本文關鍵詞：6-姜酚對阿爾茨海默病的神經保護作用及其機制研究

  更多相關文章： 6-姜酚 β淀粉樣蛋白 PC12細胞 細胞凋亡 阿爾茨海默病 氧化應激 炎癥反應 Akt GSK-3β

【摘要】：背景與目的：阿爾茨海默病(AD)是一種常見的發(fā)生于老年及老年前期的神經系統退行性疾病,以進行性認知功能障礙、記憶損害、個性改變以及精神行為異常為主要表現,WHO已將AD列為21世紀五大重點疾病之一。目前,用于治療AD的藥物只能在一定程度上改善AD的臨床癥狀,而有效防止AD發(fā)生或者治愈AD的藥物尚未出現。我們前期的研究發(fā)現,生姜提取物對p淀粉樣蛋白(Aβ)誘導的AD模型鼠的行為功能障礙具有保護作用。而6-姜酚是從生姜中提取的酚類物質,是生姜提取物中的重要活性成分。本實驗通過體外孵育的方法觀察6-姜酚對Aβ-42聚集的影響,探討6-姜酚對Aβ1-42所致的大鼠PC12細胞損傷的保護作用及其可能的作用機制。方法：(1)Aβ1-42單獨或與不同濃度的6-姜酚于37℃培養(yǎng)箱中共同孵育5d后,采用硫磺素T(ThT)熒光檢測法分析6-姜酚對Aβ1-42聚集的影響；(2)未分化的PC12細胞經神經生長因子(NGF)作用5d分化為類神經元樣細胞后,通過MTT實驗檢測不同濃度Aβ1-42對PC12細胞作用24、48及72 h后的細胞存活率及觀察不同濃度6-姜酚對Ap1-42誘導細胞凋亡的保護作用；(3)通過Hoechst 33258核染色法檢測6-姜酚對Aβ1-42致PC12細胞凋亡的細胞核形態(tài)改變；(4)采用流式細胞凋亡術進一步分析6-姜酚對Ap1-42致PC12細胞凋亡的保護作用；(5)采用DCFH-DA熒光探針法檢測6-姜酚對Aβ1-42誘導PC12細胞產生氧自由基(ROS)的影響；(6)根據測定試劑盒檢測6-姜酚對Aβ1-42誘導PC12細胞產生乳酸脫氫酶(LDH)、抗氧化物歧化酶(SOD)、細胞內丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的影響；(7)采用Western Blot檢測6-姜酚對Aβ1-42誘導的PC12細胞糖原合成激酶3β (GSK-3β)、磷酸化GSK-3β (Ser9), Akt及磷酸化Akt (Ser473)表達的影響。結果：(1)6-姜酚與Ap1-42共同孵育5 d后的熒光強度均較Aβ1-42組顯著降低,提示6-姜酚對Aβ1-42的聚集具有拮抗作用；(2)Aβ1-42作用于PC12細胞,細胞存活率與Aβ1-42的劑量及作用時間呈負相關,其中10 μM的Aβ1-42作用48 h對PC12細胞產生較為顯著的損傷作用,因而我們以此作為AD的細胞模型,用于后續(xù)的實驗研究；(3)MTT實驗結果顯示,6-姜酚在80、120及200μM時均對Aβ1-42引起的細胞損傷具有顯著的保護作用,并且在劑量為120μM時具有最佳的作用效果；(4)Hoechst 33258核染色及流式細胞凋亡術實驗均提示6-姜酚在80、120及200μM時對Aβ1-42引起的細胞損傷具有顯著的保護作用；(5)Aβ1-42顯著增加細胞內ROS與MDA的含量及培養(yǎng)液中LDH的活性及NO的水平,而經6-姜酚預處理4h后ROS、MDA與NO的含量及LDH的活性均較Aβ1-42處理組顯著降低；此外,6姜酚處理組的SOD水平顯著高于Aβ1-42處理組的；(6)PC12細胞經Aβ1-42作用48 h后,GSK-3β及Akt的磷酸化水平均較正常組顯著降低,而80及120μM6-姜酚處理組中GSK-3β及Akt的磷酸化水平則均顯著高于Aβ1-42處理組的。結論：(1)6-姜酚可拮抗Aβ1-42的聚集,因而可能具有神經保護作用；(2)6-姜酚對Ap1-42致PC12細胞損傷具有保護作用,可能與其抗氧化損傷、抗炎癥作用,以及激活Akt的活性、抑制GSK-3β的活性有關。因此,6-姜酚對AD具有潛在的防治作用,其確切的作用機制有待進一步研究。
【關鍵詞】：6-姜酚 β淀粉樣蛋白 PC12細胞 細胞凋亡 阿爾茨海默病 氧化應激 炎癥反應 Akt GSK-3β
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 個人簡歷3-7
• 本文主要縮寫中英文對照表7-8
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 前言13-16
• 第一部分 6-姜酚抑制Aβ_(1-42)聚集并減小其神經毒性作用的研究16-37
• 1.1 材料17-19
• 1.1.1 主要試劑17-18
• 1.1.2 主要儀器18
• 1.1.3 主要試劑的配制18-19
• 1.2 方法19-24
• 1.2.1 體外實驗觀察6-姜酚對Aβ_(1-42)聚集的抑制作用19-20
• 1.2.2 PC12細胞的培養(yǎng)20-21
• 1.2.3 PC12細胞在NGF的作用下分化成神經元樣細胞21
• 1.2.4 MTT比色法篩選Aβ_(1-42)致PC12細胞損傷的濃度21
• 1.2.5 MTT比色法觀察6-姜酚對Aβ_(1-42)致PC12細胞損傷的影響21-22
• 1.2.6 Hoechst 33258核熒光染色法觀察細胞凋亡的形態(tài)改變22
• 1.2.7 流式細胞術檢測6-姜酚對Aβ_(1-42)誘導PC12細胞凋亡的影響22-23
• 1.2.8 熒光探針法檢測6-姜酚對Aβ_(1-42)誘導PC12細胞產生ROS的影響23
• 1.2.9 LDH、SOD活性及MDA、NO含量檢測23
• 1.2.10 統計學處理23-24
• 1.3 結果24-31
• 1.3.1 6-姜酚對Aβ_(1-42)聚集的抑制作用24
• 1.3.2 Aβ_(1-42)對PC12細胞存活率的影響24-25
• 1.3.3 6-姜酚對Aβ_(1-42)致PC12細胞損傷的抑制作用25-26
• 1.3.4 6-姜酚對Aβ_(1-42)致PC12細胞凋亡的細胞核形態(tài)改變26-27
• 1.3.5 流式細胞術分析6-姜酚對Aβ_(1-42)所致PC12細胞凋亡的影響27-28
• 1.3.6 6-姜酚對Aβ_(1-42)誘導PC12細胞產生ROS的影響28-29
• 1.3.7 6-姜酚對Aβ_(1-42)所致PC12細胞培養(yǎng)液中LDH活性的影響29-30
• 1.3.8 6-姜酚對Aβ_(1-42)所致PC12細胞培養(yǎng)液中SOD活性的影響30
• 1.3.9 6-姜酚對Aβ_(1-42)誘導PC12細胞產生MDA的影響30
• 1.3.10 6-姜酚對Aβ_(1-42)致PC12細胞培養(yǎng)液中NO含量的影響30-31
• 1.4 討論31-37
• 第二部分 6-姜酚減緩Aβ_(1-42)致PC12細胞損傷的相關機制研究37-44
• 2.1 材料37-39
• 2.1.1 主要試劑37-38
• 2.1.2 主要儀器38-39
• 2.1.3 主要試劑的配制39
• 2.2 方法39-41
• 2.2.1 PC12細胞的培養(yǎng)39
• 2.2.2 實驗分組及處理39
• 2.2.3 Western blot檢測PC12細胞GSK-3β、β-GSK-3β、Akt及-Akt蛋白的表達39-41
• 2.2.4 統計學處理41
• 2.3 結果41-43
• 2.3.1 6-姜酚對Aβ_(1-42)誘導PC12細胞GSK-3β磷酸化水平的影響41-42
• 2.3.2 6-姜酚對Aβ_(1-42)誘導PC12細胞Akt磷酸化水平的影響42-43
• 2.4 討論43-44
• 總結44
• 參考文獻44-52
• 綜述52-73
• 參考文獻62-73
• 致謝73-74
• 攻讀碩士學位論文期間(待)發(fā)表的論文74

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 Mingyue Jia;Mingyu Wang;Yi Yang;Yixin Chen;Dujuan Liu;Xu Wang;Lei Song;Jiang Wu;Yu Yang;;rAAV/ABAD-DP-6His attenuates oxidative stressinduced injury of PC12 cells[J];Neural Regeneration Research;2014年05期

2 王少鵬;楊光;;姜酚生物活性研究進展[J];中國公共衛(wèi)生;2013年10期

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本文編號：561305