阿爾茨海姆病(Alzheimer's disease, AD)是一種神經變性性疾病。AD發(fā)病機制中較為公認的是中樞神經膽堿能系統(tǒng)損傷學說。本研究組以前的研究表明骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(Bone morphogenetic protein4, BMP4)可在離體條件下誘導成年大鼠海馬區(qū)神經干細胞的膽堿能分化,并在在體條件下上調該區(qū)神經細胞的膽堿能表達。但BMP4是否僅誘導神經干細胞的膽堿能分化,對神經元的膽堿能表達是否也具有上調作用,尚不了解。通過腦內海馬齒狀回注入BMP4上調該區(qū)神經細胞膽堿能表達,是否對AD模型大鼠具有治療作用,國內外尚未見報道。 目的:通過觀察BMP4對離體培養(yǎng)的大鼠海馬區(qū)神經干細胞的分化和神經元的膽堿能表達的影響,以進一步了解BMP4對神經干細胞膽堿能誘導分化作用和明確對神經元膽堿能表達是否具有上調作用;通過將BMP4注入成年大鼠海馬齒狀回區(qū),進一步了解BMP4體內對成年大鼠海馬齒狀回區(qū)神經細胞的膽堿能表達的作用;通過將BMP4注入海馬齒狀回區(qū),了解其對AD模型:大鼠是否具有治療作用。 方法:(1) 從幼齡SD大鼠海馬區(qū)分離并培養(yǎng)神經干細胞,并行Nestin免疫細胞化學染色鑒定。在培養(yǎng)液中加入或不加入BMP4,用ChAT免疫細胞化學染色及FITC標記的流式細胞檢測法,鑒定膽堿能神經細胞。(2) 從胎齡SD大鼠海馬及大腦皮層分離并培養(yǎng)神經元,并行MAP2免疫細胞化學染色鑒定。在培養(yǎng)液中加入或不加入BMP4,用ChAT免疫細胞化學染色及FITC標記的流式細胞檢測法,鑒定膽堿能神經細胞。(3)在腦立體定位儀下,將BMP4或NS注入成年大鼠左側海馬齒狀回,28天后取海馬齒狀回腦組織,行ChAT免疫組化染色,用Image-prog-plus圖像分析系統(tǒng)測量海馬齒狀回ChAT陽性細胞面積,數(shù)據(jù)采用STATA7.0軟件進行t檢驗。(4) 在腦立體定位儀下,離斷成年大鼠左側穹隆海馬傘,建立AD模型。將BMP4或NS注入AD模型大鼠手術側海馬齒狀回區(qū),28天后用Mirros水迷宮檢測大鼠空間記憶行為;并取海馬齒狀回腦
【學位單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2005
【中圖分類】：R749.16
【部分圖文】：

圖1培養(yǎng)條件下幼鼠海馬區(qū)神經干細胞的形態(tài)變化倒置光學相差顯微鏡x200A為接種即刻，細胞呈圓形懸浮狀，胞膜清晰，胞質透明，未見明顯胞核，細胞周圍有圈光暈(箭頭所示);B為接種即刻，呈自我旋轉狀態(tài)的細胞(箭頭所示);C為培養(yǎng)24h時部分細胞分裂形成啞鈴狀(箭頭所示)。D為培養(yǎng)4h8時，細胞分裂增殖成為細胞團，部分細胞體向周邊伸出小的突起，成為前體樣細胞(箭頭所示);E為培養(yǎng)7d一sd時，貼壁生長的部細胞胞體呈梭形，伸出較長的突起，呈神經元或膠質細胞狀;其它細胞仍然呈懸浮狀態(tài)，圓或伸出小突起的前體細胞狀(箭頭所示)。

呈現(xiàn)棕黃色的CllAI，反應陽性細胞，約占總細胞數(shù)的2.664士1.47%(圖3A);而在未加BMP4的對照組的培養(yǎng)皿中，僅有少數(shù)呈現(xiàn)棕黃色的ChAT反應陽性的細胞，約占總細胞數(shù)的13.42士1.33%(圖3B)。經統(tǒng)計學處理，BMP4組的Ch戶J陽性細胞比例顯著高于無BMp4的對照組(P<0.02)，見表z。表1BMP4體外誘導分化幼鼠海馬神經干細胞的Ch產T陽性細胞比例(%)樣本BMP4組對照組126.815.3229.412.4324.417.6430.211.5522.410.3又士526.64士1.47**13.42土1.33**表示BMP4組與對照組比較，P<.001.2.2BMP4體外誘導分化的幼鼠海馬神經干細胞的FITC標記的膽堿能神經細胞流式細胞術將加入或未加入BMP4培養(yǎng)10天的幼鼠海馬神經干細胞行FITC標記的膽堿能神經細胞流式細胞檢測，測得BMP4組細胞的ChAT陽性率為23.42%(圖4A)，而無BMP4對照組細胞的ChAT陽性率為7.79%(圖4B)。BMP4組的ChAT陽性細胞比例高于無BMP4的對照組。結果表明:BMP4可體外誘導幼鼠海馬區(qū)神經干細胞的膽堿能分化。

圖5培養(yǎng)條件下胎鼠海馬區(qū)神經元的形態(tài)變化A、B倒置光學顯微鏡x400;C、D倒置光學顯微鏡ZxooA為接種即刻，細胞迅速開始貼壁，星梭形，伸出2一3個短的突起，貼壁細胞胞體的周圍有顯的光暈。B、C為培養(yǎng)%h時，細胞呈神經元樣形態(tài)，胞體伸出較長的數(shù)量不等的突起，細胞的突起互相連接成網(wǎng)絡狀。D為培養(yǎng)7d一d8時，細胞胞體群集，突起有聚集成束的趨勢。
【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 常艷,薛毅瓏,羅蕓,田磊,潘靜坤,崔忻;骨形態(tài)發(fā)生蛋白4對大鼠腦神經干細胞的膽堿能誘導分化效應[J];標記免疫分析與臨床;2004年01期

相關博士學位論文 前1條

1 林秋霞;大腦皮層神經元體外誘導分裂研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2004年

本文編號：2857305