研究背景和目的 隨著人口老齡化的進展,阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)和腦出血(Intracerebral hemorrhage, ICH)的發(fā)病率呈逐年增加趨勢,已成為嚴重影響中老年人身心健康的重要疾病,迄今尚無特異性的臨床防治措施。因此,積極探索新的有效防治途徑和方法,仍然是當今亟需解決的重要課題。Humanin(HN)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種由24氨基酸組成的短肽,研究表明HN及其衍生物——S14G-HN(HNG)能夠有效地抑制目前所知的AD致病因子的毒性作用,且HNG生物活性作用較HN大1000倍。另有在體實驗表明HNG對缺血性腦卒中亦具有較好的防治作用。雖然HN和HNG已被證明對部分神經(jīng)系統(tǒng)疾病顯示了較好的神經(jīng)保護作用,但其確切的有效作用途徑及機制仍不清楚。本項研究應(yīng)用實驗性小鼠AD模型和大鼠ICH模型,通過觀察HN、HNG對β-淀粉樣蛋白(amyloid-beta protein,Aβ)以及ICH所致炎癥反應(yīng)的效應(yīng)作用,試圖明確HN和HNG抗Aβ神經(jīng)毒性的機制以及HNG對ICH的有效作用和機制。 研究方法和結(jié)果 (1)HN和HNG對Aβ所致炎癥反應(yīng)的有效抑制作用應(yīng)用立體定向注射Aβ25～35至海馬CA1區(qū)建立小鼠AD模型,觀察不同劑量HN和HNG對Aβ25～35所致炎癥反應(yīng)的療效。結(jié)果發(fā)現(xiàn)應(yīng)用HN和HNG治療的各組在3d、7d、14d時,海馬區(qū)GFAP陽性細胞的表達數(shù)量較對照組均顯著減少(P0.01),且存在劑量依賴關(guān)系;100μmol/L HN較10μmol/L HN以及100nmol/L HNG較10nmol/L HNG對炎癥反應(yīng)的抑制作用更為顯著(P0.01)。這些研究結(jié)果表明,HN和HNG在體內(nèi)可有效地抑制Aβ毒性導(dǎo)致的GFAP表達,能夠通過抗炎癥反應(yīng)途徑而發(fā)揮抗AD的神經(jīng)保護作用,且HNG的生物活性作用較HN更強。 (2)實驗性大鼠ICH炎癥反應(yīng)及腦水腫演化規(guī)律及其神經(jīng)行為學變化應(yīng)用自體血注射建立大鼠ICH模型,分別于不同時間點觀察炎癥反應(yīng)、腦組織含水量和神經(jīng)行為學變化規(guī)律。結(jié)果發(fā)現(xiàn)血腫周圍GFAP、OX-42、MPO陽性細胞于ICH后6h即出現(xiàn)增多,72h達到高峰,14d恢復(fù)至對照組水平;而TUNEL陽性細胞于12h開始增多,72h達到高峰,7d后下降,14d時與對照組比較仍有統(tǒng)計學意義。同時研究發(fā)現(xiàn)ICH后血腫周圍紋狀體和大腦皮層含水量在3h即開始形成并逐漸增加,24h達到高峰,72h開始消退,1w時恢復(fù)至對照組水平;對側(cè)大腦組織具有明顯的遠隔影響效應(yīng),非出血側(cè)大腦皮層、紋狀體含水量亦有增加,但程度較輕且恢復(fù)快,72h后即可達到對照組水平;幕下結(jié)構(gòu)小腦組織無明顯影響。出血側(cè)皮層和紋狀體腦組織含水量與神經(jīng)行為學障礙呈負相關(guān)。研究結(jié)果表明在ICH早期即可出現(xiàn)炎性反應(yīng)和腦水腫形成,24～72h應(yīng)為防治腦水腫和炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵時期,為明確ICH最佳治療時間窗以及選擇性的抗炎癥治療和控制腦水腫提供了實驗理論依據(jù)。 (3)HNG對大鼠ICH炎癥反應(yīng)的有效治療作用應(yīng)用上述方法建立的大鼠ICH模型,側(cè)腦室給予注射100nmol/L HNG 5μl,72h后觀察血腫周圍膠質(zhì)細胞和凋亡細胞的表達變化。研究發(fā)現(xiàn)HNG治療組GFAP、OX42、TUNEL表達數(shù)量較對照組明顯減少;星型膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞的胞體變小且突起短。結(jié)果表明HNG能夠通過有效地抑制炎癥反應(yīng)、抗凋亡等途徑而對ICH發(fā)揮神經(jīng)保護作用。 結(jié)論 本項研究首次證明了HN、HNG在體內(nèi)可有效地抑制Aβ毒性導(dǎo)致的GFAP表達,提示通過抗炎癥反應(yīng)途徑可能是HN、HNG抗AD有效作用的重要機制之一。另外,研究表明在ICH早期即可出現(xiàn)炎性反應(yīng)和腦水腫形成,24～72h應(yīng)為防治腦水腫和炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵時期;早期應(yīng)用HNG能夠有效地抑制ICH的炎癥反應(yīng)、細胞凋亡的發(fā)生,HNG對ICH具有顯著的神經(jīng)保護作用。以上研究結(jié)果為進一步探討HN、HNG有效神經(jīng)保護作用的機制及其在防治神經(jīng)疾病中的廣泛應(yīng)用提供了實驗理論依據(jù)。
【學位單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2007
【中圖分類】：R749.16;R743.34
【部分圖文】：

第四軍醫(yī)大學碩士學位論文表3： 腦出血后各時間點GFAP、OX42、MPO、TUNEL陽性細胞數(shù)（ x ± s）時GFAP OX42 MPO TUNEL間 control ICH control ICH control ICH control ICH6h 53.5±3.05 65.4±4.22a1.8±0.55 9.7±2.96a8.7±0.92 28.9±4.72a3.3±1.26 4.6±0.912h 64.1±3.79 95.9±6.00a6.4±1.04 96.9±11.04a18.5±1.99 90.2±8.02a3.1±0.97 12.0±324h 72.5±4.07 114.2±6.40a10.4±2.41 104.7±15.95a29.3±2.45 205.4±16.15a6.1±1.83 35.4±648h 74.9±3.33 130.6±9.63a19.8±4.14 185.5±24.04a29.4±5.26 350.9±34.67a13.3±2.90 39.7±872h 74.3±4.99 141.3±8.22a21.6±4.99 212.5±15.12a30.7±5.00 346.1±30.02a14.1±3.88 47.3±17d 53.1±4.94 90.6±7.91a6.25±0.97 87.6±12.66a9.6±1.43 194.1±12.02a3.6±1.10 29.9±414d 43.4±3.20 44.2±5.32 1.1±1.05 1.5±0.69 8.9±1.52 11.8±3.12 3.85±1.13 10.3±3aP＜0.05, vs Control group

第四軍醫(yī)大學碩士學位論文2.6 ICH 后 OX-42 的表達變化正常大鼠腦組織中，小膠質(zhì)細胞為靜息狀態(tài)，OX-42 為陰性。對照組在針道周圍有少量陽性 OX-42 表達。ICH 后，小膠質(zhì)細胞激活轉(zhuǎn)化為反應(yīng)狀態(tài)，ICH 后 6h，開始出現(xiàn) OX-42 陽性細胞。12h，OX-42 深染明顯，陽性細胞數(shù)量增多，體積增大，突起伸長變粗，突起上可見到小棘。ICH 后 72h，OX-42陽性細胞數(shù)量和體積均達到高峰。隨后小膠質(zhì)細胞的反應(yīng)性開始逐漸減弱，14d 時，偶有少量的 OX-42 陽性的細胞，細胞數(shù)恢復(fù)至對照組水平（。圖 2A~D；表 3）

第四軍醫(yī)大學碩士學位論文可見在血腫內(nèi)有大量的 MPO 陽性細胞，陽性細胞呈現(xiàn)圓形或類圓形，胞核深染，部分可見核分葉，在血腫周圍的腦組織中僅有少量的 MPO 陽性細胞。ICH后 48h～72h，在血腫周圍的腦組織中中性粒細胞的浸潤達到峰值，并有部分細胞體積變大，為巨噬細胞。血腫周圍腦組織浸潤的 MPO 陽性細胞數(shù) 7d 后開始減少。14d 血腫內(nèi)存在大量的含鐵血黃素沉積和少量 MPO 陽性細胞，血腫周圍腦組織內(nèi)浸潤的 MPO 陽性細胞數(shù)恢復(fù)至對照組水平。（圖 3A~D；表 3）

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2821973