目的構(gòu)建分泌表達(dá)抗Aβ42胞內(nèi)抗體的重組腺相關(guān)病毒,為進(jìn)一步研究胞內(nèi)抗體靶向識(shí)別、清除細(xì)胞內(nèi)Aβ42以達(dá)到診斷和治療AD提供了基礎(chǔ)材料。 方法①根據(jù)GenBank提供的Aβ42單克隆抗體的已知序列(專利號(hào)WO2008/156621 A1),選用Aβ42單克隆抗體重、輕鏈可變區(qū)CDR1和CDR3及其重鏈的骨架結(jié)構(gòu),設(shè)計(jì)構(gòu)建了細(xì)胞內(nèi)抗體mAbA/B, (mAbA:VHCDR1-VLCDR3; mAbB: VHCDR3-VLCDR1)應(yīng)用DNASIS計(jì)算機(jī)軟件設(shè)計(jì)引物。用非對(duì)稱互補(bǔ)引物／模板法,上游5’端加入保護(hù)堿基和PmaCI酶切位點(diǎn),下游3’端加入終止密碼子TAG和BamHI酶切位點(diǎn),通過兩次PCR獲得目的片段。用PmaCI和BamHI雙酶切,得到含有粘著末端的目的基因片斷。②將純化后的mAbA/B分別與載有NT4信號(hào)肽、TAT穿膜肽、6×His標(biāo)簽肽的pSSHG/NT4-TAT-His載體用DNA連接酶相連,構(gòu)建重組質(zhì)粒pSSHG/NT4-TAT-His-mAbA/B。③采用磷酸鈣沉淀法三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,獲得重組攜帶NT4-TAT-His-mAbA/B的AAV載體,RT-PC...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
提要
中文摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 前言
    1.2 研究背景回顧
第2章 mAbA/B基因克隆及序列分析
    2.1 構(gòu)建方案
    2.2 材料和方法
    2.3 結(jié)果
第3章 NT4-TAT-His-mAbA/B融合基因的構(gòu)建及鑒定
    3.1 構(gòu)建方案
    3.2 材料和方法
    3.3 結(jié)果
第4章 pssHG/NT4-TAT-His-mAbA/B重組腺相關(guān)病毒包裝及滴度測(cè)定
    4.1 重組腺相關(guān)病毒pssHG/NT4-TAT-His-mAbA/B的構(gòu)建方案
    4.2 材料和方法
    4.3 結(jié)果
第5章 重組腺相關(guān)病毒在Hela中表達(dá)及其與Aβ₄₂細(xì)胞內(nèi)結(jié)合初步探索細(xì)胞內(nèi)抗體的保護(hù)作用
    5.1 材料和方法
    5.2 結(jié)果
第6章 討論
    6.1 構(gòu)建細(xì)胞內(nèi)抗體的意義
    6.2 pssHG/NT4-TAT-His-mAbA/B重組腺相關(guān)病毒載體構(gòu)建、包裝及其意義
    6.3 本研究的意義及創(chuàng)新
    6.4 展望
第7章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及科研成果
致謝



本文編號(hào)：4013862