本文關鍵詞：NR1在嗎啡精神依賴大鼠相關腦區(qū)中的表達及左旋延胡索乙素的干預作用

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【摘要】：目的:觀察嗎啡誘導條件性位置偏愛(Conditioned Place Preference,CPP)大鼠在CPP獲得與消退不同階段腦獎賞神經(jīng)環(huán)路中腦腹側(cè)被蓋區(qū)-伏核-前額葉皮質(zhì)(VTA-NAc-PFC),以及嗎啡耐受細胞中N-甲基-D-天冬氨酸受體亞基NR1的表達變化,從組織和細胞水平揭示NR1在嗎啡誘導精神依賴中的作用;并在上述實驗基礎上,觀察用左旋延胡索乙素(l-THP)治療后,對大鼠嗎啡CPP效應以及NAc核團中NR1表達變化的影響,為l-THP治療阿片類依賴的應用補充新的實驗依據(jù)。方法:1、大鼠嗎啡CPP獲得階段VTA-NAc-PFC神經(jīng)環(huán)路各腦區(qū)NR1的表達篩選出合格的SD大鼠,隨機分成生理鹽水(NS)對照組和嗎啡CPP模型組,對各組大鼠采用劑量遞增法(嗎啡起始劑量從d1的10 mg/kg至d10的100 mg/kg)分別進行頸背部皮下注射生理鹽水和嗎啡,每次注射20 min后置黑、白箱中進行訓練(白箱為嗎啡伴藥箱),連續(xù)注射10 d。在末次訓練48 h后進行CPP測試,確認大鼠嗎啡CPP模型建立成功后,立即將各組大鼠處死并取材(VTA、NAc、PFC),分別采用PCR和Western blot技術檢測其NR1的表達變化。2、大鼠嗎啡CPP消退階段VTA-NAc-PFC神經(jīng)環(huán)路各腦區(qū)NR1的表達變化利用上述方法建立大鼠嗎啡CPP模型后,分別將NS對照組和嗎啡CPP組大鼠自然放置28天進行CPP檢測,確定大鼠嗎啡CPP效應消失,立即將兩組大鼠處死并取材(VTA、NAc、PFC),分別采用PCR和Western blot技術檢測其NR1的表達變化。3、嗎啡耐受神經(jīng)元細胞中NR1的表達變化培養(yǎng)皮層神經(jīng)元細胞,設置NS對照組和嗎啡實驗組,分別加入NS及10μmol/l嗎啡,48 h后分別收集細胞,提取蛋白質(zhì),采用Western blot方法檢測其細胞中NR1的表達。4、l-THP治療對大鼠嗎啡CPP效應和NAc腦區(qū)中NR1表達的影響利用上述方法在建立大鼠嗎啡CPP模型的基礎上,將大鼠分成6組:NS對照組、嗎啡CPP組、NS治療組、l-THP低、中、高劑量治療組。在確認大鼠嗎啡CPP模型建立成功后,對NS對照組和嗎啡CPP組大鼠立即處死并取材;剩余4組大鼠,除NS治療組灌胃用NS外,其他l-THP低、中、高劑量治療組大鼠則分別給予l-THP 0.94mg/kg、1.88 mg/kg和3.76 mg/kg進行灌胃治療,持續(xù)治療6 d再次檢測CPP后即刻處死并取NAc腦組織。采用Western blot技術檢測其在NAc腦區(qū)中NR1的表達。結(jié)果:1、大鼠嗎啡CPP獲得階段VTA-NAc-PFC神經(jīng)環(huán)路各腦區(qū)NR1的表達在嗎啡注射末次訓練48 h后,經(jīng)過CPP測試,NS對照組大鼠在白箱停留的時間在訓練前后無明顯差異(訓練前393±81 s、訓練后為416±58 s)。嗎啡CPP組大鼠訓練后與訓練前比較,訓練后在白箱中的停留時間明顯延長(訓練前408±93 s、訓練后528±81 s)(P0.01)。同時嗎啡CPP組與NS對照組比較,CPP模型組大鼠訓練后在白箱中停留時間明顯延長(P0.01)。嗎啡CPP組與NS對照組比較,大鼠NAc中NR1 m RNA表達水平較NS對照組顯著增加,具有統(tǒng)計學意義(P0.05),而大鼠嗎啡CPP組VTA和PFC的NR1 m RNA水平較NS對照組雖有增加但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。對于NR1的蛋白表達,大鼠嗎啡CPP組NAc中NR1蛋白表達較NS對照組顯著增加(P0.01),而VTA和PFC腦區(qū)的NR1蛋白水平在兩組之間比較同樣增加,但同樣無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2、大鼠CPP消退階段VTA-NAc-PFC神經(jīng)環(huán)路各腦區(qū)NR1的表達在大鼠嗎啡CPP建立成功并自然消退28d進行CPP檢測:生理鹽水對照組大鼠在白箱中停留的時間為410±69 s,嗎啡誘導的CPP組大鼠在白箱中停留的時間為396±117 s,兩組大鼠白箱停留時間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05);兩組大鼠VTA、NAc、PFC各腦區(qū)NR1 m RNA以及蛋白表達水平之間比較亦無顯著性差異(P0.05)。3、嗎啡耐受細胞中NR1的表達變化在嗎啡加入神經(jīng)元細胞培養(yǎng)后48 h,與生理鹽水對照組比較,嗎啡實驗組細胞中NR1的蛋白表達水平顯著增加(P0.01)。4、l-THP治療對大鼠嗎啡CPP效應及NAc腦區(qū)中NR1表達的影響在末次訓練48 h后,NS對照組大鼠訓練前后在白箱中的停留時間分別為383±62s和401±76 s;嗎啡CPP組為407±83 s和528±40 s;NS治療組為386±75 s和527±55 s,治療6天后為524±79 s;l-THP低劑量治療組訓練前后分別為396±81 s和523±32 s,治療6天后為519±47 s;l-THP中劑量治療組訓練前后分別為389±95 s和528±42 s,治療6天后為386±76 s;l-THP高劑量治療組訓練前后分別為399±65 s和536±67 s,治療6天后為386±88 s。與NS對照組比較,大鼠嗎啡CPP模型組、NS治療組、l-THP低、中、高劑量治療5個組大鼠在白箱中停留時間明顯增加(均P0.01);經(jīng)不同濃度的l-THP治療6 d后,與NS治療組比較,l-THP中、高劑量治療組大鼠在白箱的停留時間減少(均P0.01)。與NS治療組比較,l-THP中、高劑量治療組大鼠NAc中NR1蛋白含量明顯降低(P0.05)。結(jié)論:1.NR1 m RNA和蛋白在大鼠嗎啡CPP獲得階段NAc腦區(qū)表達增加,而在嗎啡CPP消退階段均恢復到對照組水平,結(jié)合在嗎啡處理神經(jīng)元細胞中NR1蛋白表達的增多,提示NR1表達的改變在嗎啡精神依賴形成中發(fā)揮有一定的作用,可能是嗎啡精神依賴形成的機制之一;2.l-THP通過逆轉(zhuǎn)NAc腦區(qū)中NR1蛋白的異常表達,可能是加速嗎啡CPP效應消退的又一藥理作用機制。
【關鍵詞】：嗎啡 伏核 NR1 精神依賴 左旋延胡索乙素
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R749.61
【目錄】：

• 中英縮略詞對照表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-15
• 1 材料與方法15-23
• 2 結(jié)果23-29
• 3 討論29-31
• 4 結(jié)論31-32
• 參考文獻32-35
• 綜述：NMDA受體在阿片類精神依賴中作用35-42
• 參考文獻39-42
• 致謝42-43
• 作者簡介43

【參考文獻】

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本文編號：587909