背景阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease,AD）是一種老年人中常見的以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和行為損害為特征的神經(jīng)退行性疾病。AD的主要病理改變?yōu)榧?xì)胞外Aβ淀粉樣蛋白沉積和細(xì)胞內(nèi)tau蛋白異常磷酸化伴隨突觸和神經(jīng)元的丟失,主要累及部位為皮層和海馬。目前該病缺乏有效藥物治療,其病因與發(fā)病機(jī)制尚未闡明。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNAs,IncRNAs）是一類長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)核苷酸,無(wú)或少有蛋白編碼功能的非編碼RNA分子。可參與多種途徑基因表達(dá)調(diào)控過(guò)程。目前關(guān)于IncRNAs與AD的研究中,差異表達(dá)的IncRNAs及其功能研究主要集中于海馬區(qū),尚無(wú)前額葉皮層（prefrontal cortex,PFC）差異分析的系統(tǒng)闡述。有文獻(xiàn)報(bào)道,在對(duì)118例AD患者神經(jīng)影像學(xué)的觀察中發(fā)現(xiàn),AD患者常出現(xiàn)的妄想,淡漠,抑郁等精神癥狀與PFC緊密相關(guān)。因此本研究采用高通量測(cè)序的方法檢測(cè)IncRNAs在AD患者與正常對(duì)照組PFC,AD模型小鼠和野生型小鼠PFC轉(zhuǎn)錄組改變,篩選出AD相關(guān)差異性表達(dá)的mRNA和IncRNAs并進(jìn)行比較分析。隨后對(duì)AD患者轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)一步挖掘,... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中英文縮略詞
摘要
Abstract
第一部分 阿爾茨海默病患者與同齡正常人前額葉皮層lncRNAs表達(dá)及功能分析
    摘要
    Abstract
    前言
    材料和方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 阿爾茨海默病患者和同齡正常人PFC組織
            1.2 主要試劑與儀器
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 腦組織總RNA提取與質(zhì)控
            2.2 LncRNAs測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程(建庫(kù)和測(cè)序)
            2.3 信息分析流程
            2.4 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
    結(jié)果
        1.總RNA提取及質(zhì)量檢測(cè)
        2.LncRNAs測(cè)序原始數(shù)據(jù)基本情況
        3.基因組比對(duì)
        4.LncRNAs和mRNA轉(zhuǎn)錄本表達(dá)
        5.差異表達(dá)分析
        6.qRT-PCR驗(yàn)證部分差異表達(dá)的lncRNAs和mRNA
        7.功能分析
        8.差異表達(dá)lncRNAs KEGG通路分析
        9.差異表達(dá)lncRNAs-mRNA互作分析
    討論
    小結(jié)
第二部分 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠與野生型小鼠前額葉皮層lncRNAs表達(dá)及功能分析
    摘要
    Abstract
    前言
    材料和方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠與野生型C57小鼠PFC組織
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的鑒定
            2.2 腦組織處理
            2.3 腦組織總RNA提取與質(zhì)控
            2.4 lncRNAs測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程(建庫(kù)和測(cè)序)
            2.5 信息分析流程(圖2-3)
            2.6 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
    結(jié)果
        1.APP swe/PS1 AE9(PAP)雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠基因型鑒定
        2.總RNA提取及質(zhì)量檢測(cè)
        3.lncRNAs測(cè)序原始數(shù)據(jù)基本情況
        4.基因組化對(duì)
        5.lncRNAs和mRNA轉(zhuǎn)錄本表達(dá)
        6.差異表達(dá)分析
        7.qRT-PCR驗(yàn)證部分差異表達(dá)的lncRNAs和mRNA
        8.功能分析
        9.差異表達(dá)lncRNAs KEGG通路分析
        10.差異表達(dá)lncRNAs-mRNA互作分析
    討論
    小結(jié)
第三部分 AD患者與AD模型小鼠前額葉皮層lncRNAs表達(dá)及功能比較分析
    摘要
    Abstract
    前言
    材料和方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 聚類分析算法
            2.2 DAVID基因功能富集分析軟件
            2.3 同源基因表達(dá)模式評(píng)估
            2.4 同源lncRNAs表達(dá)模式評(píng)估
            2.5 lncRNAs-mRNA功能調(diào)控分析
    結(jié)果
        1.人和小鼠lncRNAs測(cè)序原始數(shù)據(jù)基本情況
        2.人與小鼠PFC同源mRNA和lncRNAs表達(dá)模式
        3.人與小鼠PFC高表達(dá)mRNA和lncRNAs的生物學(xué)功能
        4.AD患者和AD模型小鼠差異表達(dá)mRNA和lncRNAs比較分析
        5.AD患者與AD模型小鼠PFC差異表達(dá)lncRNAs GO分析比較
        6.AD患者與AD模型小鼠PFC差異表達(dá)lncRNAs KEGG分析比較
    討論
    小結(jié)
第四部分 lncRNA MEG3通過(guò)調(diào)節(jié)HDAC2和突觸相關(guān)蛋白表達(dá)參與認(rèn)知功能損傷的作用
    摘要
    Abstract
    前言
    材料和方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞系
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器和材料
            1.4 主要試劑配制
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 miRNA-656-3p, novol-21-5p, MEG3和mRNA表達(dá)水平檢測(cè)
            2.3 表達(dá)載體構(gòu)建
            2.4 慢病毒制備及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建
            2.5 腺病毒制備及轉(zhuǎn)染
            2.6 細(xì)胞分選
            2.7 CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖
            2.8 細(xì)胞免疫熒光化學(xué)染色
            2.9 RNAscope原位雜交
            2.10 細(xì)胞蛋白提取
            2.11 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)
        3.統(tǒng)計(jì)方法
    結(jié)果
        1.MEG3共表達(dá)分析及在腦組織中的驗(yàn)證
        2.SH-SY5Y細(xì)胞病毒轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
        3.MEG3抑制神經(jīng)細(xì)胞增殖
        4.MEG3損傷SY5Y細(xì)胞形態(tài)
        5.MEG3增強(qiáng)HDAC2的表達(dá)
        6.MEG3調(diào)控突觸相關(guān)蛋白的表達(dá)
        7.miR-656-3p和novel-21-5p在各組織中及MEG3轉(zhuǎn)染后的表達(dá)
    討論
    小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]p53 mutations in colorectal cancer-molecular pathogenesis and pharmacological reactivation[J]. Xiao-Lan Li,Jianbiao Zhou,Zhi-Rong Chen,Wee-Joo Chng.  World Journal of Gastroenterology. 2015(01)



本文編號(hào)：3678781