發(fā)布時間：2020-08-31 17:14

　　 血管性認(rèn)知障礙(VCI)是指由腦血管因素所引起的認(rèn)知功能的變化,腦卒中后產(chǎn)生的認(rèn)知功能障礙占血管性認(rèn)知障礙的主要部分。目前關(guān)于認(rèn)知功能障礙的治療大都集中于對學(xué)習(xí)記憶功能障礙的研究,這既不符合認(rèn)知域的界定標(biāo)準(zhǔn),又使得與學(xué)習(xí)記憶功能障礙同時發(fā)生的情感相關(guān)負(fù)性情緒往往被忽視,而這種伴隨出現(xiàn)的情緒不僅更容易加重患者及家屬負(fù)擔(dān)、降低生活質(zhì)量,同時也是加重認(rèn)知功能損害因素之一。本研究分別采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎(2-VO組)以及過度運動聯(lián)合雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎(OE+2-VO組)這兩種方式建立血管性認(rèn)知障礙模型,以探究運動對血管性認(rèn)知障礙的影響,研究過度運動能否加重情感相關(guān)負(fù)性情緒的發(fā)生機率,并為建立血管性認(rèn)知障礙負(fù)性情緒相關(guān)模型提供實驗依據(jù)。同時對其在不同時間點采出的生物樣品進行檢測,監(jiān)測兩種模型神經(jīng)生物化學(xué)物質(zhì)的變化情況并找出其發(fā)生轉(zhuǎn)變的時間點,結(jié)合其行為學(xué)的變化情況,解釋其發(fā)生機制,找出兩者之間的相關(guān)性,為以后的研究奠定基礎(chǔ)。42d時采用Morris水迷宮對大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力進行檢測,平均速度結(jié)果顯示三組大鼠之間并無明顯差異(P0.05),逃避潛伏期測定結(jié)果顯示2-VO組及OE+2-VO組顯著多于SO組,且這種趨勢會一直持續(xù)至測試期(P0.05),空間探索結(jié)果表明,與SO組相比,2-VO組大鼠穿越平臺次數(shù)顯著降低(P0.01),70d時對腦組織切片進行HE染色,結(jié)果顯示,2-VO組及OE+2-VO組腦組織都會出現(xiàn)不同程度的固縮、神經(jīng)元的丟失;為了考察運動的強度,應(yīng)用紫外分光光度法對血清中乳酸脫氫酶的含量進行測定,結(jié)果顯示與2-VO組相比,OE+2-VO組在14d時乳酸脫氫酶的含量顯著下降(P0.05),在56d時,2-VO組乳酸脫氫酶的含量顯著增加(P0.05),即長時間間歇性的運動會導(dǎo)致血清中乳酸脫氫酶的含量下降;70d時OE+2-VO組腦組織中乳酸脫氫酶的含量顯著高于SO組;采用Elisa試劑盒對大鼠血清中皮質(zhì)醇和睪酮的含量進行測定,結(jié)果表明,皮質(zhì)醇與睪酮的比值含量并無明顯變化,且這種運動程度并未達到過度運動的狀態(tài),表明運動訓(xùn)練對外周系統(tǒng)并無明顯影響,但是卻能夠加重中樞系統(tǒng)的損傷。采用超高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法在模型成立后14、28、42、56、70d對大鼠腦脊液中乙酰膽堿的含量進行測定,結(jié)果表明,在模型建立42d時,2-VO組及OE+2-VO組乙酰膽堿含量明顯下降(P0.01),且這種下降趨勢會持續(xù)至56d(P0.01),其余各天各組大鼠之間含量并無明顯差異(P0.05),即雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎后會造成腦內(nèi)乙酰膽堿的含量變化;為了研究乙酰膽堿發(fā)生變化的原因,在模型成立70d采用免疫組化法對乙酰膽堿以及乙酰膽堿酯酶的含量進行了測定,結(jié)果表明,2-VO組乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶的含量顯著下降(P0.05),OE+2-VO組乙酰膽堿酯酶的含量顯著升高(P0.01),即2-VO組乙酰膽堿含量下降是合成過程受阻,而OE+2-VO組則加速了分解過程。同時還對與負(fù)性情緒相關(guān)的去甲腎上腺素以及多巴胺的含量進行了測定,在模型建立后14、28、42、56、70d對大鼠腦脊液進行采集,采用超高效液相色譜聯(lián)合質(zhì)譜的方法對腦脊液中多巴胺及去甲腎上腺素的含量進行測定,結(jié)果表明,OE+2-VO組在42d、56d時多巴胺的含量下降明顯(P0.01),且這種下降趨勢一直持續(xù)至70d(P0.05),即過度運動對多巴胺的變化會產(chǎn)生影響,對多巴胺含量的變化與行為學(xué)進行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)多巴胺含量的變化與動物的社交行為、抑郁樣行為以及學(xué)習(xí)記憶能力有關(guān);去甲腎上腺素測定結(jié)果表明,在模型成立后56d時,2-VO組及OE+2-VO組,去甲腎上腺素含量顯著降低(P0.05)相關(guān)性實驗結(jié)果表明,去甲腎上腺素含量的變化與動物的焦慮樣行為有關(guān);為了分析多巴胺及去甲腎上腺素產(chǎn)生變化的原因,在70d時對腦內(nèi)合成過程中的酶酪氨酸羥化酶、多巴胺-β-脫氫酶的含量進行測定,結(jié)果表明,酪氨酸羥化酶的含量三組之間并沒有明顯變化(P0.05),OE+2-VO組多巴胺-β-脫氫酶的含量顯著高于SO組,即多巴胺含量的降低合成過程無關(guān)。雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎以及運動訓(xùn)練聯(lián)合雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎能夠建立血管性認(rèn)知障礙的模型,過度運動能增加中樞系統(tǒng)中乳酸脫氫酶的含量,造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷;血管性認(rèn)知障發(fā)生的過程中會伴有神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化,雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎阻礙乙酰膽堿的合成過程,OE+2-VO組加速了其分解過程;多巴胺含量并不是通過干擾多巴胺的合成過程而導(dǎo)致的多巴胺含量的下降,且多巴胺含量的變化與社交行為、抑郁樣行為、學(xué)習(xí)記憶功能有關(guān);去甲腎上腺素含量的變化與焦慮樣行為具有相關(guān)性。
【學(xué)位單位】：哈爾濱商業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R749.13
【部分圖文】：

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（１０邋Ｘ邋ｔｉｍｅｓ邋ｕｎｄｅｒ邋ｔｈｅ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，邋ＳＯ邋ｇｒｏｕｐ，邋２－ＶＯ邋ｇｒｏｕｐ，邋ＯＥ＋２－ＶＯ邋ｇｒｏｕｐ）逡逑２．６．２大鼠皮層部位染色結(jié)果逡逑在光鏡下，如圖２－２所示，從左至右依次１０Ｘ鏡下ＳＯ組皮層、２－ＶＯ組皮層、ＯＥ＋２－ＶＯ逡逑組皮層部位ＨＥ染色結(jié)果，從圖中可以看出，ＳＯ組皮層部位神經(jīng)元細(xì)胞圓潤，分布清楚，逡逑細(xì)胞形態(tài)較完整，胞核、胞質(zhì)分布清洗；而２－ＶＯ組細(xì)胞大部分呈現(xiàn)蝌蚪狀，分布稀松，逡逑胞核胞質(zhì)分布不清；ＯＥ＋２－ＶＯ組，細(xì)胞形狀細(xì)長，分布較疏松，形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。逡逑７邋－邋＿邋．逡逑？邋■邋．邋？逡逑Ｓ邋％邋＇邐ｉＡ，”１邐：４？邋，ｓ“，？＇．．／、《邋１逡逑ｒ＊＂邐？邋：逡逑Ｖ，‘：邐”邐：邐ｉ逡逑？邋…邋？邋＇邋－邋．逡逑二ｊ邋ｒ：上．二：■、二邐！N；二￡逡逑圖２－２邋１０邋Ｘ鏡下大鼠腦皮質(zhì)區(qū)ＨＥ染色切片逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋ＨＥ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｏｆ邋ｒａｔ邋ｃｏｒｔｉｃａｌ邋ａｒｅａ邋ｕｎｄｅｒ邋１０邋Ｘ邋ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ逡逑（從左至右依次為１０Ｘ鏡下ＳＯ組、２－ＶＯ組、ＯＥ＋２－ＶＯ組腦皮質(zhì)區(qū)域切片）逡逑（１０邋Ｘ邋ｔｉｍｅｓ邋ｕｎｄｅｒ邋ｔｈｅ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，邋ＳＯ邋ｇｒｏｕｐ，邋２－ＶＯ邋ｇｒｏｕｐ，邋ＯＥ＋２－ＶＯ邋ｇｒｏｕｐ邋）逡逑２．７大鼠血清皮質(zhì)醇含量的測定結(jié)果逡逑分別于模型建立后１４、２８、４２、５６、７０ｄ對大鼠的血清進行采集對皮質(zhì)醇含量進行逡逑測定

滴加二抗，室溫下孵育２０ｍｉｎ；逡逑ＤＡＢ顯色，蘇木素染色：ＰＢＳ邋５ｍｉｎＸ３次，擦片后將其放于木板上。滴加ＤＡＢ顯逡逑色液，顯微鏡下觀察，待出現(xiàn)陽性細(xì)胞染色較深，背景未染色或染色較淺時，立即浸入逡逑ＰＢＳ緩沖液以終止染色。自來水沖２ｍｉｎ。用蘇木素液復(fù)染，使細(xì)胞核著色，用自來水沖逡逑洗ｌＯｍｉｎ，蒸飽水洗一次；逡逑脫水：８０％乙醇邋３ｍｉｎ，９０％乙醇邋３ｍｉｎ，９５％乙醇邋３ｍｉｎ，１００％乙醇邋３ｍｉｎ；逡逑透明：二甲苯５ｍｉｎＸ２次，使切片變透明；逡逑封片：將切片用吸水紙擦干，用中性樹膠封片，組織上不要有氣泡，烘干。在顯微逡逑鏡下觀察。逡逑３．４統(tǒng)計學(xué)處理方法逡逑統(tǒng)計方法同２．４項下內(nèi)容。逡逑３．５大鼠腦脊液中乙酰膽堿含量的方法學(xué)考察及其測定結(jié)果逡逑３．５．１乙酰膽堿方法學(xué)考察結(jié)果逡逑專屬性考察：精密吸取，５［ＪＬ乙酰膽堿進樣，色譜圖如３－２所示，乙酰膽堿分離較逡逑清，且無其他雜質(zhì)峰干擾，保留時間：ｌ．ＯＯｍｉｎ。逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2809099