研究背景 氯胺酮是N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受體的非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑,長(zhǎng)期濫用會(huì)導(dǎo)致學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能的損害,但其機(jī)制尚不完全清楚。大量研究認(rèn)為,長(zhǎng)期應(yīng)用麻醉劑量的氯胺酮可致神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡,從而引發(fā)與記憶密切相關(guān)的腦區(qū)如海馬功能紊亂,繼而出現(xiàn)記憶障礙。最近的研究結(jié)果表明,氯胺酮作為新興毒品被長(zhǎng)期濫用,除導(dǎo)致記憶功能損傷外,還引起人情緒和人格出現(xiàn)異常,提示氯胺酮的中樞損傷效應(yīng)存在多元性。學(xué)習(xí)記憶障礙是腦血管性疾病的主要癥狀,由腦血管損傷引發(fā)的缺血缺氧是導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶障礙的主要原因之一。但氯胺酮長(zhǎng)期使用是否對(duì)腦血管產(chǎn)生影響尚沒(méi)有系統(tǒng)研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察長(zhǎng)期靜脈應(yīng)用氯胺酮的食蟹猴行為學(xué)、大腦動(dòng)脈形態(tài)學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)的改變來(lái)研究氯胺酮引起食蟹猴大腦血管氧化應(yīng)激及凋亡的可能機(jī)制。 研究目的 觀察氯胺酮連續(xù)給藥對(duì)食蟹猴行為學(xué)、大腦動(dòng)脈(動(dòng)脈環(huán)交通支)形態(tài)、氧化應(yīng)激及凋亡的影響。 研究方法 隨機(jī)將12只健康雄性食蟹猴分為氯胺酮組和生理鹽水組,氯胺酮組8只,每天股靜脈注射鹽酸氯胺酮注射液,劑量為1mg/kg。生理鹽水組4只,每天股靜脈注射生理鹽水,劑量為1mL/kgo分別在造模的第1、3、7、14、56、112、183、184、185天,于自然狀態(tài)下用攝像機(jī)記錄注射氯胺酮或生理鹽水前后15分鐘的行為變化,連續(xù)觀察6個(gè)月。持續(xù)給藥6個(gè)月后犧牲動(dòng)物,冰上剝離食蟹猴腦血管(動(dòng)脈環(huán)交通支),部分置-80℃保存,剩余部分制備石蠟切片。HE染色觀察大腦動(dòng)脈的形態(tài)學(xué)變化；原位末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(Tunnel法)檢測(cè)腦動(dòng)脈細(xì)胞凋亡水平：用比色法測(cè)定H2O2水平用以衡量血清和血管組織內(nèi)的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平；采用免疫組織化學(xué)染色和Western blot檢測(cè)血管中NADPH氧化酶的表達(dá)。 研究結(jié)果 1.與對(duì)照組比較,氯胺酮組行為學(xué)未出現(xiàn)明顯變化。 2.連續(xù)給藥6個(gè)月后,氯胺酮組動(dòng)脈環(huán)交通支中出現(xiàn)明顯的血栓,血栓成分主要是血小板、紅細(xì)胞、白細(xì)胞和纖維蛋白,呈混合血栓的特征,另外還可發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)膜增厚；而對(duì)照組其血管壁光滑,無(wú)異物出現(xiàn)。此外,氯胺酮組動(dòng)脈環(huán)交通支外膜有明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；而對(duì)照組血管壁無(wú)白細(xì)胞浸潤(rùn)。 3.連續(xù)給藥6個(gè)月后,氯胺酮組和對(duì)照組動(dòng)脈環(huán)交通支細(xì)胞均未出現(xiàn)明顯的凋亡現(xiàn)象。 4.連續(xù)給藥6個(gè)月后,氯胺酮組血清和血管組織中活性氧水平明顯高于對(duì)照組,說(shuō)明氯胺酮長(zhǎng)期濫用后可引起組織中抗氧化能力降低、細(xì)胞功能受損。 5.連續(xù)給藥6個(gè)月后,氯胺酮組免疫組織化學(xué)和Western blot檢測(cè)動(dòng)脈環(huán)交通支組織NADPH亞基p47phox蛋白的表達(dá)明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 研究結(jié)論 1.長(zhǎng)期連續(xù)使用氯胺酮不會(huì)引起食蟹猴明顯的行為學(xué)改變。 2.長(zhǎng)期連續(xù)使用氯胺酮不會(huì)引起食蟹猴腦血管細(xì)胞凋亡。 3.長(zhǎng)期連續(xù)使用氯胺酮可激活腦血管內(nèi)皮細(xì)胞NADPH氧化酶,后者誘發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激,導(dǎo)致血管炎癥和血栓形成。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類(lèi)】：R749.6
【部分圖文】：

山東人學(xué)石貞十學(xué)位論文附圖附圖1行為學(xué)變化曲線圖A ClimbBJumPCOntrolketamine.-SEO卜05﹄” 1sn甘2月.月..-SOE卜 01371456112183184185DaysCMOV6 1371456112183184185days DWalk50川卜COntro80ketaminG州.~叫.卜Cont舊l4060kGtamineD4SOE一l的30200﹃11︸02月.口住!卜 3714 112183184185 3714112183184185圖1氯胺酮組和對(duì)照組食蟹猴相比在攀爬、跳躍、移動(dòng)和行走等自發(fā)運(yùn)動(dòng)行為上無(wú)明顯差異: Fig1Long一 termadministrationofketaminedidnotehangethee” omolgusmonkeys’ behaviorofthesPontaneousmovement， includingmove，walk， elimbandjumP.26

對(duì)照組氯胺酮組圖2氯胺酮組和對(duì)照組食蟹猴大腦動(dòng)脈環(huán)交通支形態(tài)學(xué)改變(HE染色法，標(biāo)尺為100林M)。實(shí)驗(yàn)組中二只食蟹猴的血管中均發(fā)現(xiàn)明顯的血栓形成，而對(duì)照組血管壁光滑，無(wú)異物出現(xiàn)(A)。氯胺酮組食蟹猴大腦動(dòng)脈環(huán)交通支中出現(xiàn)明顯的血栓，血栓成分卞要是血小板、紅細(xì)胞、白細(xì)胞和纖維蛋白，呈混合血栓的特征(B)，另外血管內(nèi)膜增厚(箭頭所指)。氯胺酮組食蟹猴大腦動(dòng)脈環(huán)交通支外膜有明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(實(shí)驗(yàn)組中有兩只食蟹猴的血管中發(fā)現(xiàn)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn))(D)，而對(duì)照組血管壁無(wú)白細(xì)胞浸潤(rùn)(C)。Fig.2Long一termadministrationofketamineindueedthrombusandinflammato卿celinfiltrationinthecerebrovascularofeynomolgusmonkeybyHEstaining(Ba作100卜M)A.B，T即iealPhotogr叩hsofHEshownketamineinducedthrombusineerebrovascularC，D，TyPiealPhotograPhsofHEshownketamineindueedinflammationcerebrovascul肛

3氯胺酮組連續(xù)給藥6個(gè)月誘發(fā)食蟹猴血清和血管組織中活性氧水平明顯增**尸<0.001)9.3Long一termadministrationofketamineinereasedROSlevelinthePlasmarebrovascularofcynomolgusmonkey，***P<0.001VSeontrol
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2861588