【摘要】：目的：探索化合物9714對(duì)老年癡呆的作用機(jī)制，確定其具體的作用靶點(diǎn)，從細(xì)胞水平對(duì)9714作用的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑進(jìn)行研究。 方法：首先用東莨菪堿建立老年癡呆的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�，分別設(shè)立空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、喜得鎮(zhèn)組(1.0mg/kg)、尼莫地平組(20mg/kg)、9714小劑量組(15mg/kg)、9714中劑量組(30mg/kg)、9714大劑量組(60mg/kg)七組實(shí)驗(yàn)小鼠，用跳臺(tái)試驗(yàn)和水迷宮試驗(yàn)確定9714對(duì)老年癡呆的影響作用；其次分別提取七組實(shí)驗(yàn)小鼠的海馬及大腦皮質(zhì)蛋白，用Western-Blotting方法測(cè)定M型及N型乙酰膽堿受體蛋白表達(dá)情況，確定9714對(duì)M、N型乙酰膽堿受體表達(dá)的影響；最后，培養(yǎng)SHSY5Y、SK-N-SH、PC12三種類神經(jīng)細(xì)胞，分別用不同濃度的9714、人參皂甙Rgl、Rbl、Re處理，比較9714與人參皂甙的作用效果，確定9714最適作用濃度；提取處理后類神經(jīng)細(xì)胞的蛋白，用Western-Blotting方法測(cè)定類神經(jīng)細(xì)胞M型及N型乙酰膽堿受體蛋白表達(dá)情況，初步確定9714對(duì)類神經(jīng)細(xì)胞SHSY5Y、SK-N-SH、PC12細(xì)胞的M、N型乙酰膽堿受體表達(dá)的作用。 結(jié)果：1．化合物9714的15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg三個(gè)劑量組均能不同程度地改變東莨菪堿所致記憶獲得障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。在一次性被動(dòng)回避反應(yīng)的學(xué)習(xí)能力測(cè)試中，9714大劑量可以縮短反應(yīng)期、延長(zhǎng)潛伏期：在一次性被動(dòng)回避反應(yīng)的記憶能力測(cè)試中，9714中劑量及大劑量均能明顯地延長(zhǎng)潛伏期、縮短停留時(shí)間、減少錯(cuò)誤次數(shù)；在水迷宮試驗(yàn)的學(xué)習(xí)能力測(cè)試中，9714的三劑量組均能明顯縮短模型小鼠B、C點(diǎn)到達(dá)時(shí)間、減少錯(cuò)誤次數(shù)；在水迷宮試驗(yàn)的記憶能力測(cè)試中，9714的中劑量組和大劑量組均能明顯地縮短B、C兩點(diǎn)到達(dá)時(shí)間、減少錯(cuò)誤次數(shù)。 2．海馬中：M_1受體模型組較空白對(duì)照組表達(dá)量明顯下調(diào)，陽(yáng)性對(duì)照藥喜得鎮(zhèn)組及尼莫地平組M_1受體表達(dá)量較模型對(duì)照組略升高，9714劑量組M_1受體表達(dá)量較模型對(duì)照組顯著升高，并有顯著的劑量相關(guān)效應(yīng)；α4受體陽(yáng)性對(duì)照藥喜得鎮(zhèn)組及尼莫地平組同9714劑量組蛋白表達(dá)量基本相近，且均高于模型對(duì)照組； Q7受體表達(dá)在模型對(duì)照組同空白組相比有明顯降低，在喜得鎮(zhèn)組同模型對(duì)照組 比較無(wú)明顯差異，尼莫地平組和9714組較模型對(duì)照組a7受體表達(dá)量有提高 (尸很口習(xí)，但以9714組對(duì)Q7受體表達(dá)量提高最為顯著，且存在明顯劑量效應(yīng); 海馬中Ap受體表達(dá)量在模型組同空白組無(wú)明顯差異，在各試驗(yàn)組中差別也不明 顯。皮質(zhì)中:a4受體含量在喜得鎮(zhèn)組及尼莫地平組、9714小劑量組中同模型對(duì) 照組相比沒(méi)有明顯改變，9714中、大劑量組較模型對(duì)照組相比有顯著升高 (尸石嘆必);a7受體表達(dá)量在喜得鎮(zhèn)組及尼莫地平組、9714小劑量組中均較模型 對(duì)照組相比沒(méi)有差異，9714中、大劑量組較模型對(duì)照組相比有顯著升高(尸石嘆口友、 尸0.01);Ml受體表達(dá)量在陽(yáng)性對(duì)照藥喜得鎮(zhèn)組同模型對(duì)照組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義，在尼莫地他、9714小劑量組中均較模型對(duì)照組.相比有提高(P0.’如，9714 中、大劑量組中較模型對(duì)照組相比有顯著升高(尸似01);Ap受體在尼莫地平組、 9714各劑量組中表達(dá)量均較模型對(duì)照組相比有降低(尸石嘆街)，其中在尼莫地平 組、9714大劑量組降低更明顯(尸石嘆01)。- 3.各類神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)9714處理48h后鏡下觀察，可見(jiàn)組間細(xì)胞形態(tài)略有改變: 胞體顯著增大，突起增粗、延長(zhǎng)，形成稠密網(wǎng)絡(luò)，細(xì)胞數(shù)量明顯增多，細(xì)胞透光 性增強(qiáng)，細(xì)胞活性增強(qiáng)，·且繁殖速度增快。9714組對(duì)類神經(jīng)細(xì)胞有效濃度作用 強(qiáng)度順序依次為:80咖4 ouM20咖，且以sK.N一sH細(xì)胞對(duì)9714最為敏感， sHsYSY、Pc12細(xì)胞次之.。一丫. sHsYSY細(xì)胞用5%血清培養(yǎng)、9714處理48h后，’同對(duì)照組細(xì)胞(5%血清 培養(yǎng))比較，9714 10uM、20uM組有顯著差異，表現(xiàn)為:’細(xì)胞數(shù)量明顯增加， 細(xì)胞突起明顯增多、增粗、延長(zhǎng)，細(xì)胞透光性增強(qiáng)，細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖狀態(tài)良好， 抵抗缺血清能力增強(qiáng)。 經(jīng)9714處理的類神經(jīng)細(xì)胞48h后做MTT試驗(yàn)，光吸收值結(jié)果顯示:9714 處理的·SHSYSY和 SK一SH細(xì)胞，與空白對(duì)照組相比9714濃度在2，suM，suM、 10咖碑OuM、40uM時(shí)光吸收值均有明顯升高(尸0.01)，且存在明顯劑量效應(yīng); 9714濃度在80uM時(shí)細(xì)胞光吸收值則明顯降低(p0.01)，細(xì)胞大量死亡。9714 處理的PC 12細(xì)胞，與空白對(duì)照組相比9714濃度在suM、louM、20uM、40uM、 80uM、100uM時(shí)光吸收值均有明顯升高，有顯著差異(尸0.01)，.且存在明顯 劑量效應(yīng)。.一 不同劑量的9714處理pC12細(xì)胞48h后a4、a7、M;受體Westem一B扣tti飛 結(jié)果顯示:。4、。7、M，受體表達(dá)量與空白對(duì)照組相比均有明豆提高，并有相關(guān) 劑量效應(yīng)。 結(jié)論:化合物9714小(15mg/kg)、中(3omg/kg)、大(60mg/kg)三個(gè)劑 量均能不同程度地改變東夏若堿所致記憶獲得障礙模型小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力; 能夠顯著提高海馬和皮質(zhì)中a4、a7、MI受體的表達(dá)，顯著下調(diào)皮質(zhì)中Ap受體 的表達(dá)�；衔�9714使SK一SH、SHSYSY、PC12三種類神經(jīng)細(xì)胞胞體顯著增 大，細(xì)胞數(shù)量明顯增多，突起增粗延長(zhǎng)、相互聯(lián)系緊密;MTT試驗(yàn)結(jié)果顯示9714 具有顯著的細(xì)胞保護(hù)、促增殖、改善細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、提高細(xì)胞活性的作用，9714 能夠上調(diào)PC12細(xì)胞a4、a7、M;受體的表達(dá)。化合物9714可能通過(guò)提
【學(xué)位授予單位】：河北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙紅衛(wèi),McGeerPL;神經(jīng)退行性變的免疫學(xué)機(jī)制[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);1997年02期

2 陳曉春,朱元貴,王小眾,朱理安,黃春;一氧化氮和caspase-3在多巴胺誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡中的作用[J];中國(guó)病理生理雜志;2001年10期

本文編號(hào)：2783264