本文關(guān)鍵詞：miR-124-3p通過負(fù)調(diào)控Caveolin-1表達(dá)在AD中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制研究

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【摘要】：目的：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是最常見的癡呆類型,其發(fā)病機(jī)制仍未明確。microRNA(miRNA)在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中的作用日益受到重視,近年來,miR-124在神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病中作用及機(jī)制的研究已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。Caveolin-1是細(xì)胞膜小凹的標(biāo)志蛋白,與AD密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過AD細(xì)胞模型證實(shí)了miR-124-3β對(duì)Caveolin-1的靶向抑制作用,研究miR-124-3β通過調(diào)控Caveolin-1的表達(dá)對(duì)細(xì)胞內(nèi)Tau蛋白磷酸化水平及細(xì)胞凋亡水平的影響,并進(jìn)一步探索其發(fā)揮作用的機(jī)制,以期為AD的防治提供新的靶點(diǎn)。方法：體外培養(yǎng)野生型N2a (N2a/WT)和N2a/APPswe細(xì)胞,熒光定量PCR及Western blot分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)miR-124-3β、APP和Caveolin-1的表達(dá)；雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)分析miR-124-3β與Caveolin-1之間靶向調(diào)控關(guān)系；N2a/APPswe細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-124-3β模擬物(mimics)、Caveolin-1過表達(dá)載體(pcDNA-Caveolin-1)及Caveolin-1干擾RNA(Caveolin-l-siRNA)后,熒光定量PCR檢測(cè)Caveolin-1、Tau mRNA表達(dá)水平的變化,流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡水平,Western blot分別檢測(cè)Caveolin-1、Tau和Tau-Ser404、GSK-3β、GSK-3p-Ser9、PI3K、 Akt、Akt-Ser473蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果：與WT組比較,APPswe組miR-124-3β表達(dá)明顯降低(P0.01),APP的mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高(P0.01),Caveolin-1 mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高(P0.001；P0.05)；雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)表明,與突變型載體轉(zhuǎn)染組相比,野生型載體共染組的相對(duì)熒光素酶活性明顯減弱(P0.01)；N2a/APPswe細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-124-3β mimics或者Caveolin-1干擾RNA后,細(xì)胞凋亡率降低(P0.001),Caveolin-1表達(dá)降低(P0.001),Tau-Ser404/Tau表達(dá)水平降低(P 0.01),PI3K表達(dá)水平升高(P0.01),Akt-Ser473/Akt表達(dá)水平升高(P 0.01), GSK-3β-Ser9/GSK-3β表達(dá)水平升高(P0.001)；N2a/APPswe細(xì)胞轉(zhuǎn)染Caveolin-1過表達(dá)載體后,細(xì)胞凋亡率增加(P0.001),Tau-Ser404/Tau表達(dá)水平升高(P0.01), PI3K表達(dá)水平降低(P0.001),Akt-Ser473/Akt表達(dá)水平降低(P0.001),GSK-3p-Ser9/GSK-3β表達(dá)水平降低(P0.001)。結(jié)論：Caveolin-1上游受到miR-124-3β的靶向負(fù)性調(diào)控,下游通過調(diào)控PI3K/Akt/GSK3β信號(hào)通路的活性進(jìn)而影響Tau蛋白的磷酸化水平；因此AD中可能存在miR-124-3β-Caveolin-1-PI3K/Akt/GSK3β的調(diào)控機(jī)制,抑制AD細(xì)胞中Tau蛋白異常過度磷酸化而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用(抑制細(xì)胞凋亡),這將為AD的防治提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：miR-124-3p 阿爾茨海默病 Tau蛋白 Caveolin-1 糖原合成酶激酶-3β
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 1 材料與儀器14-16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-25
• 3 結(jié)果25-36
• 4 討論36-42
• 全文總結(jié)42-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 文獻(xiàn)綜述50-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 致謝59-60
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄60

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本文編號(hào)：539249