目的:探索過表達(dá)腦紅蛋白（neuroglobin,NGB）對轉(zhuǎn)染了p APPswe的SH-SY5Y細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制。方法:成功構(gòu)建過表達(dá)NGB的質(zhì)粒p EGFP-NGB并轉(zhuǎn)染入已預(yù)先轉(zhuǎn)染了p APPswe的SH-SY5Y細(xì)胞,MTT法檢測過表達(dá)NGB對該細(xì)胞存活率的影響;JC-1法檢測其對細(xì)胞線粒體膜電位的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測過表達(dá)NGB對細(xì)胞凋亡的影響;Western blotting法檢測其對細(xì)胞中p-Akt、Akt和caspase-3/9表達(dá)的影響;ELISA法檢測其對細(xì)胞內(nèi)Aβ42生成的影響。結(jié)果:MTT結(jié)果顯示,與對照組和空質(zhì)粒組比較,轉(zhuǎn)染NGB后,p APPswe-SH-SY5Y細(xì)胞的存活率明顯提高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。JC-1染色結(jié)果顯示過表達(dá)NGB能夠明顯抑制轉(zhuǎn)染p APPswe對SH-SY5Y細(xì)胞線粒體膜電位的降低作用（P<0.05）。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示過表達(dá)NGB能夠抑制早、晚期細(xì)胞的凋亡。而Western blotting顯示過表達(dá)NGB不僅能抑制細(xì)胞內(nèi)caspase-3和caspase-9蛋白水平的表達(dá),而且還能夠促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)p-... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2014,30(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 細(xì)胞及質(zhì)粒
    2 主要試劑
    3 主要實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2 p EGFP-NGB細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.3 MTT法檢測細(xì)胞存活率
        3.4 線粒體膜電位的檢測
        3.5 流式細(xì)胞儀檢測
        3.6 Western blotting
        3.7 ELISA法檢測Aβ42的生成
    4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1過表達(dá)NGB提高轉(zhuǎn)染p APPswe的SH-SY5Y細(xì)胞的存活率
    2過表達(dá)NGB提高轉(zhuǎn)染p APPswe的SH-SY5Y細(xì)胞的線粒體膜電位
    3過表達(dá)NGB減少轉(zhuǎn)染p APPswe的SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡
    4 過表達(dá)NGB通過激活PI3K/Akt通路抑制轉(zhuǎn)染pA PPswe的SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)caspase-3和caspase-9 蛋白的表達(dá)
    5過表達(dá)NGB明顯降低Aβ42生成
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]間歇性低壓缺氧預(yù)處理對大鼠全腦缺血/再灌注海馬CA1區(qū)Ngb和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響[J]. 劉永年,俞科賢,馬祁生,吳穹.  中國病理生理雜志. 2013(12)



本文編號：3288515