發(fā)布時間：2021-01-26 16:23

　　本研究構(gòu)建GalR2（galanin receptor 2,甘丙肽受體2）真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP -GalR2,在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平鑒定了GalR2基因的表達(dá),確定了GalR2基因表達(dá)產(chǎn)物的細(xì)胞內(nèi)定位。同時建立C57BL/6J小鼠抑郁癥模型,并初步探討了GalR2蛋白對小鼠抑郁癥的影響。第一部分GalR2基因的獲取、真核表達(dá)載體構(gòu)建及細(xì)胞內(nèi)表達(dá)鑒定和定位目的:獲取GalR2基因全長編碼序列,構(gòu)建GalR2基因真核表達(dá)質(zhì)粒,并在Hela細(xì)胞中表達(dá),熒光顯微鏡觀察其細(xì)胞內(nèi)定位。方法:從C57BL?6J小鼠海馬組織提取總RNA,以RT-PCR法調(diào)取GalR2基因編碼序列,上下游引入EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位點,克隆至pEGFP-C1,構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-GalR2,經(jīng)PCR、酶切、測序鑒定正確后,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至Hela細(xì)胞。RT-PCR,Western blotting分別在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平檢測GalR2基因的表達(dá),熒光顯微鏡觀察融合蛋白細(xì)胞內(nèi)定位。結(jié)果:從C57BL?6J小鼠海馬組織擴增出大小為1116bp的GalR2基因片段。重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、酶切鑒定和測序分析,表明構(gòu)建正確。通過... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

暴露健康C57BL/6J小鼠海馬組織

增強化學(xué)發(fā)光（ECL）法顯影：取化學(xué)發(fā)光試劑 A 液和 B 液各 500 微升按 1:1 混合，避光放置。將化學(xué)發(fā)光液均勻滴加在 PVDF 膜上，吸去多余的化學(xué)發(fā)光試劑，通過 ChemiDocXRS 化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)，采集圖像。⑶ 應(yīng)用熒光顯微鏡觀察 GalR2 基因蛋白水平表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)定位：細(xì)胞轉(zhuǎn)染后 24h，將細(xì)胞置于倒置熒光顯微鏡下觀察融合蛋白的表達(dá)及其亞細(xì)胞定位，并采集圖像。2 實驗結(jié)果2.1 C57BL/6J 小鼠海馬組織總 RNA 的提�、� 摘取健康 C57BL/6J 小鼠海馬組織成功剝離健康 C57BL/6J 小鼠腦組織，暴露并分離海馬（圖 1-2）。

C57BL/6J mouse hippocampus total RNAC57BL/6J 小鼠海馬組織總 RNA 瓊脂糖凝膠電 Result of C57BL/6J mouse hippocampus tota結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳后，在約 1116bp 處可見大小相符（圖 4），在約 445 bp 處的特相符（圖 5）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3001435