本文關(guān)鍵詞：IL-6對BV2小膠質(zhì)細胞系鐵代謝相關(guān)蛋白的影響及其調(diào)控機制研究

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【摘要】：帕金森病(Parkinson's disease,PD)以靜止性震顫、肌強直、運動遲緩、姿勢反射障礙為主要癥狀。病理上表現(xiàn)為中腦黑質(zhì)致密帶(substantia nigra pars compa ct,SNpc)中多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)元丟失,進而導(dǎo)致紋狀體中DA含量下降。在可能引起PD發(fā)病的原因中,神經(jīng)炎癥越來越引起人們的關(guān)注。PD患者黑質(zhì)(substantia nigra,SN)中出現(xiàn)小膠質(zhì)細胞的激活,腦脊液中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白細胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)和白細胞介素6(interleukin-6, IL-6)含量出現(xiàn)了上升。1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)、6-羥基多巴胺(6-hydroxy dopamine,6-OHDA)、魚藤酮、annonacin都能引起PD動物模型SN區(qū)中小膠質(zhì)細胞的激活。PD患者SN中炎癥發(fā)生時,激活的小膠質(zhì)細胞中鐵含量異常升高,并且激活的小膠質(zhì)細胞可以影響到SNpc鐵的聚集,此外本實驗室前期已證明TNF-α、IL-1β可以影響神經(jīng)元的鐵代謝。那么小膠質(zhì)細胞釋放的IL-6是否會影響其自身鐵代謝的變化?本實驗應(yīng)用細胞培養(yǎng)、MTT、熒光定量PCR、免疫印跡等多項研究技術(shù),觀察了鐵對BV2小膠質(zhì)細胞釋放的IL-6的影響以及IL-6對BV2小膠質(zhì)細、胞鐵代謝的影響。結(jié)果如下： 1.100μmol/L枸櫞酸鐵銨(ferric ammonium citrate, FAC)處理BV2細胞12h后,BV2細胞中IL-6mRNA上調(diào)了30%,與對照組相比,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,n=6)。 2.選用30ng/ml、50ng/ml、100ng/ml IL-6處理BV2細胞24h,結(jié)果顯示各組活性與對照組相比細胞的存活率沒有變化(P0.05,n=4)。30ng/ml被選為后繼實驗中所應(yīng)用濃度。 3.30ng/ml IL-6處理BV2細胞24h,BV2細胞中鐵調(diào)節(jié)蛋白1(iron regulatory protein1,IRP1)的蛋白表達水平上調(diào),與對照組相比,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,n=5)。 4.30ng/ml IL-6處理BV2細胞24h,BV2細胞中鐵轉(zhuǎn)出蛋白ferroportinl (FPN1)的蛋白表達水平下調(diào),與對照組相比,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,n=5)。 5.30ng/ml IL-6處理BV2細胞1h,BV2細胞中磷酸化的JNK絲裂原活化蛋白激酶類(c-Jun N-terminal kinase,JNK)水平顯著增加(P0.05,n=3)。 6.10μmol/L、20μmol/L SP600125處理BV2.細胞24h,處理組與對照組相比細胞的存活率沒有變化(P0.05,n=4)。10μmol/L被選為后繼實驗中所應(yīng)用濃度。7.預(yù)先用10μmol/L JNK特異型抑制劑SP600125處理BV2細胞1h后,加入30ng/ml IL-6繼續(xù)作用24h,可以抑制由IL-6引起的IRP1蛋白表達水平上調(diào),與IL-6處理組相比差別有顯著性(P0.05,n=4)。 8.預(yù)先用10μ mol/L JNK特異型抑制劑SP600125處理BV2細胞1h后加入30ng/ml IL-6繼續(xù)作用24h,可以抑制由IL-6引起的FPN1蛋白表達水平下調(diào),與IL-6處理組相比有統(tǒng)計意義(P0.05,n=4)。 上述結(jié)果表明,FAC可增加BV2小膠質(zhì)細胞IL-6mRNA的表達。IL-6可以使BV2小膠質(zhì)細胞IRP1表達增加,FPN1表達降低。JNK抑制劑SP600125預(yù)處理可以阻斷IL-6所引起的IRP1與FPN1蛋白的表達變化。本實驗證實高鐵環(huán)境下,BV2小膠質(zhì)細胞合成IL-6增多,而IL-6可以調(diào)控BV2小膠質(zhì)細胞鐵代謝相關(guān)蛋白,該過程是通過JNK信號途徑實現(xiàn)的。本研究為PD炎癥發(fā)生與鐵代謝異常的相互作用提供了強有力的實驗基礎(chǔ)與理論依據(jù),并為PD的臨床抗炎治療提供了更加詳實的實驗基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：小膠質(zhì)細胞 白細胞介素6 鐵調(diào)節(jié)蛋白1 ferroportin1 JNK
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 材料和方法9-20
• 1. 細胞培養(yǎng)9-10
• 2. FAC處理BV2細胞系對IL-6 mRNA表達的影響10-12
• 3. MTT法檢測IL-6對細胞活性影響12-13
• 4. IL-6對BV2細胞中IRP1和FPN1蛋白表達水平的影響13-16
• 5. IL-6對BV2細胞JNK蛋白磷酸化水平的影響16-18
• 6. MTT法檢測JNK抑制劑SP600125對細胞活性影響18
• 7. IL-6對BV2細胞中IRP1和FPN1蛋白表達水平調(diào)控機制的研究18-19
• 8. 數(shù)據(jù)處理19-20
• 結(jié)果20-27
• 1. FAC對BV2細胞IL-6表達的影響20
• 2. MTT法檢測不同濃度IL-6作用BV2細胞24 h后細胞活性的變化20-21
• 3. IL-6對BV2細胞IRP1表達的影響21-22
• 4. IL-6對BV2細胞中FPN1表達的影響22
• 5. IL-6對BV2細胞中磷酸化JNK表達的影響22-23
• 6. MTT法檢測不同濃度的JNK抑制劑SP600125作用BV2細胞24 h后細胞活性的變化23-24
• 7. SP600125預(yù)處理抑制了IL-6對BV2細胞IRP1蛋白表達的上調(diào)24-25
• 8. SP600125預(yù)處理可以抑制IL-6對BV2細胞FPN1表達的上調(diào)25-27
• 討論27-32
• 參考文獻32-40
• 綜述40-66
• 參考文獻53-66
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果66-67
• 致謝67-68

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王佳;宋寧;姜宏;王俊;謝俊霞;;枸櫞酸鐵銨對小膠質(zhì)細胞釋放炎性因子的作用[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2012年03期

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本文編號：580132