目的:煙草濫用一直是中國以及世界范圍的主要公共問題,多年來有關(guān)各方為解決這一難題投入了大量的人員和資金。鑒于成癮機制的復(fù)雜性,目前還沒有一種特效藥可以徹底根治煙草成癮,導(dǎo)致大多數(shù)成癮者要與煙草相伴終生,為家庭以及社會增添了沉重的經(jīng)濟負擔(dān),同時對自身以及周圍人的健康產(chǎn)生巨大影響。盡管女性占所有吸煙者的一半,而且許多研究表明成年男性和女性對吸煙的反應(yīng)不同,當(dāng)前關(guān)于男性和女性對吸煙影響的神經(jīng)生物學(xué)研究還是十分有限的�，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn) cAMP 直接激活的交換蛋白(exchange protein directly activated by cAMP,Epac)信號通路參與藥物成癮行為。為了進一步探究尼古丁對海馬神經(jīng)元Epac表達影響以及成年尼古丁成癮小鼠海馬Epac信號通路和行為學(xué)變化,以期為攻克尼古丁依賴的頑疾提供一條新途徑。方法:(1)體外培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元,觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)學(xué)的變化,通過免疫熒光將GFAP與MAP2共染進一步鑒定神經(jīng)元的純度。(2)在離體培養(yǎng)成熟的原代海馬神經(jīng)元中加入尼古丁,Western blot檢測Epac蛋白表達變化。加入MLA(methyllycacotine,α7nAChR抑制劑)觀察其對Epac蛋白表達的影響。(3)建立尼古丁誘導(dǎo)的成年C57BL/6小鼠(包含雄性和雌性)條件位置位置偏愛(conditioned preference place,CPP)模型。(4)曠場實驗記錄成年雌性和雄性尼古丁偏愛小鼠自主活動的變化。(5)Western blot分析尼古丁誘導(dǎo)的CPP雄性和雌性小鼠海馬Epac信號、p-CREB、α7nAChR、PKA的蛋白表達。結(jié)果:(1)尼古丁作用體外海馬神經(jīng)后Epac1蛋白表達量上調(diào),作用8h后升高明顯,隨后即趨于正常,而Epac2在4 h、8 h、12 h、24 h的表達量上升。尼古丁能夠增加海馬神經(jīng)元Epac蛋白表達,加入MLA會抑制Epac2蛋白表達。(2)尼古丁在0.2mg/kg(雄性,SC)和0.4mg/kg(雌性,SC)能夠誘導(dǎo)成年小鼠產(chǎn)生CPP。(3)曠場實驗中,與自身對照組相比,雄性小鼠在中心區(qū)停留時間明顯上升,減少了雄性小鼠焦慮樣行為,而雌性小鼠的自發(fā)活動顯著增加,提升了雌性小鼠的活躍度。(4)CPP實驗后,Western blot結(jié)果顯示在雄性和雌性小鼠的海馬中Epac2表達量顯著性上升,但Epac1的變化并不明顯。在雌性小鼠中,Rap1蛋白顯著升高并且磷酸化CREB明顯降低。結(jié)論:尼古丁作用于體外海馬神經(jīng)元能夠刺激Epac表達上調(diào),MLA能夠抑制Epac的表達。尼古丁誘導(dǎo)CPP小鼠中海馬Epac信號通路發(fā)生改變�？傊�,尼古丁暴露可以增加海馬內(nèi)Epac信號的表達,為治療尼古丁濫用和依賴提供了新的藥理學(xué)上的靶點。圖[13]表[0]參[48]
【學(xué)位單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R749.6
【部分圖文】：

圖１：海馬神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化（１００Ｘ）逡逑Ｆｉｇ邋１．邋Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ邋ｎｅｕｒｏｎｓ邋（１０0ｘ邋）逡逑

圖２：海馬神經(jīng)元細胞化學(xué)染色

圖４：尼古丁對海馬神經(jīng)元ＰＫＡ表達水平的影響

【參考文獻】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 馬云龍;吸煙行為及尼古丁成癮的遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)機制探索[D];浙江大學(xué);2017年

本文編號：2826593