目的1.通過構(gòu)建大鼠不同性質(zhì)攻擊行為模型,探索PSD-95(postsynaptic density-95,PSD-95)阻斷劑ZL006對(duì)攻擊行為的作用,明確PSD-95信號(hào)通路在攻擊行為中的作用及機(jī)制。2.通過驗(yàn)證PSD-95信號(hào)通路在五輕色胺1A受體(serotonin 1A receptor,5-HT1AR)激動(dòng)劑改善大鼠病理性攻擊行為過程中的作用,進(jìn)一步探索PSD-95信號(hào)通路在病理性攻擊行為中的參與機(jī)制。方法1.將54只Sprague-Dawley(SD)大鼠(購(gòu)于重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,生后21天),隨機(jī)分為3組,分別構(gòu)建病理性攻擊(pathological aggression,PA)模型組(n=18)、普通攻擊(normal aggression,NA)模型組(n=18)及正常飼養(yǎng)的對(duì)照組(Control,Ctrl)(n=18),并同時(shí)飼養(yǎng)入侵鼠(instrumentalrats)(n=18)。建模成功后,利用居住-入侵試驗(yàn)測(cè)試大鼠攻擊行為。再?gòu)娜齻�(gè)模型組中各隨機(jī)選取12只構(gòu)建成功的大鼠模型,分別隨機(jī)分為2組:PA+ZL006組(n=6)、PA+生理鹽水組(Saline)(n=6)、NA+ZL006 組(n=6)、NA+Saline 組(n=6)、Ctrl+ZL006組(n=6)、Ctrl+Saline 組(n=6)。ZL006 和生理鹽水分別按照 1.0 mg/kg和2ml/只腹腔注射。每隔三天注射一次,且每次于18:00進(jìn)行注射,持續(xù)兩周后對(duì)各組大鼠再次進(jìn)行居住-入侵實(shí)驗(yàn)。行為學(xué)檢測(cè)結(jié)束后,將大鼠麻醉迅速取眼眶后靜脈血,離心取血清,用ELISA法測(cè)大鼠血清糖皮質(zhì)激素濃度;后將大鼠斷頭處死,取海馬、前額葉、下丘腦組織,用Western blot檢測(cè)神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,nNOS)、PSD-95、糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor,GR)的表達(dá)。未進(jìn)行干預(yù)的大鼠則在建模后直接麻醉、處死,并檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)(如前述)。2.將另外成功構(gòu)建的24只病理性攻擊大鼠隨機(jī)分為4組,分別為8-OH-DPAT 組、8-OH-DPAT+ZL006 組、ZL006 組、Saline 組,5-HT1A受體激動(dòng)劑(8-OH-DPAT)以1 mg/kg每日腹腔注射并持續(xù)兩周、PSD-95阻斷劑(ZL006)以1mg/kg每隔3天腹腔注射,生理鹽水按照2ml/只腹腔注射并持續(xù)2周。每日18:00進(jìn)行注射,ZL006均在8-OH-DPAT注射后10min進(jìn)行注射。分別在給藥前、給藥1周后及給藥2周后用居住-入侵實(shí)驗(yàn)測(cè)試大鼠病理性攻擊行為,且每次居住-入侵實(shí)驗(yàn)后均取大鼠眼眶后靜脈血。最后一次行為學(xué)檢測(cè)結(jié)束后取大鼠海馬、前額葉及下丘腦組織,用Western blot檢測(cè)各腦區(qū)5-HT1AR、PSD-95及GR的表達(dá)。結(jié)果1行為學(xué)結(jié)果1.1建模后利用居住-入侵試驗(yàn)檢測(cè)行為學(xué)結(jié)果示:PA組攻擊總數(shù)、攻擊持續(xù)時(shí)間、攻擊要害部位次數(shù)、屈服后再次攻擊次數(shù)均高于NA組和Ctrl組(P0.01),且NA組攻擊總數(shù)及攻擊持續(xù)時(shí)間高于Ctrl組(P0.01)。干預(yù)后發(fā)現(xiàn)NA+ZL006組攻擊總數(shù)、攻擊持續(xù)時(shí)間較NA+Saline組顯著降低(P0.01),PA+ZL006組攻擊潛伏時(shí)間較PA+Saline組增加,差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。1.2給予病理性攻擊大鼠不同給藥方案,行為學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn):8-OH-DPAT組大鼠攻擊總數(shù)、攻擊持續(xù)時(shí)間及攻擊要害部位次數(shù)在給藥1周及2周后均有明顯下降(P0.05);8-OH-DPAT+ZL006組大鼠僅在給藥1周后有下降(P0.05);ZL006組的行為學(xué)在一周、兩周后均無明顯變化(P0.05)。2 Western blot檢測(cè)結(jié)果2.1建模成功后,未進(jìn)行干預(yù)的大鼠其相關(guān)指標(biāo)Western blot結(jié)果顯示:海馬區(qū)PA組PSD-95、nNOS表達(dá)均低于Ctrl組(P0.01),而NA 組 PSD-95、nNOS 表達(dá)則高于 Ctrl 組(P0.01,P0.05),PA 組GR表達(dá)顯著高于NA組、Ctrl組(P0.01);前額葉區(qū)NA組nNOS表達(dá)低于PA組、Ctrl組(P0.05,P0.01),PA組nNOS表達(dá)則低于 Ctrl 組(P0.05),NA 組 PSD-95 表達(dá)低于 Ctrl 組(P0.05),PA組GR表達(dá)高于NA組和Ctrl組(P0.01,P0.05);下丘腦區(qū)PA組nNOS表達(dá)高于NA組和Ctrl組(P0.05,P0.01),NA組nNOS表達(dá)高于Ctrl組(P0.05),PA組PSD-95表達(dá)高于NA組和Ctrl組(P0.05,P0.01)。干預(yù)后,僅在海馬區(qū)發(fā)現(xiàn)NA+ZL006組GR表達(dá)較NA+NaCl組升高(P0.01),其余各模型ZL006組和Saline組各腦區(qū)PSD-95、nNOS、GR表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.2給予病理性攻擊大鼠不同干預(yù)手段后,Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn):海馬區(qū)ZL006組PSD-95低于其余三組(P0.05),而8-OH-DPAT組PSD-95表達(dá)則高于其它三組(P0.05),8-OH-DPAT組GR表達(dá)低于其余三組(P0.05),8-OH-DPAT 組和 8-0H-DPAT+ZL006 組 5-HT1AR表達(dá)均高于其余兩組(P0.05);前額葉區(qū)8-OH-DPAT組PSD-95表達(dá)高于其余三組(P0.05),8-0H-DPAT+ZL006組PSD-95表達(dá)高于ZL006 組和 NaCl 組(P0.05),8-OH-DPAT 組和 8-0H-DPAT+ZL006組5-HT1AR表達(dá)均高于其余兩組(P0.05);下丘腦區(qū)則發(fā)現(xiàn)各組間PSD-95、5-HT1AR表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3 ELISA測(cè)血清糖皮質(zhì)激素濃度結(jié)果3.1建模后,取未進(jìn)行干預(yù)大鼠眼眶后靜脈血,測(cè)其血清糖皮質(zhì)激素結(jié)果發(fā)現(xiàn):PA組血清糖皮質(zhì)激素濃度顯著低于Ctrl組(7.06±1.64ng/mlvs15.67±1.36ng/ml,P0.01),NA 組清糖皮質(zhì)激素濃度則高于 Ctrl 組(23.04±4.83ng/mlvs15.67±1.36ng/ml,P0.05)。干預(yù)后比較各模型組ZL006和Saline組血清糖皮質(zhì)激素濃度發(fā)現(xiàn),NA+ZL006組血清糖皮質(zhì)激素濃度低于NA+Saline組(16.98±1.88 ng/ml vs 24.42±1.77 ng/ml,P0.01)。3.2對(duì)病理性攻擊大鼠給予不同干預(yù)方案后,測(cè)血清糖皮質(zhì)激素濃度發(fā)現(xiàn):8-OH-DPAT組在給藥一周后血清糖皮質(zhì)激素較給藥前增加(16.33±6.71 ng/ml vs8.72±3.34 ng/ml,P0.05),且給藥兩周后血清糖皮質(zhì)激素濃度較給藥一周后繼續(xù)增加(19.21±4.05 ng/ml vs 16.33±6.71ng/ml,P0.05)。其它三組給藥后糖皮質(zhì)激素濃度則無明顯變化(P0.05)。結(jié)論1.ZL006可改善普通攻擊大鼠模型的攻擊行為,而同等劑量下的ZL006對(duì)病理性攻擊大鼠的攻擊行為無明顯改善作用。這可能與不同攻擊模型海馬區(qū)GR的表達(dá)和血清糖皮質(zhì)激素濃度的水平差異有關(guān)。2.PSD-95信號(hào)通路是5-HT1A受體激動(dòng)劑(8-OH-DPAT)對(duì)病理性攻擊行為改善作用的重要途徑,可能原因是PSD-95信號(hào)途徑介導(dǎo)了8-OH-DPAT對(duì)病理性攻擊大鼠海馬區(qū)GR和血清糖皮質(zhì)激素的調(diào)控作用。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R749
【部分圖文】：

ＥＬＩＳＡ檢測(cè)結(jié)果：干預(yù)后ＮＡ＋ＺＬ００６組大鼠血清糖皮質(zhì)激素濃度低于逡逑ＮＡ＋Ｓａｌｉｎｅ組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ＰＣ０．０１），其余各模型實(shí)驗(yàn)組與鹽水組間無逡逑統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（尸＞０．０５）（見圖７）。逡逑Ｃ邋３０－１邐，邋＊＊邋，逡逑＾邐Ｉ邐１逡逑８邐Ｔ逡逑Ｉ邐丁逡逑ｉｔ邋ｉ邋ｎ逡逑ｉｉ逡逑Ｉ邋ｓ邋１０邋－邋Ｔ逡逑§逡逑ｃ邐｜逡逑Ｏ逡逑Ｖ邋＂ｖｗ逡逑圖７干預(yù)后各組大鼠血清糖皮質(zhì)激素濃度逡逑Ｆｉｇ７邋Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ邋ｉｎ邋ｓｅｒｕｍ邋ａｆｔｅｒ邋ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ逡逑＊邋Ｐ＜０．０５，邋＊＊Ｐ＜０．０１邋ｖｓ邋Ｓａｌｉｎｅ邋ｇｒｏｕｐ．邋ｎ＝６，邋ｘ邋土邋ｓ逡逑２８逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2818984