發(fā)布時間：2020-08-17 12:26

【摘要】： 阿爾滋海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種原發(fā)退行性老年癡呆,其特征性病理改變有:腦組織內(nèi)出現(xiàn)大量老年斑(senile placques,SP)、神經(jīng)纖維纏結(neurofibrillary tangle,NFT)、神經(jīng)元數(shù)量減少和顆�？张葑冃�(granulovacuolardegeneration,GVD)等,AD的發(fā)病機理十分復雜,可能是多病因相互作用的結果。一些研究發(fā)現(xiàn),嗅覺系統(tǒng)的功能障礙與AD尤其是早期AD的發(fā)生有著密切的聯(lián)系。為了觀察AD嗅覺系統(tǒng)的病理改變在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用,建立一種理想的AD模型十分重要。本實驗通過對大鼠進行腦立體定位將Aβ通過微量進樣器注入大鼠側腦室,導致大鼠被動回避反射及水迷宮學習記憶障礙從而建立AD模型。通過HE染色觀察嗅上皮(olfactory epithelium,OE)、嗅球(olfactory bulb,OB)和海馬組織切片,觀察到AD模型組大鼠的嗅粘膜、嗅球和海馬較對照組均表現(xiàn)有神經(jīng)病理改變。 在成功建立模型的基礎上對模型組和對照組大鼠的嗅粘膜、嗅球和海馬等嗅覺區(qū)域進行膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)以及嗅覺標記蛋白(olfactory marker protein,OMP)的免疫組化相關檢測,并利用t檢驗方法分析對照組和模型組之間的統(tǒng)計學意義。 為了深入研究基因水平上的變化本文采用DNA微列陣技術對模型大鼠嗅球組織的基因表達譜的變化進行了分析,以期從基因水平上分析嗅覺與老年癡呆的聯(lián)系。在得到的811個差異表達基因中進行第一步初篩,挑選出23個表達差異明顯的基因,這些基因包括與神經(jīng)退行性疾病發(fā)病機制、細胞凋亡途徑、鈣離子信號通路等相關的基因。因為老年癡呆疾病的病因雖然到目前為止并沒有明確,但是主要的分子生物學改變與細胞的凋亡、過氧化以及離子信號通路的改變均有密切的關系,這些在嗅球組織中發(fā)現(xiàn)的差異基因初步說明了嗅球和老年癡呆之間存在一定的聯(lián)系。我們進一步在所有挑選的差異表達基因中選擇六個與神經(jīng)元和神經(jīng)膠質細胞的改變、嗅覺特異性標記、細胞凋亡以及鈣離子信號通路的調控相關的基因進行半定量PCR檢測以驗證轉錄水平的變化。另外,在此基礎上采用Western Blot的方法對這六個差異基因所對應編碼的蛋白即GFAP、NSE、OMP、鈣調神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin,CaN)和蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)進一步驗證蛋白質水平的變化。結果顯示無論從轉錄水平還是蛋白質水平,模型組與對照組均存在明顯的差別,并具有統(tǒng)計學意義,而且這些改變與所得的基因芯片上的差異表達基因的上調或下降的幅度相一致,進一步證明了基因芯片的準確性,從基因水平說明老年癡呆與嗅覺之間的聯(lián)系。
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R749.16
【圖文】：

北京協(xié)和醫(yī)學院博十研究生學位論文積的生理鹽水。注射后用粘合劑粘合皮膚，按lmL/Kg體重肌肉注射青霉素預防感染【，0，(圖1一l·l一2)。圖1一1大鼠的固定及分離皮下組織。如圖所示將大鼠固定于腦立體定位儀上，縱向切開頭頂部皮膚，分離皮下組織，以雙氧水適當處理顱骨使骨縫(個)清晰。圖1一 2Ap腦室內(nèi)注射。如圖所示將大鼠側腦室立體定位儀坐標調為前自后1.Ollnn，矢狀縫旁2.Ollnn，硬腦膜下4.Ollnn，以骨鉆打開顱骨后，使用微量進樣器自腦表面垂直進針進行注射(個)。

北京協(xié)和醫(yī)學院博十研究生學位論文積的生理鹽水。注射后用粘合劑粘合皮膚，按lmL/Kg體重肌肉注射青霉素預防感染【，0，(圖1一l·l一2)。圖1一1大鼠的固定及分離皮下組織。如圖所示將大鼠固定于腦立體定位儀上，縱向切開頭頂部皮膚，分離皮下組織，以雙氧水適當處理顱骨使骨縫(個)清晰。圖1一 2Ap腦室內(nèi)注射。如圖所示將大鼠側腦室立體定位儀坐標調為前自后1.Ollnn，矢狀縫旁2.Ollnn，硬腦膜下4.Ollnn，以骨鉆打開顱骨后，使用微量進樣器自腦表面垂直進針進行注射(個)。

鼠在Zmin之內(nèi)尚未找到平臺，則將大鼠拿到平臺上并使它在上面停留205，若大鼠在Zmin內(nèi)找到平臺，也讓其在平臺上停留205，結束一次訓練。于造模后第13天進行測試。設定實驗時間為605(圖1一3、1一4)。圖1一 3Morris水迷宮的組成。如圖所示Morris水迷宮主要由一不銹鋼制成的圓柱形黑色水池和一可移動位置的平臺組成。水池上空通過一攝像機與監(jiān)視電視和計算機連接。

【引證文獻】

相關碩士學位論文 前1條

1 孫雯雯;高膽固醇血癥在阿爾茨海默病發(fā)生中的作用及柳茶提取物的治療效應[D];蘭州大學;2012年

本文編號：2795324