【摘要】： 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease AD),俗稱(chēng)老年性癡呆(senile dementia),是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性退行性變性疾病。發(fā)現(xiàn)至今,研究者一直沒(méi)有停止對(duì)阿爾茨海默病的病因和發(fā)病機(jī)理的研究,但對(duì)于這一疾病的治療至今還沒(méi)有突破性的進(jìn)展。隨著細(xì)胞工程的迅速發(fā)展,干細(xì)胞移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究為治療AD開(kāi)辟了新天地。 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(aminiotic membrane derived human mesenchymal stem cells, Ad-hMSCs)是近些年分離培養(yǎng)的多潛能干細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)深入探索靜脈移植人第三代羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在阿爾茨海默氏癥轉(zhuǎn)基因鼠體內(nèi)的遷移存活,以及在腦部的歸巢和疾病治療的機(jī)制。 本論文共分為三部分。第一部分：人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)；第二部分：第三代人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈移植在轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默癥小鼠體內(nèi)的遷移及存活；第三部分：第三代人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈移植在轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默癥小鼠腦部的歸巢以及疾病治療機(jī)制研究。 第一部分：從胎盤(pán)分離出人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞,體外培養(yǎng)擴(kuò)增,傳至第三代,選擇形態(tài)保持良好,生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞做后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 第二部分：采用原代培養(yǎng)后傳至第三代的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠的尾靜脈移植,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個(gè)／ml,注射量0.5 ml/只。采用組織冰凍切片,熒光顯微鏡觀察人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植后,不同時(shí)間點(diǎn)在轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默癥小鼠體內(nèi)心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟及腦部的遷移情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)移植第三代的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞后,在不同的時(shí)間的小鼠的肝臟、脾臟、肺臟及腦組織都可以發(fā)現(xiàn)歸巢的細(xì)胞存活；而任何時(shí)間在小鼠的心臟以及腎臟均未能檢測(cè)到歸巢細(xì)胞。并且所有實(shí)驗(yàn)小鼠生長(zhǎng)良好,無(wú)明顯的體重降低,及其他豎毛、抓狂、癲癇等不良反應(yīng)。 第三部分：第三代人羊膜干細(xì)胞靜脈移植APP轉(zhuǎn)基因鼠模型后31d,通過(guò)免疫組化技術(shù),對(duì)第三代的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠的腦組織中的分化功能進(jìn)行研究,探討可能的疾病治療機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠腦組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)明顯增多,神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)祖細(xì)胞以及神經(jīng)元細(xì)胞也明顯增加,并且沒(méi)有致瘤現(xiàn)象,小鼠肝腎功能正常。表明人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞尾靜脈移植對(duì)治療轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠有積極的治療效果,安全可行。 本研究首次采用人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞以靜脈途徑移植觀察第三代人羊膜干細(xì)胞在阿爾茨海默氏癥轉(zhuǎn)基因鼠模型體內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的遷移情況,并研究人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植31d后,在小鼠腦組織中的分化以及發(fā)揮的生物學(xué)功能。本研究結(jié)果將為今后的臨床實(shí)驗(yàn)提供理論基礎(chǔ)和直接證據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16
【圖文】：

第一部分:人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)代，倒置顯微鏡下鏡檢，·選取那些細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)旺盛(圖2)，形態(tài)保持較好，梭形明顯的細(xì)胞(圖ir)，胰蛋白酶消化后，離心，洗滌，收集備用。2.結(jié)果2.1人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞原代細(xì)胞的體外分離采用本課題組〔，·5，體外分離獲取人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，每份胎盤(pán)標(biāo)本可以獲取約 (3~7.5)x10e人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，分3個(gè)75ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)(圖la)。細(xì)胞48h內(nèi)開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，但分布不均勻(圖lb)。圖2第三代人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)2.2人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)8d左右，細(xì)胞在培養(yǎng)瓶底不均勻鋪滿(mǎn)(圖1。)

鑷夾著心尖小心提起，暴露小鼠心臟動(dòng)脈，用輸液器針頭小心穿過(guò)小鼠心臟，并延伸進(jìn)入心臟動(dòng)脈，用手術(shù)縫合線(xiàn)扎緊，然后在小鼠心臟上剪口，用含有肝素的生理鹽水進(jìn)行灌注(如圖3所示)。灌注結(jié)束后，分取各實(shí)驗(yàn)鼠腦組織，一20℃避光保存。;對(duì)才飛」…君.圖3小鼠心臟灌注

每張切片選取5個(gè)不同視野，采用加量分析，計(jì)算陽(yáng)性區(qū)面積百分比。0處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用x士s表示水準(zhǔn)。=0.05質(zhì)干細(xì)胞的Brdu標(biāo)記鑒定果，可見(jiàn)，移植組小鼠腦組織中大部分細(xì)染成棕色或褐色，Brdu呈陽(yáng)性，表明有B遷移進(jìn)入小鼠的腦組織中(圖5)。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2786148