本文關(guān)鍵詞：人HSP75基因重組腺病毒載體構(gòu)建及在C17.2神經(jīng)干細(xì)胞的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 熱休克蛋白 重組腺病毒載體 C.神經(jīng)干細(xì)胞

【摘要】：目的構(gòu)建HSP75基因重組腺病毒載體,觀察HSP75蛋白在C17.2神經(jīng)干細(xì)胞中的表達(dá)。方法采用PCR方法從含人HSP75基因質(zhì)粒中擴(kuò)增HSP75基因,連接到腺病毒穿梭質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)區(qū)域,構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒p HBAd-MCM-HSP75-GFP,在LipofiterTM轉(zhuǎn)染試劑的介導(dǎo)下與腺病毒輔助骨架質(zhì)粒p HBAd-BHGloxΔE1,3 Cre共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,整合包裝成重組腺病毒,TCID50法測定病毒滴度。使用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀和Western blotting觀察重組腺病毒在C17.2細(xì)胞中的感染情況及HSP75蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果通過酶切鑒定、測序、PCR鑒定,HSP75基因已正確插入穿梭質(zhì)粒中,并與病毒骨架質(zhì)粒整合包裝成重組腺病毒;重組腺病毒滴度為1.0×1010PFU/ml;Western blotting檢測,轉(zhuǎn)染后的神經(jīng)干細(xì)胞表達(dá)HSP75蛋白。結(jié)論 HSP75重組腺病毒載體成功構(gòu)建,對(duì)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞具有較高的表達(dá)效力。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院藥劑科;廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科;南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院燒傷科;南海區(qū)第三人民醫(yī)院藥劑科;
【關(guān)鍵詞】： 熱休克蛋白 重組腺病毒載體 C.神經(jīng)干細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.30973162) 廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.S2012010008199;No.S2013010015546)
【分類號(hào)】：R749.16
【正文快照】： 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是以認(rèn)知功能進(jìn)行性下降和情感障礙為特點(diǎn)的神經(jīng)退行性疾病,臨床上早期主要表現(xiàn)為記憶力減退、生活自理能力下降,最終導(dǎo)致進(jìn)行性認(rèn)知功能缺失、生活自理能力完全喪失和神經(jīng)行為異常[1-2]。其中β-淀粉樣蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)介導(dǎo)

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李文剛,邵沂,王艷斌,于敏,卜定方,徐小元;趨化因子受體CCR5反義RNA重組腺病毒載體的構(gòu)建[J];中國艾滋病性病;2004年04期

2 馬春明;楊朝鮮;閆乃紅;袁瓊蘭;高小青;鄧?yán)?;膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子重組腺病毒載體穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2006年02期

3 王家寧;王傳成;郭凌鄖;黃永章;;體外連接法快速高效構(gòu)建表達(dá)β-半乳糖苷酶的重組腺病毒載體[J];鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年02期

4 匡志鵬;謝裕安;梁安民;羅小玲;吳繼寧;;一種新的重組腺病毒載體pAdBM5-GFP-mAFP的構(gòu)建[J];腫瘤防治研究;2007年04期

5 徐小娜;曲彥;;熱休克蛋白70重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年02期

6 匡志鵬;李安娜;羅小玲;謝裕安;梁安民;尚俊英;吳繼寧;;重組腺病毒載體pAdBM5-GFP-hIL-2的構(gòu)建及病毒滴度測定[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2009年05期

7 劉嬌;周帆;陳慶美;單曉亮;唐霓;;丙型肝炎病毒重要編碼蛋白重組腺病毒載體的構(gòu)建[J];生物技術(shù)通報(bào);2011年03期

8 鄭輝;薛松;黃日太;胡振雷;汪永義;;人生長終止特異性同源盒基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2011年03期

9 邱林;吳清華;肖軍;李明勇;;轉(zhuǎn)化生長因子-β3基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年08期

10 李培建,李兵倉;一種重組腺病毒載體的擴(kuò)增、純化和病毒滴度檢測方法[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2002年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龐小娟;趙曉琴;彭薇;臧宇輝;陳芳芳;羅冰;虞偉;秦浚川;李曉軍;;分化抑制因子3重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

2 吳芳;李紅;姚航平;董鳳芹;;蛋白聚糖Ⅱ重組腺病毒載體的構(gòu)建及生物學(xué)功能的鑒定[A];2005年浙江省內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

3 郭景茹;楊煥民;計(jì)紅;臧琳;郭爽;王忠偉;張旭;;Wistar大鼠HSP70基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及其病毒制備[A];全國動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

4 王興忠;喬純;楊歡;周洪興;司煜安;徐靜;周忠海;錢暉;許文榮;;TNFα-Tumstatin融合基因的重組腺病毒載體構(gòu)建及其表達(dá)與檢測[A];中國免疫學(xué)會(huì)第五屆全國代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

5 胡義杰;范士志;蔣耀光;何勇;;人DeltaNp73α基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及其鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國胸心血管外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集（胸外科分冊）[C];2006年

6 林春陽;陳亮;羅進(jìn)勇;鄧忠良;;雙表達(dá)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2、9重組腺病毒載體的構(gòu)建和表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會(huì)成立十周年論文匯編[C];2011年

7 樊彩斌;溫端改;歐陽駿;侯建全;嚴(yán)春寅;浦金賢;李綱;農(nóng)紹軍;;編碼IKK2dn重組腺病毒載體的構(gòu)建及表達(dá)驗(yàn)證[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

8 鐘輝;吳成君;王健偉;洪濤;;殼聚糖增加重組腺病毒載體對(duì)模擬胃液的耐受性[A];2008年中國微生物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2008年

9 王飛;畢志剛;李光富;吳�，|;王群;劉豐;王新軍;張兆松;;人乳頭瘤病毒11型E7蛋白基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及真核細(xì)胞表達(dá)[A];2006中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 毛國強(qiáng);朱朝敏;許紅梅;彭明利;任紅;;人Mx基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 張斌青;核素報(bào)告基因顯像監(jiān)測轉(zhuǎn)基因骨髓間充干細(xì)胞移植治療的基礎(chǔ)研究[D];華中科技大學(xué);2010年

2 李衛(wèi)華;表達(dá)HCV-NS3抗原的重組腺病毒載體疫苗的實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2005年

3 董磊;以前列腺干細(xì)胞抗原為靶點(diǎn)的重組蛋白及重組腺病毒載體疫苗的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

4 宮衛(wèi)東;Linker插入的乙肝病毒靶向核糖核酸酶的構(gòu)建及其抗病毒活性的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

5 劉穎格;反義c-myc寡核苷酸、反義c-myc真核表達(dá)載體和反義c-myc重組腺病毒載體在大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖中的作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

6 杜先智;人白細(xì)胞彈性蛋白酶抑制因子elafin的克隆、表達(dá)載體構(gòu)建及對(duì)氣道黏蛋白分泌的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

7 吳詩坡;基于重組腺病毒載體的烈性病原體疫苗研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

8 陳堅(jiān);攜帶鼠白介素12基因的可調(diào)控腺病毒治療胃癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳曉;白細(xì)胞介素-10重組腺病毒載體的構(gòu)建、病毒的制備及表達(dá)產(chǎn)物活性分析[D];中國海洋大學(xué);2004年

2 劉君;攜帶血管生成素-1基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

3 徐小娜;熱休克蛋白70重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];青島大學(xué);2008年

4 邱俊欽;人骨形態(tài)蛋白-2基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

5 朱自強(qiáng);TIMP-3 N端結(jié)構(gòu)域重組腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

6 吳芳;大鼠蛋白聚糖Ⅱ重組腺病毒載體的構(gòu)建及初步鑒定[D];浙江大學(xué);2004年

7 趙亞;HBV-TR重組腺病毒載體的構(gòu)建及其在小鼠肝臟的表達(dá)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 趙國慶;重組腺病毒載體pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-βNGF的構(gòu)建和鑒定[D];汕頭大學(xué);2011年

9 單連華;FoxM1相關(guān)重組腺病毒載體小試生產(chǎn)及初步質(zhì)量控制研究[D];湖南大學(xué);2011年

10 孫業(yè)慶;攜帶IKK2dn基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及表達(dá)驗(yàn)證[D];蘇州大學(xué);2008年

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