目的觀察海馬神經(jīng)元損傷情況及雌激素膜受體G蛋白耦聯(lián)受體30(G-protein coupled receptor 30,GPR30)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(phospho-Akt,pAkt)及突觸后致密蛋白95(Postsynaptic density protein 95,PSD95)在去勢合并慢性應(yīng)激大鼠海馬中的表達,了解雌激素保護海馬神經(jīng)元的作用機理。方法選擇雌性SD(Sprague Dawley)大鼠,隨機分為空白對照組、應(yīng)激+假手術(shù)組、DMSO組、去勢+應(yīng)激模型組、去勢+應(yīng)激+17β-雌二醇共價衍生物(E2-BSA)組及去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組,每組12只�？瞻讓φ战M不去勢,應(yīng)激+假手術(shù)組和DMSO組只做去勢假手術(shù),去勢+應(yīng)激模型組、去勢+應(yīng)激+E2-BSA組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組做去勢手術(shù)�？瞻讓φ战M不做側(cè)腦室定位手術(shù),應(yīng)激+假手術(shù)組只顱頂切開皮膚、鉆孔,不做側(cè)腦室定位術(shù),DMSO組、去勢+應(yīng)激模型組、去勢+應(yīng)激+E2-BSA組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組做側(cè)腦室定位術(shù)�？瞻讓φ战M和DMSO組大鼠正常飼養(yǎng),DMSO組每天給予0.5%的DMSO溶液5μL;應(yīng)激+假手術(shù)組、去勢+應(yīng)激模型組、去勢+應(yīng)激+E2-BSA組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組給予慢性不可預(yù)知性應(yīng)激,每天選擇一種,同一種刺激不可連續(xù)給予,使其不可預(yù)知,同時去勢+應(yīng)激+E2-BSA組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組給予相應(yīng)藥物干預(yù),持續(xù)28d。曠場實驗和2%蔗糖溶液消耗實驗用于檢測大鼠行為變化,尼氏染色觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)變化,免疫組織化學檢測海馬GPR30、PSD95和pAkt蛋白陽性表達,Western blot檢測海馬GPR30、Akt、pAkt及PSD95蛋白陽性表達。結(jié)果1曠場實驗結(jié)果顯示:去勢+應(yīng)激模型組與空白對照組和應(yīng)激+假手術(shù)組相比曠場實驗得分均減少。給藥第四周,去勢+應(yīng)激模型組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組曠場實驗得分下降。2 2%蔗糖溶液消耗量結(jié)果顯示:給藥第四周,去勢+應(yīng)激模型組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組2%蔗糖溶液消耗量下降。3尼氏染色顯示:去勢+應(yīng)激+E2-BSA組海馬神經(jīng)元細胞形態(tài)完整,細胞排列規(guī)整,尼氏體較多;去勢+應(yīng)激模型組海馬神經(jīng)元細胞排列散亂,尼氏體減少;去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組海馬神經(jīng)元形態(tài)不完整,染色淺,尼氏體較少。4免疫組化結(jié)果顯示:(1)GPR30蛋白主要表達在海馬神經(jīng)元胞膜和胞漿內(nèi),細胞核內(nèi)未見。在海馬神經(jīng)元CA3和DG區(qū),與空白對照組比較,去勢+應(yīng)激模型組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組GPR30蛋白表達下降。(2)PSD95蛋白在海馬神經(jīng)元各區(qū),與空白對照組比較,去勢+應(yīng)激模型組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組表達下降;與去勢+應(yīng)激模型組比較,去勢+應(yīng)激+E2-BSA組表達升高。(3)pAkt蛋白在海馬神經(jīng)元各區(qū),與空白對照組比較,去勢+應(yīng)激模型組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組表達下降;與去勢+應(yīng)激模型組比較,去勢+應(yīng)激+E2-BSA組表達升高。5 Western blot結(jié)果顯示:(1)與空白對照組比較,去勢+應(yīng)激模型組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組GPR30蛋白表達下降。(2)與空白對照組比較,去勢+應(yīng)激模型組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組PSD95蛋白表達下降。(3)與空白對照組比較,去勢+應(yīng)激模型組和去勢+應(yīng)激+E2-BSA+G15組pAkt和Akt蛋白相對表達量下降。結(jié)論1 E2-BSA干預(yù)可減輕去勢合并慢性應(yīng)激SD大鼠海馬神經(jīng)元的損傷。2 E2-BSA干預(yù)可使去勢合并慢性應(yīng)激SD大鼠海馬神經(jīng)元的GPR30和PSD95蛋白陽性表達增加。3 E2-BSA可通過GPR30激活A(yù)kt信號通路使PSD95蛋白陽性表達增加,可能是雌激素發(fā)揮神經(jīng)元保護作用的機理之一。
【學位單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R749.4

【參考文獻】

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本文編號：2847482