿梭質(zhì)粒的多克隆位點區(qū)域,構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒p HBAd-MCM-HSP75-GFP,在LipofiterTM轉(zhuǎn)染試劑的介導(dǎo)下與腺病毒輔助骨架質(zhì)粒p HBAd-BHGloxΔE1,3 Cre共轉(zhuǎn)染HEK293細胞,整合包裝成重組腺病毒,TCID50法測定病毒滴度。使用熒光顯微鏡、流式細胞儀和Western blotting觀察重組腺病毒在C17.2細胞中的感染情況及HSP75蛋白的表達水平。結(jié)果通過酶切鑒定、測序、PCR鑒定,HSP75基因已正確插入穿梭質(zhì)粒中,并與病毒骨架質(zhì)粒整合包裝成重組腺病毒;重組腺病毒滴度為1.0×1010PFU/ml;Western blotting檢測,轉(zhuǎn)染后的神經(jīng)干細胞表達HSP75蛋白。結(jié)論 HSP75重組腺病毒載體成功構(gòu)建,對C17.2神經(jīng)干細胞具有較高的表達效力。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院藥劑科;廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科;南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院燒傷科;南海區(qū)第三人民醫(yī)院藥劑科;
【關(guān)鍵詞】： 熱休克蛋白 重組腺病毒載體 C.神經(jīng)干細胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.30973162) 廣東省自然科學(xué)基金項目(No.S2012010008199;No.S2013010015546)
【分類號】：R749.16
【正文快照】： 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是以認知功能進行性下降和情感障礙為特點的神經(jīng)退行性疾病,臨床上早期主要表現(xiàn)為記憶力減退、生活自理能力下降,最終導(dǎo)致進行性認知功能缺失、生活自理能力完全喪失和神經(jīng)行為異常[1-2]。其中β-淀粉樣蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)介導(dǎo)

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李文剛,邵沂,王艷斌,于敏,卜定方,徐小元;趨化因子受體CCR5反義RNA重組腺病毒載體的構(gòu)建[J];中國艾滋病性病;2004年04期

2 馬春明;楊朝鮮;閆乃紅;袁瓊蘭;高小青;鄧莉;;膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子重組腺病毒載體穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2006年02期

3 王家寧;王傳成;郭凌鄖;黃永章;;體外連接法快速高效構(gòu)建表達β-半乳糖苷酶的重組腺病毒載體[J];鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2006年02期

4 匡志鵬;謝裕安;梁安民;羅小玲;吳繼寧;;一種新的重組腺病毒載體pAdBM5-GFP-mAFP的構(gòu)建[J];腫瘤防治研究;2007年04期

5 徐小娜;曲彥;;熱休克蛋白70重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2008年02期

6 匡志鵬;李安娜;羅小玲;謝裕安;梁安民;尚俊英;吳繼寧;;重組腺病毒載體pAdBM5-GFP-hIL-2的構(gòu)建及病毒滴度測定[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2009年05期

7 劉嬌;周帆;陳慶美;單曉亮;唐霓;;丙型肝炎病毒重要編碼蛋白重組腺病毒載體的構(gòu)建[J];生物技術(shù)通報;2011年03期

8 鄭輝;薛松;黃日太;胡振雷;汪永義;;人生長終止特異性同源盒基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2011年03期

9 邱林;吳清華;肖軍;李明勇;;轉(zhuǎn)化生長因子-β3基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及表達[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2012年08期

10 李培建,李兵倉;一種重組腺病毒載體的擴增、純化和病毒滴度檢測方法[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2002年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龐小娟;趙曉琴;彭薇;臧宇輝;陳芳芳;羅冰;虞偉;秦浚川;李曉軍;;分化抑制因子3重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

2 吳芳;李紅;姚航平;董鳳芹;;蛋白聚糖Ⅱ重組腺病毒載體的構(gòu)建及生物學(xué)功能的鑒定[A];2005年浙江省內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

3 郭景茹;楊煥民;計紅;臧琳;郭爽;王忠偉;張旭;;Wistar大鼠HSP70基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及其病毒制備[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

4 王興忠;喬純;楊歡;周洪興;司煜安;徐靜;周忠海;錢暉;許文榮;;TNFα-Tumstatin融合基因的重組腺病毒載體構(gòu)建及其表達與檢測[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

5 胡義杰;范士志;蔣耀光;何勇;;人DeltaNp73α基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及其鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國胸心血管外科學(xué)術(shù)會議論文集（胸外科分冊）[C];2006年

6 林春陽;陳亮;羅進勇;鄧忠良;;雙表達骨形態(tài)發(fā)生蛋白2、9重組腺病毒載體的構(gòu)建和表達[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

7 樊彩斌;溫端改;歐陽駿;侯建全;嚴春寅;浦金賢;李綱;農(nóng)紹軍;;編碼IKK2dn重組腺病毒載體的構(gòu)建及表達驗證[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

8 鐘輝;吳成君;王健偉;洪濤;;殼聚糖增加重組腺病毒載體對模擬胃液的耐受性[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

9 王飛;畢志剛;李光富;吳�，|;王群;劉豐;王新軍;張兆松;;人乳頭瘤病毒11型E7蛋白基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及真核細胞表達[A];2006中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

10 毛國強;朱朝敏;許紅梅;彭明利;任紅;;人Mx基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 張斌青;核素報告基因顯像監(jiān)測轉(zhuǎn)基因骨髓間充干細胞移植治療的基礎(chǔ)研究[D];華中科技大學(xué);2010年

2 李衛(wèi)華;表達HCV-NS3抗原的重組腺病毒載體疫苗的實驗研究[D];四川大學(xué);2005年

3 董磊;以前列腺干細胞抗原為靶點的重組蛋白及重組腺病毒載體疫苗的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

4 宮衛(wèi)東;Linker插入的乙肝病毒靶向核糖核酸酶的構(gòu)建及其抗病毒活性的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

5 劉穎格;反義c-myc寡核苷酸、反義c-myc真核表達載體和反義c-myc重組腺病毒載體在大鼠氣道平滑肌細胞增殖中的作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

6 杜先智;人白細胞彈性蛋白酶抑制因子elafin的克隆、表達載體構(gòu)建及對氣道黏蛋白分泌的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

7 吳詩坡;基于重組腺病毒載體的烈性病原體疫苗研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

8 陳堅;攜帶鼠白介素12基因的可調(diào)控腺病毒治療胃癌的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳曉;白細胞介素-10重組腺病毒載體的構(gòu)建、病毒的制備及表達產(chǎn)物活性分析[D];中國海洋大學(xué);2004年

2 劉君;攜帶血管生成素-1基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及修飾骨髓間充質(zhì)干細胞的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

3 徐小娜;熱休克蛋白70重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];青島大學(xué);2008年

4 邱俊欽;人骨形態(tài)蛋白-2基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及修飾骨髓間充質(zhì)干細胞的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

5 朱自強;TIMP-3 N端結(jié)構(gòu)域重組腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

6 吳芳;大鼠蛋白聚糖Ⅱ重組腺病毒載體的構(gòu)建及初步鑒定[D];浙江大學(xué);2004年

7 趙亞;HBV-TR重組腺病毒載體的構(gòu)建及其在小鼠肝臟的表達[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 趙國慶;重組腺病毒載體pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-βNGF的構(gòu)建和鑒定[D];汕頭大學(xué);2011年

9 單連華;FoxM1相關(guān)重組腺病毒載體小試生產(chǎn)及初步質(zhì)量控制研究[D];湖南大學(xué);2011年

10 孫業(yè)慶;攜帶IKK2dn基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及表達驗證[D];蘇州大學(xué);2008年

，

本文編號：624700