目的應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),尋找與阿片類渴求淬滅-引燃相關(guān)的生物標(biāo)記,探討復(fù)吸的分子機(jī)制,為今后防治復(fù)吸尋找特異靶點(diǎn)、開(kāi)發(fā)新藥提供理論依據(jù)。 方法將清潔級(jí)雄性SD大鼠60只,體重240±10 g,隨機(jī)分為3組,每組20只,分別為生理鹽水組、嗎啡組、yoked組。生理鹽水組與嗎啡組進(jìn)行自身給藥訓(xùn)練,yoked組被動(dòng)獲得嗎啡,其與嗎啡組一一配對(duì);自身給藥訓(xùn)練結(jié)束后三組大鼠經(jīng)自然環(huán)境淬滅建立淬滅模型;淬滅訓(xùn)練結(jié)束后每組隨機(jī)分為2個(gè)亞組,分別進(jìn)行淬滅測(cè)試和引燃測(cè)試。模型建成后即在冰上斷頭取NAc核團(tuán),迅速稱重,液氮速凍5mins,然后-80℃冰箱凍存。取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠NAc區(qū)腦組織提取總蛋白,行雙向電泳,以固相pH梯度等電聚焦(IPG-IEF)為第一向,垂直平板十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)為第二向進(jìn)行2-DE,銀染法對(duì)電泳后的凝膠進(jìn)行染色,采集凝膠圖像并進(jìn)行圖像分析,尋找有意義的差異蛋白點(diǎn),對(duì)部分差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行酶解和質(zhì)譜(mass spectrometry,MS)鑒定。 結(jié)果①自身給藥階段:嗎啡組大鼠建立了穩(wěn)定的嗎啡靜脈自身給藥行為,與生理鹽水組相比,嗎啡組有效鼻觸數(shù)明顯增加,差異有顯著性(p0.001);嗎啡組與yoked組水平活動(dòng)度明顯高于生理鹽水組(p0.001),而嗎啡組與yoked組大鼠之間差異無(wú)顯著性(p0.05);淬滅階段:生理鹽水組、嗎啡組、yoked組其水平活動(dòng)度及有效鼻觸數(shù)三者之間差異無(wú)顯著性(p0.05);引燃階段:嗎啡組大鼠經(jīng)過(guò)13天的淬滅訓(xùn)練,給予線索引燃,引燃階段較其淬滅階段有效鼻觸數(shù)明顯增加,差異有顯著性(p0.001),嗎啡引燃組與生理鹽水引燃組相比有效鼻觸數(shù)明顯增加,差異有顯著性(p 0.001)。②pH3-10非線性的IPG膠條對(duì)NAc核團(tuán)蛋白質(zhì)進(jìn)行2-DE分析,其分辨率較pH3-10線性IPG膠條高,差異有顯著性;獲得的2-DE圖譜對(duì)蛋白質(zhì)的2種提取方法進(jìn)行比較,方法2可得到滿意的圖譜。③各組2-DE凝膠蛋白點(diǎn)分析,pH3-10非線性范圍的2-DE圖譜上,生理鹽水淬滅組(868±27)個(gè)蛋白點(diǎn),生理鹽水引燃組(833±24))個(gè),嗎啡淬滅組(859±38)個(gè)蛋白點(diǎn),嗎啡引燃組(838±33)個(gè)蛋白點(diǎn),yoked淬滅組(846±31)個(gè)蛋白點(diǎn),yoked引燃組(863±21)個(gè)蛋白點(diǎn)。六組2-DE圖譜差異點(diǎn)質(zhì)譜分析結(jié)果:嗎啡引燃組較嗎啡淬滅組8個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)升高,分別為絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基β轉(zhuǎn)錄本、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基α轉(zhuǎn)錄本、熱休克90結(jié)合分子伴侶Cdc37、異檸檬酸脫氫酶a轉(zhuǎn)錄本線粒體前體、唾液酸酶3、神經(jīng)鞘干擾蛋白1、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu2、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu1;1個(gè)點(diǎn)表達(dá)降低為抗氧化蛋白2,新出現(xiàn)1個(gè)點(diǎn)為絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A調(diào)節(jié)亞基B,γ亞單位。Yoked引燃組較yoked淬滅組3個(gè)點(diǎn)表達(dá)升高,分別為唾液酸酶3、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu2、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu1;6個(gè)點(diǎn)表達(dá)降低分別為脂肪酸結(jié)合蛋白、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基β轉(zhuǎn)錄本、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基α轉(zhuǎn)錄本、熱休克90結(jié)合分子伴侶Cdc37、異檸檬酸脫氫酶a轉(zhuǎn)錄本線粒體前體、抗氧化蛋白2。生理鹽水引燃組較生理鹽水淬滅組,1個(gè)點(diǎn)表達(dá)下降為抗氧化蛋白2,1個(gè)點(diǎn)表達(dá)升高為異檸檬酸脫氫酶a轉(zhuǎn)錄本線粒體前體,1個(gè)點(diǎn)消失為脂肪酸結(jié)合蛋白;嗎啡淬滅組較yoked淬滅組1個(gè)點(diǎn)表達(dá)升高為抗氧化蛋白2,4個(gè)點(diǎn)表達(dá)降低分別為絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基β轉(zhuǎn)錄本、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基α轉(zhuǎn)錄本、熱休克90結(jié)合分子伴侶Cdc37、異檸檬酸脫氫酶a轉(zhuǎn)錄本線粒體前體,2個(gè)點(diǎn)消失分別為谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu2、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移因子Mu1。 結(jié)論①運(yùn)用自身給藥模式成功建立了SD大鼠嗎啡自身給藥模型、淬滅模型及引燃模型,其模擬了人類吸毒的主要特征是藥物依賴的可靠模型。②利用蛋白質(zhì)組學(xué)系統(tǒng)化研究,發(fā)現(xiàn)嗎啡渴求淬滅-引燃過(guò)程中腦組織多種蛋白質(zhì)發(fā)生了變化,通過(guò)分析得到5個(gè)相關(guān)蛋白點(diǎn)分別是:絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基β轉(zhuǎn)錄本、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A催化亞基α轉(zhuǎn)錄本、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A調(diào)節(jié)亞基B,γ亞單位、熱休克90結(jié)合分子伴侶Cdc37、異檸檬酸脫氫酶a轉(zhuǎn)錄本線粒體前體,與能量代謝、蛋白磷酸化、應(yīng)激等生理過(guò)程有關(guān)。嗎啡引燃階段較淬滅階段糖代謝增強(qiáng)、磷酸化過(guò)程增強(qiáng)、應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)。深入研究這些蛋白將有助于進(jìn)一步認(rèn)識(shí)復(fù)吸的分子機(jī)制,尋找新的藥物分子靶標(biāo)。③主動(dòng)給藥(自身給藥)受覓藥行為及嗎啡藥理作用二因素的影響,而被動(dòng)給藥(yoked被動(dòng)給藥)僅受嗎啡藥理作用的影響,二種給藥方式淬滅時(shí)相圖譜及蛋白點(diǎn)表達(dá)存在差異,反映出主動(dòng)給藥大鼠由于覓藥行為的出現(xiàn)而致蛋白表達(dá)發(fā)生變化,具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R749.611
【部分圖文】：

成癮系統(tǒng)

圖1-1自身給藥設(shè)備Figure1-1 self-administration instrument圖1-2 監(jiān)控軟件Figure1-2 Monitoring software圖1-3 頸靜脈插管術(shù)Figure 1-3 vena jugularis cannulation圖1-4輸液泵Figure1-4 infusion pump

圖1-1自身給藥設(shè)備Figure1-1 self-administration instrument圖1-2 監(jiān)控軟件Figure1-2 Monitoring software圖1-3 頸靜脈插管術(shù)Figure 1-3 vena jugularis cannulation圖1-4輸液泵Figure1-4 infusion pump圖1-5 硅膠導(dǎo)管Figure1-5 Silica
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 王衛(wèi)平,謝潞,鄭繼旺,蔡志基;大白鼠固定比率連續(xù)自身給藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立[J];中國(guó)藥物依賴性通報(bào);1994年04期

2 王衛(wèi)平,王桂林,哈鷹,鄭繼旺;猴自身給藥方法評(píng)價(jià)鹽酸二氫埃托啡的精神依賴性潛力[J];中國(guó)藥物依賴性通報(bào);1997年01期

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本文編號(hào)：2852394