【摘要】：目的：探索化合物9714對老年癡呆的作用機制，確定其具體的作用靶點，從細(xì)胞水平對9714作用的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑進(jìn)行研究。 方法：首先用東莨菪堿建立老年癡呆的實驗?zāi)Ｐ�，分別設(shè)立空白對照組、模型對照組、喜得鎮(zhèn)組(1.0mg/kg)、尼莫地平組(20mg/kg)、9714小劑量組(15mg/kg)、9714中劑量組(30mg/kg)、9714大劑量組(60mg/kg)七組實驗小鼠，用跳臺試驗和水迷宮試驗確定9714對老年癡呆的影響作用；其次分別提取七組實驗小鼠的海馬及大腦皮質(zhì)蛋白，用Western-Blotting方法測定M型及N型乙酰膽堿受體蛋白表達(dá)情況，確定9714對M、N型乙酰膽堿受體表達(dá)的影響；最后，培養(yǎng)SHSY5Y、SK-N-SH、PC12三種類神經(jīng)細(xì)胞，分別用不同濃度的9714、人參皂甙Rgl、Rbl、Re處理，比較9714與人參皂甙的作用效果，確定9714最適作用濃度；提取處理后類神經(jīng)細(xì)胞的蛋白，用Western-Blotting方法測定類神經(jīng)細(xì)胞M型及N型乙酰膽堿受體蛋白表達(dá)情況，初步確定9714對類神經(jīng)細(xì)胞SHSY5Y、SK-N-SH、PC12細(xì)胞的M、N型乙酰膽堿受體表達(dá)的作用。 結(jié)果：1．化合物9714的15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg三個劑量組均能不同程度地改變東莨菪堿所致記憶獲得障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。在一次性被動回避反應(yīng)的學(xué)習(xí)能力測試中，9714大劑量可以縮短反應(yīng)期、延長潛伏期：在一次性被動回避反應(yīng)的記憶能力測試中，9714中劑量及大劑量均能明顯地延長潛伏期、縮短停留時間、減少錯誤次數(shù)；在水迷宮試驗的學(xué)習(xí)能力測試中，9714的三劑量組均能明顯縮短模型小鼠B、C點到達(dá)時間、減少錯誤次數(shù)；在水迷宮試驗的記憶能力測試中，9714的中劑量組和大劑量組均能明顯地縮短B、C兩點到達(dá)時間、減少錯誤次數(shù)。 2．海馬中：M_1受體模型組較空白對照組表達(dá)量明顯下調(diào)，陽性對照藥喜得鎮(zhèn)組及尼莫地平組M_1受體表達(dá)量較模型對照組略升高，9714劑量組M_1受體表達(dá)量較模型對照組顯著升高，并有顯著的劑量相關(guān)效應(yīng)；α4受體陽性對照藥喜得鎮(zhèn)組及尼莫地平組同9714劑量組蛋白表達(dá)量基本相近，且均高于模型對照組； Q7受體表達(dá)在模型對照組同空白組相比有明顯降低，在喜得鎮(zhèn)組同模型對照組 比較無明顯差異，尼莫地平組和9714組較模型對照組a7受體表達(dá)量有提高 (尸很口習(xí)，但以9714組對Q7受體表達(dá)量提高最為顯著，且存在明顯劑量效應(yīng); 海馬中Ap受體表達(dá)量在模型組同空白組無明顯差異，在各試驗組中差別也不明 顯。皮質(zhì)中:a4受體含量在喜得鎮(zhèn)組及尼莫地平組、9714小劑量組中同模型對 照組相比沒有明顯改變，9714中、大劑量組較模型對照組相比有顯著升高 (尸石嘆必);a7受體表達(dá)量在喜得鎮(zhèn)組及尼莫地平組、9714小劑量組中均較模型 對照組相比沒有差異，9714中、大劑量組較模型對照組相比有顯著升高(尸石嘆口友、 尸0.01);Ml受體表達(dá)量在陽性對照藥喜得鎮(zhèn)組同模型對照組相比沒有統(tǒng)計學(xué)意 義，在尼莫地他、9714小劑量組中均較模型對照組.相比有提高(P0.’如，9714 中、大劑量組中較模型對照組相比有顯著升高(尸似01);Ap受體在尼莫地平組、 9714各劑量組中表達(dá)量均較模型對照組相比有降低(尸石嘆街)，其中在尼莫地平 組、9714大劑量組降低更明顯(尸石嘆01)。- 3.各類神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)9714處理48h后鏡下觀察，可見組間細(xì)胞形態(tài)略有改變: 胞體顯著增大，突起增粗、延長，形成稠密網(wǎng)絡(luò)，細(xì)胞數(shù)量明顯增多，細(xì)胞透光 性增強，細(xì)胞活性增強，·且繁殖速度增快。9714組對類神經(jīng)細(xì)胞有效濃度作用 強度順序依次為:80咖4 ouM20咖，且以sK.N一sH細(xì)胞對9714最為敏感， sHsYSY、Pc12細(xì)胞次之.。一丫. sHsYSY細(xì)胞用5%血清培養(yǎng)、9714處理48h后，’同對照組細(xì)胞(5%血清 培養(yǎng))比較，9714 10uM、20uM組有顯著差異，表現(xiàn)為:’細(xì)胞數(shù)量明顯增加， 細(xì)胞突起明顯增多、增粗、延長，細(xì)胞透光性增強，細(xì)胞生長、增殖狀態(tài)良好， 抵抗缺血清能力增強。 經(jīng)9714處理的類神經(jīng)細(xì)胞48h后做MTT試驗，光吸收值結(jié)果顯示:9714 處理的·SHSYSY和 SK一SH細(xì)胞，與空白對照組相比9714濃度在2，suM，suM、 10咖碑OuM、40uM時光吸收值均有明顯升高(尸0.01)，且存在明顯劑量效應(yīng); 9714濃度在80uM時細(xì)胞光吸收值則明顯降低(p0.01)，細(xì)胞大量死亡。9714 處理的PC 12細(xì)胞，與空白對照組相比9714濃度在suM、louM、20uM、40uM、 80uM、100uM時光吸收值均有明顯升高，有顯著差異(尸0.01)，.且存在明顯 劑量效應(yīng)。.一 不同劑量的9714處理pC12細(xì)胞48h后a4、a7、M;受體Westem一B扣tti飛 結(jié)果顯示:。4、。7、M，受體表達(dá)量與空白對照組相比均有明豆提高，并有相關(guān) 劑量效應(yīng)。 結(jié)論:化合物9714小(15mg/kg)、中(3omg/kg)、大(60mg/kg)三個劑 量均能不同程度地改變東夏若堿所致記憶獲得障礙模型小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力; 能夠顯著提高海馬和皮質(zhì)中a4、a7、MI受體的表達(dá)，顯著下調(diào)皮質(zhì)中Ap受體 的表達(dá)�；衔�9714使SK一SH、SHSYSY、PC12三種類神經(jīng)細(xì)胞胞體顯著增 大，細(xì)胞數(shù)量明顯增多，突起增粗延長、相互聯(lián)系緊密;MTT試驗結(jié)果顯示9714 具有顯著的細(xì)胞保護、促增殖、改善細(xì)胞生長狀態(tài)、提高細(xì)胞活性的作用，9714 能夠上調(diào)PC12細(xì)胞a4、a7、M;受體的表達(dá)�；衔�9714可能通過提
【學(xué)位授予單位】：河北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙紅衛(wèi),McGeerPL;神經(jīng)退行性變的免疫學(xué)機制[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊;1997年02期

2 陳曉春,朱元貴,王小眾,朱理安,黃春;一氧化氮和caspase-3在多巴胺誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡中的作用[J];中國病理生理雜志;2001年10期

本文編號：2783264