目的探討miR-369-3p對(duì)缺氧誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元細(xì)胞(Hhn)增殖、凋亡的影響及其作用機(jī)制。方法將Hhn細(xì)胞置于持續(xù)充入95%N₂+5%CO₂的密閉培養(yǎng)箱中進(jìn)行缺氧處理48 h (缺氧組),正常培養(yǎng)的細(xì)胞作為對(duì)照組。將miR-NC、miR-369-3p、anti-miR-NC、anti-miR-369-3p轉(zhuǎn)染至Hhn細(xì)胞中,分別記為miR-NC組、miR-369-3p組、anti-miR-NC組、anti-miR-369-3p組;將anti-miR-NC、anti-miR-369-3p、pcDNA3.1、pcDNA3.1-NAMPT分別轉(zhuǎn)染至Hhn細(xì)胞中再進(jìn)行缺氧處理,分別記為缺氧+anti-miR-NC組、缺氧+anti-miR-369-3p組、缺氧+pcDNA3.1組、缺氧+pcDNA3.1-NAMPT組;將anti-miR-369-3p質(zhì)粒分別與si-NC、si-NAMPT共轉(zhuǎn)染至Hhn細(xì)胞中再進(jìn)行缺氧處理,分別記為缺氧+anti-miR-369-3p+si-NC組、缺氧+anti-miR-369-3p+si-NAMPT組;轉(zhuǎn)染均采...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 方法
        1.2.1 海馬神經(jīng)元細(xì)胞Hhn分離培養(yǎng)與鑒定
        1.2.2 細(xì)胞缺氧處理與分組
        1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)檢測(cè)miR-369-3p表達(dá)水平
        1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        1.2.5 蛋白質(zhì)印跡(Western blot)檢測(cè)CyclinD1、P21、Bcl-2、Bax和NAMPT蛋白表達(dá)水平
        1.2.6 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖活性
        1.2.7 SOD和MDA試劑盒分別檢測(cè)SOD活性和MDA含量
        1.2.8 雙熒光素酶報(bào)告
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 miR-369-3p、NAMPT在缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞Hhn中的表達(dá)
    2.2 抑制miR-369-3p對(duì)缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞Hhn增殖、凋亡及SOD、MDA的影響
    2.3 miR-369-3p靶向、調(diào)控NAMPT的表達(dá)
    2.4 過(guò)表達(dá)NAMPT對(duì)缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞Hhn增殖、凋亡及SOD、MDA表達(dá)的影響
    2.5 抑制NAMPT表達(dá)能逆轉(zhuǎn)抑制miR-369-3p對(duì)缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞Hhn增殖、凋亡及SOD、MDA表達(dá)的影響
3 討論



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