阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease, AD）是一種神經(jīng)退行性變,是老年癡呆的主要類型,病理表現(xiàn)以老年斑、神經(jīng)纖維纏結(jié)為主。隨著現(xiàn)代社會人口老齡化趨勢的迅速增長,老年性疾病特別是老年癡呆發(fā)病率呈上升趨勢,嚴(yán)重影響老年人的生存質(zhì)量,然而,AD是一種多因素的復(fù)雜性疾病,其病因及發(fā)病機(jī)制迄今尚不明確。MicroRNA （miRNA）是一類長約22個(gè)核苷酸的內(nèi)源性小分子RNA,通過抑制轉(zhuǎn)錄后mRNA的翻譯而調(diào)控蛋白表達(dá)。越來越多的研究表明在多種疾病的發(fā)生中miRNA均發(fā)揮著重要作用。其中,miRNA參與AD發(fā)病機(jī)制的文章也日見報(bào)道,然而,相關(guān)方面的研究尚處于初步階段,進(jìn)一步探討AD發(fā)病過程中異常表達(dá)的miRNA及其作用不僅可為AD發(fā)病機(jī)制提供新的詮釋且有望為治療提供新的途徑。APP （Amyloid protein precursor）是Aβ肽的前體蛋白,其表達(dá)水平的增加可直接導(dǎo)致Aβ肽生成增多從而成為AD的主要致病基因。APP屬于一類高度保守的跨膜糖蛋白家族,哺乳動物的該家族成員還包括有APLP1和APLP2。多方研究證實(shí)APLP2在AD的發(fā)病機(jī)制中也起著重要作用。本課題通過... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
    AD的發(fā)病機(jī)制
        1. 基因突變
        2. Aβ淀粉樣肽假說
        3. Tau蛋白假說
        4. 膽固醇代謝異常
        5. 氧化應(yīng)激
    MicroRNA
        1. miRNA的基因定位及表達(dá)調(diào)控
        2. miRNA的生物合成
        3. miRNA靶基因的鑒定
        4. miRNA研究新進(jìn)展
    miRNA與神經(jīng)系統(tǒng)
        1. miRNA在神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)
        2. miRNA和神經(jīng)系統(tǒng)的分化發(fā)育
        3. miRNA和腦的生理功能
    mciorRNA與AD
        1. AD患者腦內(nèi)miRNA表達(dá)譜的改變
        2. miRNA調(diào)控AD致病基因的表達(dá)
    APP蛋白家族
    展望
第一部分 microRNA在阿爾茨海默病中的作用研究
    一. 材判
        1. 實(shí)驗(yàn)動物
        2. 主要生化試劑
        3. 主要溶液配置
        4. 主要儀器設(shè)備
    二. 實(shí)驗(yàn)方法
        1 APPswe/PS△E9轉(zhuǎn)基因小鼠模型的制備和鑒定
        2. MicroRNA芯片
        3. Real-Time Reverse Transcriptase （RT） PCR
        4. miR-153表達(dá)載體的制備
        5. miR-153穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的建立和鑒定
        6. 瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染
        7. 氧化應(yīng)激及Aβ肽毒性損傷細(xì)胞模型的制作
        8. miR-153穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系增殖活性的檢測
        9. miR-153穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系凋亡水平的檢測
        10. miR-153靶基因的預(yù)測
        11. APP-3’UTR、APLP2-3’UTR熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建
        12. 熒光素酶活性檢測實(shí)驗(yàn)
        13. 免疫印跡（Western blot）
        14. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    三.結(jié)果
        1. APPswe/PSΔE9轉(zhuǎn)基因鼠鼠尾鑒定結(jié)果
        2. microRNA芯片檢測結(jié)果
        3. 組織及細(xì)胞RNA質(zhì)量的鑒定
        4. Real-time PCR檢測AD小鼠腦組織中miR-153的表達(dá)
        5. miR-153靶基因的預(yù)測
        6. miR-153與靶基因3’UTR區(qū)的相互作用
        7. APPswe/PSΔE9轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)APP、APLP2的表達(dá)
        8. miR-153對APP和APLP2表達(dá)水平的調(diào)控作用
2O₂對miR-153表達(dá)水平的影響">        9. Aβ42肽和H₂O₂對miR-153表達(dá)水平的影響
        10. 高表達(dá)miR-153對下游信號分子的影響
    四.討論
        1. miRNAs與AD發(fā)病機(jī)制的研究現(xiàn)狀
        2. APPswe/PSAE9雙轉(zhuǎn)基因鼠腦內(nèi)miR-153的異常表達(dá)
        3. miR-153靶基因的預(yù)測及鑒定
        4. APP蛋白家族與AD
        5. miRNAs的表達(dá)調(diào)控
        6. miR-153對靶基因下游信號分子的影響
第二部分 miR-153轉(zhuǎn)基因小鼠的建立和分析
    一.實(shí)驗(yàn)方法
        1. miR-153轉(zhuǎn)基因小鼠的制備
        2. 轉(zhuǎn)基因陽性鼠基因型的PCR鼠尾鑒定
        3. Real-time PCR檢測轉(zhuǎn)基因鼠miR-153的表達(dá)
        4. Western-blot檢測miR-153靶基因的表達(dá)
    二.結(jié)果
        1. PCR鼠尾鑒定miR-153轉(zhuǎn)基因小鼠
        2. Real-time PCR檢測轉(zhuǎn)基因鼠miR-153的表達(dá)水平
        3. 轉(zhuǎn)基因鼠腦內(nèi)miR-153靶蛋白表達(dá)水平的檢測
        4. 腦生理發(fā)育過程中miR-153與APP、APLP2的共表達(dá)
    三.討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
縮寫表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]我國阿爾茨海默病的研究現(xiàn)狀及展望[J]. 洪震.  中華神經(jīng)科雜志. 2001(04)



本文編號：2979843