發(fā)布時間：2020-09-23 11:31

　　 目的:抑郁癥作為一種使人衰弱的疾病,同時擁有高發(fā)病率、與神經(jīng)疾病高共病率的特點,愈發(fā)突出地影響著人們的生活質(zhì)量。針對抑郁癥發(fā)病機制的研究日益增多,但其在病理生理上的表現(xiàn)仍難以被清晰的把握與總結。方法:在慢性不可預知性溫和刺激(CUMS)模型中,我們利用高效液相色譜結合紫外檢測的靶向代謝組學方法來鑒定小腸中氨基酸的變化。其后對存在顯著性差異的氨基酸與行為表型之間的相關性運用皮爾森相關分析來研究。腸道氨基酸轉運功能采用免疫印跡法驗證。此外,我們整合了前期研究結果,整合分析了CUMS大鼠模型中海馬組織、小腦組織、外周血單核細胞、尿液中的相關差異氨基酸來進一步了解抑郁癥中全身的氨基酸代謝變化。結果:對比CUMS組和對照組的結果后提示,在CUMS組大鼠小腸中檢測到了降低的谷氨酰胺和甘氨酸濃度和增加的天冬氨酸濃度。這些變化與抑郁樣行為顯著相關。免疫印跡法揭示了氨基酸轉運蛋白ASCT2和B~0AT1在CUMS組中呈現(xiàn)出降低的表達水平,而LAT1表達上調(diào)。甘氨酸和谷氨酰胺在小腸內(nèi)吸收轉運失調(diào)很可能導致其在全身及中樞中的缺少。結論:本次研究結果表明,甘氨酸和谷氨酰胺攝取系統(tǒng)可能成為抑郁癥的潛在治療靶點,綜合分析結果可為深入了解腸-腦軸下的細胞和分子機制提供新的見解,對闡釋圍繞在抑郁癥發(fā)病過程中的外周和中樞系統(tǒng)的病理生理變化帶來突破。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R749.4
【部分圖文】：

圖 1（A）CUMS 造模時間流程圖（b）CUMS 造模每周刺激方案Fig. 1. (A) Flow chart of CUMS procedure. (B) Weekly schedule of the CUMS regimen.1.5 行為學評估1.5.1 SPT 和體重SPT 在 CUMS 刺激前和刺激后分別進行。在第一次進行 SPT 之前，給予大鼠1%蔗糖溶液適應 48 小時。試驗當天，將水和食物從籠中移出 6 小時，然后向大鼠提供預先稱重好的 1%蔗糖和清水各 1 瓶，1 小時后，通過稱量兩個瓶子的重量計算出所有液體的消耗量，蔗糖偏好定義為（蔗糖消耗量/總消耗量）×100%。在 CUMS刺激前和整個 CUMS 刺激期間每周測定大鼠體重。1.5.2 曠場試驗（OFT）和 強迫游泳（FST）進行 OFT 的房間要求安靜、隔音。OFT 開始時，大鼠被放置于開放的曠場箱

圖 2 CUMS 誘導的抑郁樣行為Fig. 2. CUMS-induced depressive-like behaviors（A）基線期和 CUMS 造模中連續(xù) 4 周的的體重（B）基線期和 CUMS 造模后的蔗糖偏好（C）FST 中的不動時間（D-G）OFT 中的總活動距離、中心區(qū)域活動距離、中心區(qū)域活動度和站立次數(shù)*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。NS，無顯著性差異；對照組（n=20）；CUMS組（n=20）(A) Body weight at baseline and during the consecutive 4-week course of the CUMS protocol.(B) Sucrose preference at baseline and after the CUMS procedure. (C) Immobility time in FST.(D G) Total distance, central distance, central activity, and number of rearings in OFT. *p < 0.05,**p < 0.01, ***p < 0.001. NS, not significant. CON (n = 20); CUMS (n = 20)2.2 小腸 20 種氨基酸中 Asp, Gln, Gly 的濃度顯著改變先前的研究對方法學驗證指標進行了證實，該 HPLC 檢測方法具有良好的線性、準確度、重復性和穩(wěn)定性[35, 39]，CON 和 CUMS 組的色譜圖和標準曲線如圖 3

圖 3（A）CON 大鼠，（B）CUMS 大鼠和（C）標準曲線（250 nmol/l）的色譜圖峰值Fig. 3. Chromatogram of(A) control rats ,(B) CUMS rats and (C) Standard curve (250 nmol/L)peaks(1) 天冬氨酸, (2) 谷氨酸, (3) DABS-CL, (4) 天冬酰胺, (5) 谷氨酰胺, (6) 絲氨酸, (7) 酸, (8) 甘氨酸, (9) 精氨酸, (10) 丙氨酸, (11) 脯氨酸, (12) 纈氨酸, (13) 蛋氨酸, (14) 異酸, (15) 亮氨酸, (16) 正亮氨酸, (17) 苯丙氨酸, (18) 氨, (19) 賴氨酸, (20) 組氨酸, (21) 酸.(1) aspartic acid, (2) glutamic acid, (3) DABS-CL, (4) asparagine, (5) glutamine, (6) serine,hreonine, (8) glycine, (9) arginine, (10) alanine, (11) proline, (12) valine, (13) methionine, (1soleucine, (15) leucine, (16) NorLeu, (17) phenylalanine, (18) ammonia, (19) lysine, (20) histidi21) tyrosine.計算氨基酸與相應的內(nèi)標物的峰面積的比值確定每個氨基酸的濃度，涉及腸中 20 種氨基酸的濃度的詳細信息，參考表 2。

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本文編號：2825270