背景:甲基苯丙胺（methamphetamine,METH）是一類常見的精神興奮性藥物,長期濫用會導致神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生嚴重且不可避免的損傷性改變。大量研究表明,METH可誘導神經(jīng)細胞毒性損傷,包括凋亡、自噬等。但其誘導神經(jīng)元損傷的準確機制仍不明確。近年研究發(fā)現(xiàn),環(huán)狀RNA（circular RNA,circRNA）參與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的調(diào)控。然而,目前circRNA在METH致神經(jīng)毒性的病理過程中的作用及機制研究還相對薄弱。目的:檢測METH誘導原代腦皮層神經(jīng)元損傷中的circRNA表達譜變化;篩選潛在的參與調(diào)控METH神經(jīng)毒性過程的circRNA,預測差異表達circRNA的生物學功能;探究位于其下游的基因變化,及它們與成癮行為之間的聯(lián)系。方法:（1）METH損傷原代腦皮層神經(jīng)元后的circRNA表達譜分析結(jié)果:培養(yǎng)新生鼠腦皮層神經(jīng)元并使用合適濃度的METH進行處理并提取樣本;應用高通量轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)檢測METH處理后的circRNA表達譜變化;對差異表達的circRNA關(guān)聯(lián)的基因進行GO分析及KEGG分析,并構(gòu)建聚類分析及火山圖分析尋找差異表達的circRNA;利用qRT-PCR對候選的c... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＭＥＴＨ誘導原代腦皮層神經(jīng)元損傷

?（ｎｔ）??ｃ????…?．?－１０?１??￡?Ａｎｋｒｄ１１??ｖ?３１?＾??｜?Ｗｈｓｃｌ??：－一，十必…?Ｒａｐ９ｅｆｅ??Ｉ?ＬｉｎＳＡ??Ｉ?Ｈｏｍｅｒｌ??？?戀?Ｃ１?Ｃ２?Ｃ３?Ｔ１?Ｔ２?Ｔ３??Ｄ?２．５－??ｒ?ａ?—?一關(guān)??ｌｉ２，０＇?＾?＾?Ｉ?＿?Ｃｏｎｔｒｏｌ??ｉｌｉｌｉｌ?ｉｌ?ｉｈｌ?ｉｉ?ｆｔ?ｈ?ｙ??Ｖ．?Ｖ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??。，Ｖ％，?／??圖２高通量轉(zhuǎn)錄組測序明確ＭＥＴＨ處理后差異表達的ｃｉｒｃＲＮＡ。（Ａ）我們根據(jù)測序所??得的ｃｉｒｃＲＮＡ的差異倍數(shù)（ＦＣ）及Ｐ值制作了火山圖，以Ｐ值小于０．０５及ＦＣ２１．５倍為??篩選界限，紅色表示上調(diào)的ｃｉｒｃＲＮＡ，綠色表示下調(diào)的ｃｉｒｃＲＮＡ。（Ｂ）我們對測序所??得ｃｉｒｃＲＮＡ的長度分布進行統(tǒng)計，橫坐標以５０ｎｔ為長度間隔。（Ｃ）左側(cè)所示為測序所??有ｃｉｒｃＲＮＡ的熱圖，我們篩選了?８個ｃｉｒｃＲＮＡ如（Ｃ）右側(cè)所示，紅色表示上調(diào)，綠色??表示下調(diào)。Ｃ表示對照組，Ｔ表示加藥處理組。（Ｄ）我們對篩選的ｃｉｒｃＲＮＡ及預測的??２個６？：１＾八進行卩１０＾０１檢測，結(jié)果以２－＾？形式展現(xiàn)。＊＊＊：表示／＞＜０．００１；＊＊＊＊表??３１??

ｒｅｓｐｏｎｓｅ?ｔｏ?ｃｏｃａｉｎｅ?）之間存在聯(lián)系。??ｃｉｒｃＨｏｍｅｒｌ的ｐａｒｅｎｔ基因Ｈｏｍｅｒｌ位于小鼠第十三號染色體上。Ｈｏｍｅｒｌ共含１２??個外顯子，其中第３，４，５，６號外顯子組成／ｃｉｒｃＨｏｍｅｒｌ，且由第３號外顯子??頭與第６號外顯子尾反向剪接形成ｃｉｒｃＨｏｍｅｒｌ的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。我們根據(jù)該反向剪??接位點（ｂａｃｋ－ｓｐｌｉｃｅ?ｊｕｎｃｔｉｏｎ）設計ｑＲＴ－ＰＣＲ特異性引物，并對擴增產(chǎn)物進行測??序發(fā)現(xiàn)其包含該位點序列，證實ｃｉｒｃＨｏｍｅｒｌ的環(huán)狀結(jié)構(gòu)（圖４Ａ）。并且，我們??通過ＲＮａｓｅ?Ｒ核酸外切酶消化實驗，發(fā)現(xiàn)ｃｉｒｃＨｏｍｅｒｌ能夠耐受ＲＮａｓｅ?Ｒ消化作??用，而線性ＨｏｍｅｒｌｍＲＮＡ則易被消化（圖４Ｂ），進一步提ＴＫｃｉｒｃＨｏｍｅｒｌ穩(wěn)定??的環(huán)狀結(jié)構(gòu)特征。隨后，我們針對ｃｉｒｃＨｏｍｅｒｌ的特異位點設計了熒光探針進行??ＦＩＳＨ定位實驗。我們利用共聚焦顯微鏡觀察到ｃｉｒｃＨｏｍｅｒｌ的紅色熒光主要分布??于胞質(zhì)中（圖４Ｃ）。??Ａ?Ｃｈｒ１３（ｑＣ３）?…一ｗｉｍ－一＿ｉｒｒｒ?ｒ???■?＿ｉｒ—?—?ｔｉ?■■?０???■?Ｍｏｃｋ????????＇?Ｉ?—－１?＿?ＲＮａｓｅ?Ｒ??Ｅ＊〇ｎ１???Ｅ？ｎｉ２?■■＊■■§?■■一＂Ｗ＂？？？＂?Ｅ＊〇＂１１?Ｅｘｏｉ．１２?Ｊ?Ｔ?丨’…｜??ｉｒ．?■??．＾；?ｉ?ｉｌｌ?Ｉ??Ｏｉ?ｆ?ｉ?ｎ?ｆ?Ｉｔ?ｉ?ｉ?＾?ｌｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｈ?ｉ?ｆ??／??ｃ??ｃｉｒｃＨｏｍｅｒｌ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??ＤＩＤ??圖４?ｃｉｒｃＨｏｍｅｒｌ的環(huán)狀結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性。（Ａ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Circular HDAC9/microRNA-138/Sirtuin-1 Pathway Mediates Synaptic and Amyloid Precursor Protein Processing Deficits in Alzheimer’s Disease[J]. Yanjun Lu,Lu Tan,Xiong Wang.  Neuroscience Bulletin. 2019(05)
[2]中腦邊緣獎賞系統(tǒng)參與阿片類藥物成癮的環(huán)路機制[J]. 孫國林,張詠梅.  中國藥理學通報. 2019(05)
[3]甲基苯丙胺的急性和慢性作用機理的研究進展[J]. 衛(wèi)星辰,周小爽,徐嘉珂,白潔.  生命科學. 2014(09)



本文編號：3402947