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大鼠Kir6.2基因真核表達載體的構建及其在HEK293細胞中的表達

發(fā)布時間:2022-02-28 19:49
  研究目的ATP敏感型鉀通道(ATP-sensitive potassium channels, KATP)是一種偶聯(lián)細胞電活動和細胞代謝的特殊通道,在多種不同的組織廣泛分布,KATP是由兩種不同的亞基(Kir6.x和SURx)以1:1組合形成的異構八聚體,Kir6.x和SUR亞基之間的不同組合可以形成多種不同生理及藥理學特征的通道。目前Kir6.2在阿爾茨海默病發(fā)生發(fā)展中的具體作用機制尚不是很清楚。本研究旨在通過克隆Kir6.2基因,成功構建真核表達載體pcDNA3.0/Kir6.2,并將重組質粒轉染HEK293細胞,獲得高表達Kir6.2基因的細胞克隆。研究方法1.從SD大鼠腦組織中提取總RNA,采用RT-PCR方法獲得Kir6.2基因的全長cDNA,經(jīng)0.8%瓊脂糖凝膠電泳進行初步鑒定,對目的PCR產(chǎn)物進行切膠回收。2.將回收的PCR產(chǎn)物插入pEASY-T1克隆載體,取陽性克隆進行序列測定。3.測序正確的質粒pEASY-T1/Kir6.2用限制內切酶HindⅢ和BamH I進行雙酶切,純化回收約1.2Kb大小的目的片段,質粒pcDNA3.0也進行HindⅢ和BamH I雙酶切,純化... 

【文章來源】:山東大學山東省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】:52 頁

【學位級別】:碩士

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材料與方法
結果
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結論
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【參考文獻】:
期刊論文
[1]ATP敏感性鉀通道分子結構和功能的組織特異性研究進展[J]. 朱慶磊,汪海,肖文彬.  中國藥理學通報. 2001(02)
[2]ATP敏感鉀通道亞單位在大鼠組織中的表達[J]. 任亞軍,佟曉永,王曉良.  中國藥理學通報. 2000(02)



本文編號:3645481

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