目的應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),尋找與阿片類渴求淬滅-引燃相關(guān)的生物標記,探討復(fù)吸的分子機制,為今后防治復(fù)吸尋找特異靶點、開發(fā)新藥提供理論依據(jù)。 方法將清潔級雄性SD大鼠60只,體重240±10 g,隨機分為3組,每組20只,分別為生理鹽水組、嗎啡組、yoked組。生理鹽水組與嗎啡組進行自身給藥訓(xùn)練,yoked組被動獲得嗎啡,其與嗎啡組一一配對;自身給藥訓(xùn)練結(jié)束后三組大鼠經(jīng)自然環(huán)境淬滅建立淬滅模型;淬滅訓(xùn)練結(jié)束后每組隨機分為2個亞組,分別進行淬滅測試和引燃測試。模型建成后即在冰上斷頭取NAc核團,迅速稱重,液氮速凍5mins,然后-80℃冰箱凍存。取實驗組和對照組大鼠NAc區(qū)腦組織提取總蛋白,行雙向電泳,以固相pH梯度等電聚焦(IPG-IEF)為第一向,垂直平板十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)為第二向進行2-DE,銀染法對電泳后的凝膠進行染色,采集凝膠圖像并進行圖像分析,尋找有意義的差異蛋白點,對部分差異蛋白質(zhì)點進行酶解和質(zhì)譜(mass spectrometry,MS)鑒定。 結(jié)果①自身給藥階段:嗎啡組大鼠建立了穩(wěn)定的嗎啡靜脈自身給藥行為,與生理鹽水組相比,嗎啡組有效鼻觸數(shù)明顯增加,差異有顯著性(p0.001);嗎啡組與yoked組水平活動度明顯高于生理鹽水組(p0.001),而嗎啡組與yoked組大鼠之間差異無顯著性(p0.05);淬滅階段:生理鹽水組、嗎啡組、yoked組其水平活動度及有效鼻觸數(shù)三者之間差異無顯著性(p0.05);引燃階段:嗎啡組大鼠經(jīng)過13天的淬滅訓(xùn)練,給予線索引燃,引燃階段較其淬滅階段有效鼻觸數(shù)明顯增加,差異有顯著性(p0.001),嗎啡引燃組與生理鹽水引燃組相比有效鼻觸數(shù)明顯增加,差異有顯著性(p 0.001)。②pH3-10非線性的IPG膠條對NAc核團蛋白質(zhì)進行2-DE分析,其分辨率較pH3-10線性IPG膠條高,差異有顯著性;獲得的2-DE圖譜對蛋白質(zhì)的2種提取方法進行比較,方法2可得到滿意的圖譜。③各組2-DE凝膠蛋白點分析,pH3-10非線性范圍的2-DE圖譜上,生理鹽水淬滅組(868±27)個蛋白點,生理鹽水引燃組(833±24))個,嗎啡淬滅組(859±38)個蛋白點,嗎啡引燃組(838±33)個蛋白點,yoked淬滅組(846±31)個蛋白點,yoked引燃組(863±21)個蛋白點。六組2-DE圖譜差異點質(zhì)譜分析結(jié)果:嗎啡引燃組較嗎啡淬滅組8個蛋白點表達升高,分別為絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基β轉(zhuǎn)錄本、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基α轉(zhuǎn)錄本、熱休克90結(jié)合分子伴侶Cdc37、異檸檬酸脫氫酶a轉(zhuǎn)錄本線粒體前體、唾液酸酶3、神經(jīng)鞘干擾蛋白1、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu2、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu1;1個點表達降低為抗氧化蛋白2,新出現(xiàn)1個點為絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A調(diào)節(jié)亞基B,γ亞單位。Yoked引燃組較yoked淬滅組3個點表達升高,分別為唾液酸酶3、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu2、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu1;6個點表達降低分別為脂肪酸結(jié)合蛋白、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基β轉(zhuǎn)錄本、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基α轉(zhuǎn)錄本、熱休克90結(jié)合分子伴侶Cdc37、異檸檬酸脫氫酶a轉(zhuǎn)錄本線粒體前體、抗氧化蛋白2。生理鹽水引燃組較生理鹽水淬滅組,1個點表達下降為抗氧化蛋白2,1個點表達升高為異檸檬酸脫氫酶a轉(zhuǎn)錄本線粒體前體,1個點消失為脂肪酸結(jié)合蛋白;嗎啡淬滅組較yoked淬滅組1個點表達升高為抗氧化蛋白2,4個點表達降低分別為絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基β轉(zhuǎn)錄本、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基α轉(zhuǎn)錄本、熱休克90結(jié)合分子伴侶Cdc37、異檸檬酸脫氫酶a轉(zhuǎn)錄本線粒體前體,2個點消失分別為谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu2、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu1。 結(jié)論①運用自身給藥模式成功建立了SD大鼠嗎啡自身給藥模型、淬滅模型及引燃模型,其模擬了人類吸毒的主要特征是藥物依賴的可靠模型。②利用蛋白質(zhì)組學(xué)系統(tǒng)化研究,發(fā)現(xiàn)嗎啡渴求淬滅-引燃過程中腦組織多種蛋白質(zhì)發(fā)生了變化,通過分析得到5個相關(guān)蛋白點分別是:絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基β轉(zhuǎn)錄本、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基α轉(zhuǎn)錄本、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A調(diào)節(jié)亞基B,γ亞單位、熱休克90結(jié)合分子伴侶Cdc37、異檸檬酸脫氫酶a轉(zhuǎn)錄本線粒體前體,與能量代謝、蛋白磷酸化、應(yīng)激等生理過程有關(guān)。嗎啡引燃階段較淬滅階段糖代謝增強、磷酸化過程增強、應(yīng)激反應(yīng)增強。深入研究這些蛋白將有助于進一步認識復(fù)吸的分子機制,尋找新的藥物分子靶標。③主動給藥(自身給藥)受覓藥行為及嗎啡藥理作用二因素的影響,而被動給藥(yoked被動給藥)僅受嗎啡藥理作用的影響,二種給藥方式淬滅時相圖譜及蛋白點表達存在差異,反映出主動給藥大鼠由于覓藥行為的出現(xiàn)而致蛋白表達發(fā)生變化,具體機制有待進一步探討。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R749.611
【部分圖文】：

成癮系統(tǒng)

圖1-1自身給藥設(shè)備Figure1-1 self-administration instrument圖1-2 監(jiān)控軟件Figure1-2 Monitoring software圖1-3 頸靜脈插管術(shù)Figure 1-3 vena jugularis cannulation圖1-4輸液泵Figure1-4 infusion pump

圖1-1自身給藥設(shè)備Figure1-1 self-administration instrument圖1-2 監(jiān)控軟件Figure1-2 Monitoring software圖1-3 頸靜脈插管術(shù)Figure 1-3 vena jugularis cannulation圖1-4輸液泵Figure1-4 infusion pump圖1-5 硅膠導(dǎo)管Figure1-5 Silica
【參考文獻】

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本文編號：2852394