本文關(guān)鍵詞：GDNF在慢性應(yīng)激所致神經(jīng)元損傷中的作用

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【摘要】：采用多因素慢性不可預(yù)見性應(yīng)激方法建立動物模型（應(yīng)激源：足底電擊、冰水游泳、高臺、斜籠、禁食、禁水、通宵照明，21天），探究慢性應(yīng)激小鼠行為學(xué)的改變以及腦區(qū)海馬和前腦皮層神經(jīng)元膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）表達(dá)的變化。并給予動物不同劑量中藥復(fù)方枳菊解郁湯和單味藥郁金和石菖蒲，通過開場、懸尾觀測各組小鼠的情緒改變、自覺活動和探索能力的改變；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀測小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力的改變；HE染色觀察小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化；免疫組化測定GDNF在小鼠海馬和前腦皮層的表達(dá)情況，探討慢性應(yīng)激和抑郁癥之間的關(guān)系以及枳菊解郁湯的抗抑郁作用機(jī)制。研究結(jié)果： 1.應(yīng)激組小鼠應(yīng)激后即刻的水平活動次數(shù)、垂直活動次數(shù)、修飾次數(shù)均較對照組明顯降低，中央格停留時間明顯延長，糞便粒數(shù)顯著增多；應(yīng)激結(jié)束后12h和24h應(yīng)激組小鼠的水平活動次數(shù)、垂直活動次數(shù)與修飾次數(shù)減少，糞便粒數(shù)增加，但差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，而中央格停留時間顯著增加；應(yīng)激結(jié)束后一周，應(yīng)激組小鼠的糞便粒數(shù)與中央格停留時間明顯增多，水平活動次數(shù)與垂直活動次數(shù)均明顯降低。 2.在應(yīng)激后即刻，對照組小鼠和應(yīng)激組小鼠在定位航行試驗(yàn)中的逃避潛伏期均顯著降低；應(yīng)激結(jié)束后12h、24h和應(yīng)激結(jié)束后一周，對照組小鼠的逃避潛伏期明顯降低，而應(yīng)激組小鼠的逃避潛伏期雖有下降趨向，但差異不顯著。與對照組小鼠相比，在應(yīng)激后即刻，應(yīng)激組小鼠空間搜索試驗(yàn)中原平臺象限的停留時間明顯減少；應(yīng)激結(jié)束后12h和24h，應(yīng)激組小鼠在原平臺象限的停留時間雖有所降低，但無統(tǒng)計學(xué)差異；應(yīng)激結(jié)束后一周，應(yīng)激組小鼠在原平臺象限停留的時間明顯縮短。 3.與對照組小鼠相比，應(yīng)激組小鼠海馬及前腦皮層神經(jīng)元數(shù)目減少，排列稀疏且比較散亂，細(xì)胞染色不均勻。在應(yīng)激后即刻，應(yīng)激組小鼠海馬和前腦皮層GDNF的陽性細(xì)胞數(shù)目和對照組小鼠相比較明顯減少，灰度值明顯增大；應(yīng)激結(jié)束后12h和24h，應(yīng)激組小鼠GDNF陽性細(xì)胞數(shù)減少，平均目標(biāo)灰度值增多，但均沒有顯著差異。應(yīng)激結(jié)束后一周應(yīng)激組小鼠腦區(qū)的GDNF陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，平均目標(biāo)灰度值增加。 4.①在開場行為測試中，模型組小鼠開場行為各指標(biāo)均較對照組相比有顯著性差異；氟西汀組和中藥中劑量小鼠開場行為各指標(biāo)與模型組相比差異均有顯著性，高劑量組水平活動次數(shù)、垂直活動次數(shù)及中央格停留時間均有明顯差異：而低劑量組、郁金、石菖蒲組小鼠無明顯差異。②在懸尾試驗(yàn)中，模型組小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)中的第一次靜止不動時間和后4min累積不動時間較對照組相比均明顯增加。氟西汀組和復(fù)方中藥中劑量組小鼠與模型組小鼠比較兩次不動時間均顯著減少；低劑量和高劑量組小鼠僅第一次靜止不動時間顯著減少；郁金組和石菖蒲組無顯著性差異。③在水迷宮實(shí)驗(yàn)中，模型組小鼠的總路程和逃避潛伏期與對照組相比均明顯延長；原平臺象限停留時間顯著縮短。和模型組小鼠相比，氟西汀組和中藥中劑量組小鼠的總路程和逃避潛伏期具有顯著性差異；高劑量組的逃避潛伏期只是最后一天明顯縮短，低劑量組、郁金和石菖蒲組小鼠的總路程和逃避潛伏期無顯著性差異。與模型組相比，氟西汀組、中藥低、中、高劑量組小鼠在原平臺象限停留的時間明顯延長，郁金組與石菖蒲組小鼠在原平臺象限停留的時間雖然延長但無顯著性差異。對照組小鼠經(jīng)過平臺的次數(shù)明顯多于模型組。與模型組小鼠相比，氟西汀組以及各藥物組經(jīng)過平臺的次數(shù)增多，且氟西汀組和中藥中、高劑量組小鼠具有顯著性差異。 5.對照組、氟西汀組、中藥中劑量組和高劑量組小鼠的海馬各區(qū)細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，數(shù)目多，邊界清晰，核位居胞體的中央，染色深；前腦皮層的神經(jīng)元形態(tài)完整，，層次緊密，染色均勻。低劑量組、郁金組與石菖蒲組小鼠海馬和前腦細(xì)胞排列比較稀疏、松散，數(shù)量少，細(xì)胞間隙大，且染色較淺。模型組小鼠海馬與前腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞變形，有的出現(xiàn)萎縮，細(xì)胞數(shù)目明顯減少，細(xì)胞間隙大，形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞染色淺，著色不均勻。 6.模型組小鼠腦內(nèi)海馬各區(qū)和前腦皮層的GDNF陽性細(xì)胞數(shù)目較對照組小鼠相比明顯降低，灰度值明顯增大；和模型組小鼠相比，各中藥組和氟西汀組小鼠海馬和前腦皮層GDNF陽性細(xì)胞數(shù)均有所增加，灰度值下降，以中藥中劑量差異最為顯著，而中藥低劑量組、郁金組和石菖蒲組小鼠無顯著性差異。研究結(jié)論： 1.慢性應(yīng)激可引起小鼠在新異環(huán)境下的自發(fā)活動和探究能力明顯減弱，小鼠空間學(xué)習(xí)與記憶能力明顯受損。 2.慢性應(yīng)激后可致小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生明顯的形態(tài)學(xué)變化，海馬和前腦皮層GDNF表達(dá)明顯下降。 3.枳菊解郁湯可明顯改善慢性應(yīng)激抑郁模型小鼠行為學(xué)的變化，明顯增強(qiáng)小鼠空間學(xué)習(xí)與記憶能力，表現(xiàn)出一定的抗抑郁效應(yīng)。 4.給予枳菊解郁湯后，可使抑郁模型小鼠海馬和前腦皮層GDNF的表達(dá)上調(diào)，以降低神經(jīng)元的損傷，發(fā)揮抗抑郁作用。
【關(guān)鍵詞】：慢性應(yīng)激 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF) 空間學(xué)習(xí)記憶 海馬 前腦皮層 枳菊解郁湯 抑郁癥
【學(xué)位授予單位】：曲阜師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R749.4
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-12
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1. 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）12-13
• 1.1 GDNF 概述12
• 1.2 GDNF 的生物學(xué)特性12-13
• 2. 慢性應(yīng)激13-14
• 2.1 應(yīng)激概述13-14
• 2.2 海馬和前額葉皮層14
• 3. 抑郁癥14-20
• 3.1 抑郁癥發(fā)生的假說15-16
• 3.2 抑郁癥動物模型的建立16-17
• 3.3 GDNF 在慢性應(yīng)激所致抑郁癥中的作用17-18
• 3.3.1 GDNF 與慢性應(yīng)激17-18
• 3.3.2 GDNF 與抑郁癥18
• 3.3.3 慢性應(yīng)激與抑郁癥18
• 3.4 抑郁癥的中醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展18-20
• 4.本研究的目的及意義20-21
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究21-42
• 一、慢性應(yīng)激致抑郁模型小鼠腦內(nèi) GDNF 的動態(tài)變化21-30
• 前言21
• 材料與方法21-24
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑21-22
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器22
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法22-24
• 2.1 動物分組22
• 2.2 慢性應(yīng)激抑郁動物模型的建立22
• 2.3 小鼠行為學(xué)指標(biāo)檢測22-23
• 2.3.1 開場實(shí)驗(yàn)（Open-field test）22
• 2.3.2 Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)22-23
• 2.4 各組小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)元形態(tài)學(xué)觀察和 GDNF 的表達(dá)23-24
• 2.4.1 蘇木素-伊紅（HE）染色23
• 2.4.2 免疫組織化學(xué)染色23-24
• 2.4.3 圖像分析24
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析方法24
• 結(jié)果24-28
• 1. 慢性應(yīng)激前后小鼠體重的變化24-25
• 2. 慢性應(yīng)激后小鼠開場行為的變化25
• 3. 慢性應(yīng)激后小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的變化25-27
• 3.1 小鼠定位航行學(xué)習(xí)能力的變化25-26
• 3.2 小鼠空間搜索記憶能力的變化26-27
• 4. 慢性應(yīng)激后小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化27
• 5. 慢性應(yīng)激對小鼠海馬和前腦皮層 GDNF 表達(dá)的影響27-28
• 討論28-30
• 二、枳菊解郁湯對慢性應(yīng)激致抑郁模型小鼠行為學(xué)的影響及 GDNF 的作用30-42
• 前言30
• 材料與方法30-31
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料30-31
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物30
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥品30-31
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器31
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法31
• 2.1 動物分組31
• 2.2 建立慢性應(yīng)激抑郁動物模型31
• 2.3 小鼠行為學(xué)指標(biāo)的檢測31
• 2.3.1 開場實(shí)驗(yàn)（Open-field test）31
• 2.3.2 懸尾實(shí)驗(yàn)（Tail-suspention test）31
• 2.3.3 Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)31
• 2.4 各組小鼠 HP 和 PFC 神經(jīng)元形態(tài)學(xué)觀察及 GDNF 表達(dá)檢測31
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析方法31
• 結(jié)果31-39
• 1. 各組小鼠體重的變化31-32
• 2. 各組小鼠開場行為的變化32
• 3. 各組小鼠懸尾行為的變化32-33
• 4. 各組小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的變化33-37
• 5.各組小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)元形態(tài)學(xué)的變化37-38
• 6.各組小鼠海馬和前腦皮層 GDNF 表達(dá)變化38-39
• 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 附圖43-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 在校期間的研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文54-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：571641