背景阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease,AD）是一種與年齡相關的神經系統(tǒng)退行性疾病,也是造成人類死亡的第六大常見原因。雖然目前已有大量的基礎研究及臨床前實驗探討其致病機制及潛在治療靶點,但目前仍缺乏安全有效的治療策略。近年來,間充質干細胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）移植成為治療AD的一種有前景的治療方法。然而,移植的MSCs在AD腦組織微環(huán)境中增殖能力差、存活率低,限制了其治療效果。Lin28B是一種高度保守的RNA結合蛋白,可促進多種干細胞的自我更新和存活能力,但目前對lin28B是否能促進移植的MSCs在AD中的存活尚無研究。目的探討lin28B是否可促進移植的MSCs的存活,使之能夠在AD腦組織微環(huán)境內長期存活并發(fā)揮神經保護作用。材料與方法1.從6周齡C57BL/6J雄性小鼠股骨中提取MSCs,利用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)MSCs,留取4-10代MSCs備用。2.構建lin28B過表達慢病毒載體和空病毒載體,并轉染至MSCs中。將MSCs分為三組:lin28B MSCs（lin28B 過表達 MSCs 組）、vector MSCs（載體... 

【文章來源】：鄭州大學河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２：過表達ｌｉｎ２８Ｂ促進ＭＳＣｓ增殖和遷移能力

?結果???（３）?Ｂｒｉｇｈｔ?ｆｉｅｌｄ?Ｆｌｏｕｒｅｓｃｅｎｔ?ｆｉｅｌｄ?Ｍｅｒｇｅ??圖１：慢病毒轉染ＭＳＣｓ。⑶熒光顯微鏡觀察ｌｉｎ２８Ｂ過表達ＭＳＣｓ和載體組ＭＳＣｓ的轉染??效率（比例尺為ＨＫＨｉｍ）。Ｌｉｎ２８Ｂ：過表達ｌｉｎ２８Ｂ?ＭＳＣｓ；?Ｖｅｃｔｏｒ：轉染空病毒載體的ＭＳＣｓ；??Ｂｒｉｇｈｔ?ｆｉｅｌｄ：光鏡視野；Ｆｌｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｆｉｅｌｄ：熒光視野。??（ａ）?｜?（ｂ＞?（ｃ）?｜?（ｄ）?ｃｃｋ－８??Ｉｒ］｜?參Ｉ：］?）??�。�°?Ｉ?—－ＧＡ＿ｔｉ�！�?〇Ｈ??？嘗、，ＶＶ。?Ｗ?ｕａｙｐ??（ｅ）?〇??ＵＡｌＡＬ?ｌｉｂｉＥ??０?５０?１００?１５０?２００?０?５０?１００?１５０?２００?２５０?０?５０?１００?１５０?２００?２５０?ｒ＞?＾?ｊ??ＦＬ２－Ａ?ＰＥ－Ａ?ＦＬ２－Ａ?ＰＥ－Ａ?ＦＬ２－Ａ?ＰＥ－Ａ?＾?＾ｔ＞??⑴??Ｌｉｎ２８Ｂ?Ｖｅｃｔｏｒ?Ｃｏｎｔｒｏｌ??〇ｈＨＥＨＢＨＢ?？４°?Ｉ?＾??圖２：過表達ｌｉｎ２８Ｂ促進ＭＳＣｓ增殖和遷移能力。（ａ）?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測各組ＭＳＣｓ中ｌｉｎ２８Ｂ??ｍＲＮＡ表達水平（ｎ＝３）。（ｂ，?ｃ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ檢測各組ＭＳＣｓ中ｌｉｎ２８Ｂ蛋白表達水平（ｎ＝３）。??（ｄ）?ＣＣＫ－８檢測各組ＭＳＣｓ增殖能力（ｎ＝５）。（ｅ）流式細胞數(shù)檢測細胞周期分布（ｎ＝３）。⑴劃??痕實驗和ｔｒａｎｓｗｅｌｌ實驗檢測各組ＭＳＣｓ遷移能力（比例尺為丨０〇ｎｍ），ｐ?＜?０．０５，＊＊＊ｐ?＜?０．００１??ＧＡＰＤＨ：磷酸甘油醛脫氫酶。??２１??

？?＇?＾?＇■?＾??＜?ＡＰＣ??（ｂ）?（ｃ）??—２”?＿?＾?ＣＯ－丨二＝３?一一義■？??ｔ?＿?Ｌｉｎ２８Ｂ?Ｋ??＾?１５－?丄?Ｔ?ｖ?Ｖｅｃｔｏｒ??謹１〇?Ｉ?Ｃｏｎ，ｒｏｌ?ｃａｓｐａｓｅ－３??ｉ：ｉｉｌ?“ｉ?圓義?＿？??ｅａｒｌｙ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｌａｔｅ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｎｅｃｒｏｓｉｓ?Ｌｉｎ２８Ｂ?Ｖｅｃｔｏｒ?Ｃｏｎｔｒｏｌ??（ｄ）?（ｅ）?ｇ?１．〇ｌ??ｌｉｌｉ?ＩＩＩ！??—／?ｙ?ｃ／?／ｃ／??圖３：?Ｌｉｎ２８Ｂ可增強經ＡＰ１４２處理的ＭＳＣｓ的抗凋亡能力。（ａ，ｂ）?ＡＰ卜４２處理各組ＭＳＣｓ?４８ｈ??后，用流式細胞儀檢測各組細胞凋亡比例。（存活細胞：左上象限；早期凋亡細胞：右下象??限；晚期凋亡細胞：右上象限；壞死細胞，左上象限）ｎ?＝?３＾ｃ－ｅ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ法檢測經ＡＰＩ４２??處理后各組?ＭＳＣｓ?中?ｃｌｅａｖｅｄ?ｃａｓｐａｓｅ?３?和?ｃａｓｐａｓｅ?３?蛋白的表達情況。＊ｐ?＜?０．０５，?＊＊ｐ?＜?０＿０１，??＊＊＊ｐ?＜?０．００１．?Ｌｉｎ２８Ｂ：?ｌｉｎ２８Ｂ?過表達?ＭＳＣｓ；?Ｖｅｃｔｏｒ：載體組?ＭＳＣｓ；?Ｃｏｎｔｒｏ丨：對照組?ＭＳＣｓ。??２２??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Nanocarriers as a powerful vehicle to overcome blood-brain barrier in treating neurodegenerative diseases: Focus on recent advances[J]. Xiaoqian Niu,Jiejian Chen,Jianqing Gao.  Asian Journal of Pharmaceutical Sciences. 2019(05)
[2]Exosome-based small RNA delivery:Progress and prospects[J]. Mei Lu,Haonan Xing,Zhe Xun,Tianzhi Yang,Pingtian Ding,Cuifang Cai,Dongkai Wang,Xiaoyun Zhao.  Asian Journal of Pharmaceutical Sciences. 2018(01)



本文編號：3290941