【摘要】： 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease AD),俗稱老年性癡呆(senile dementia),是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性退行性變性疾病。發(fā)現(xiàn)至今,研究者一直沒有停止對阿爾茨海默病的病因和發(fā)病機理的研究,但對于這一疾病的治療至今還沒有突破性的進展。隨著細胞工程的迅速發(fā)展,干細胞移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究為治療AD開辟了新天地。 人羊膜間充質干細胞(aminiotic membrane derived human mesenchymal stem cells, Ad-hMSCs)是近些年分離培養(yǎng)的多潛能干細胞。本實驗深入探索靜脈移植人第三代羊膜間充質干細胞在阿爾茨海默氏癥轉基因鼠體內(nèi)的遷移存活,以及在腦部的歸巢和疾病治療的機制。 本論文共分為三部分。第一部分：人羊膜間充質干細胞的體外分離培養(yǎng)；第二部分：第三代人羊膜間充質干細胞靜脈移植在轉基因阿爾茨海默癥小鼠體內(nèi)的遷移及存活；第三部分：第三代人羊膜間充質干細胞靜脈移植在轉基因阿爾茨海默癥小鼠腦部的歸巢以及疾病治療機制研究。 第一部分：從胎盤分離出人羊膜間充質干細胞,體外培養(yǎng)擴增,傳至第三代,選擇形態(tài)保持良好,生長旺盛的細胞做后續(xù)實驗。 第二部分：采用原代培養(yǎng)后傳至第三代的人羊膜間充質干細胞進行轉基因阿爾茨海默病小鼠的尾靜脈移植,調(diào)整細胞濃度為1×106個／ml,注射量0.5 ml/只。采用組織冰凍切片,熒光顯微鏡觀察人羊膜間充質干細胞移植后,不同時間點在轉基因阿爾茨海默癥小鼠體內(nèi)心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟及腦部的遷移情況。結果發(fā)現(xiàn)移植第三代的人羊膜間充質干細胞后,在不同的時間的小鼠的肝臟、脾臟、肺臟及腦組織都可以發(fā)現(xiàn)歸巢的細胞存活；而任何時間在小鼠的心臟以及腎臟均未能檢測到歸巢細胞。并且所有實驗小鼠生長良好,無明顯的體重降低,及其他豎毛、抓狂、癲癇等不良反應。 第三部分：第三代人羊膜干細胞靜脈移植APP轉基因鼠模型后31d,通過免疫組化技術,對第三代的人羊膜間充質干細胞在轉基因阿爾茨海默病小鼠的腦組織中的分化功能進行研究,探討可能的疾病治療機制。結果發(fā)現(xiàn)小鼠腦組織中星形膠質細胞表達明顯增多,神經(jīng)干細胞、神經(jīng)祖細胞以及神經(jīng)元細胞也明顯增加,并且沒有致瘤現(xiàn)象,小鼠肝腎功能正常。表明人羊膜間充質干細胞尾靜脈移植對治療轉基因阿爾茨海默病小鼠有積極的治療效果,安全可行。 本研究首次采用人羊膜間充質干細胞以靜脈途徑移植觀察第三代人羊膜干細胞在阿爾茨海默氏癥轉基因鼠模型體內(nèi)不同時間點的遷移情況,并研究人羊膜間充質干細胞移植31d后,在小鼠腦組織中的分化以及發(fā)揮的生物學功能。本研究結果將為今后的臨床實驗提供理論基礎和直接證據(jù)。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R749.16
【圖文】：

第一部分:人羊膜間充質干細胞的體外分離培養(yǎng)代，倒置顯微鏡下鏡檢，·選取那些細胞生長狀態(tài)旺盛(圖2)，形態(tài)保持較好，梭形明顯的細胞(圖ir)，胰蛋白酶消化后，離心，洗滌，收集備用。2.結果2.1人羊膜間充質干細胞原代細胞的體外分離采用本課題組〔，·5，體外分離獲取人羊膜間充質干細胞的方法，每份胎盤標本可以獲取約 (3~7.5)x10e人羊膜間充質干細胞，分3個75ml細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)(圖la)。細胞48h內(nèi)開始貼壁生長，但分布不均勻(圖lb)。圖2第三代人羊膜間充質干細胞的生長曲線2.2人羊膜間充質干細胞體外增殖人羊膜間充質干細胞培養(yǎng)8d左右，細胞在培養(yǎng)瓶底不均勻鋪滿(圖1。)

鑷夾著心尖小心提起，暴露小鼠心臟動脈，用輸液器針頭小心穿過小鼠心臟，并延伸進入心臟動脈，用手術縫合線扎緊，然后在小鼠心臟上剪口，用含有肝素的生理鹽水進行灌注(如圖3所示)。灌注結束后，分取各實驗鼠腦組織，一20℃避光保存。;對才飛」…君.圖3小鼠心臟灌注

每張切片選取5個不同視野，采用加量分析，計算陽性區(qū)面積百分比。0處理數(shù)據(jù)，計量資料數(shù)據(jù)采用x士s表示水準。=0.05質干細胞的Brdu標記鑒定果，可見，移植組小鼠腦組織中大部分細染成棕色或褐色，Brdu呈陽性，表明有B遷移進入小鼠的腦組織中(圖5)。

【參考文獻】

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本文編號：2786148