抑郁癥,具有心境孤獨,情緒低沉,發(fā)病率高,病程持續(xù)時間長等臨床特點,據(jù)估計到2030年抑郁癥將會位于全球疾病負(fù)擔(dān)首位。研究發(fā)現(xiàn),海馬體參與動物機(jī)體情感、認(rèn)知、學(xué)習(xí)及記憶能力的形成,與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本課題組前期研究證明牛磺酸可緩解慢性輕度不可預(yù)見應(yīng)激（CUM）導(dǎo)致的大鼠抑郁癥狀,降低海馬體中谷氨酸的含量,但其確切機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。本試驗分離培養(yǎng)海馬神經(jīng)干細(xì)胞,建立谷氨酸損傷模型,并在培養(yǎng)基中給予�；撬�,探討�；撬釋劝彼嵴T導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,從神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的角度闡明�；撬犷A(yù)防抑郁癥的作用機(jī)制。體外培養(yǎng)出生24 h內(nèi)胎鼠的海馬神經(jīng)干細(xì)胞,經(jīng)Nestin染色鑒定后,選取第二代的細(xì)胞進(jìn)行試驗。分組為:正常對照組（Control）;牛磺酸對照組（Tau）、谷氨酸損傷組（Glu）、�；撬犷A(yù)防組（Tau+Glu）。CCK-8檢測細(xì)胞活力;免疫熒光染色檢測BrdU、β-TubulinⅢ以及GFAP的表達(dá)情況;TBA法和WST-1法檢測胞內(nèi)MDA含量及SOD活力;AO/EB染色檢測細(xì)胞凋亡;Western-blot檢測BDNF/ERK/CREB通路上關(guān)鍵蛋白表達(dá)及其磷酸化情... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

抑郁癥發(fā)病假說（Mlyniec，2015）

第一章 文獻(xiàn)綜述（1995）的實驗中得到證實，所以說谷氨酸能功能障礙與抑郁癥的發(fā)生密切相關(guān) HPA 軸假說下丘腦-腎上腺-垂體軸（HPA）是神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的重要組成部分，調(diào)節(jié)應(yīng)激反應(yīng)，機(jī)體適應(yīng)環(huán)境變化。也參與自身機(jī)體的各種活動，包括消化、運動、記憶以及情感等活動（Slavich and Irwin，2014）。下丘腦釋放的激素首先促進(jìn)垂體釋放激素的釋經(jīng) HPA 軸的傳遞，最終促進(jìn)腎上腺激素的釋放，反過來，腎上腺激素的增多會抑丘腦和垂體釋放激素，正負(fù)調(diào)節(jié)共同維持機(jī)體平衡。動物機(jī)體面對各種應(yīng)激環(huán)境條是導(dǎo)致抑郁癥發(fā)生的首要原因。而當(dāng) HPA 軸被過度刺激并且發(fā)生功能亢進(jìn)時，會丘腦神經(jīng)元過多釋放激素，最終使得機(jī)體糖皮質(zhì)激素、鹽皮質(zhì)激素分泌增多，導(dǎo)致癥的發(fā)生，如圖 1-2 所示（Anacker and Hen，2017）。

（3）取材：為減少腦部的血液，將胎鼠垂直放置 1 min 左右，然后用手術(shù)剪鼠頭剪斷，沿著頭部正中線剪開，掀開大腦皮質(zhì)并將大腦暴露出來，用眼科鑷子皮質(zhì)剝開，取出左右兩側(cè)的海馬體，放到加入雙抗的 D-Hank’s 液中，沖洗干凈。（4）機(jī)械消化：用 D-Hank’s 液將海馬組織沖洗 1-2 次，將雜質(zhì)洗干凈，然Hank’s 液吸出，加入 DMEM/F12 培養(yǎng)基，用 5 mL 的槍頭進(jìn)行機(jī)械吹打 20 次左到液體渾濁，無組織塊為止。（5）離心過濾：將渾濁液體用 200 目的尼龍布過濾，然后進(jìn)行離心，800 ×g，5 m掉上清，收集沉淀。（6）計數(shù)：將沉淀用 1 mLDMEM/F12 培養(yǎng)基吹打重懸，取 90 μL 細(xì)胞懸液和 1盼藍(lán)溶液按照 9:1 比例混合，吹打混勻，取 10 μL 加到細(xì)胞計數(shù)板中，用細(xì)胞計數(shù)，即可得到活細(xì)胞的數(shù)量。（7）接種：細(xì)胞密度在 105個細(xì)胞/mL 左右接種在 25cm2的培養(yǎng)瓶內(nèi)，培養(yǎng)基養(yǎng)。并且在培養(yǎng)瓶上作好標(biāo)記，注明時間及日期，放入培養(yǎng)箱（37°C，5%CO2）養(yǎng)。隔天收集細(xì)胞懸液，1/3 換液，并放入新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。原代培養(yǎng)的整個圖 2-1 所示。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[8]牛磺酸對高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制[D]. 梁棟.山西醫(yī)科大學(xué) 2014
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本文編號：2958405