【摘要】：目的:研究丁苯酞對Aβ_(25-35)誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)的影響及可能機制。方法:培養(yǎng)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞,將其分為空白對照組(Control)、模型組(Model)、丁苯酞組(NBP)和丁苯酞聯(lián)合自噬抑制劑6-氨基-3-甲基嘌呤組(3-MA)。采用CCK-8法檢測丁苯酞和Aβ_(25-35)對BV2小膠質(zhì)細(xì)胞活力的影響,Western blot檢測各組細(xì)胞自噬蛋白LC3B-Ⅱ和p62的表達情況,Real-time PCR檢測自噬基因ATG5、Beclin1和炎性指標(biāo)IL-1β、IL-6 mRNA的表達水平。結(jié)果:Aβ_(25-35)濃度≥20?mol/L時對細(xì)胞生存率具有顯著損傷作用,丁苯酞濃度≤40?mol/L細(xì)胞活力與未處理細(xì)胞基本無差異。Model組的炎性指標(biāo)IL-1β、IL-6的mRNA表達量相較Control組明顯上調(diào)(P0.05)。與Model組相比,NBP組的IL-1β、IL-6 mRNA表達量顯著降低,ATG5、Beclin1 mRNA和LC3B-Ⅱ蛋白表達上調(diào),p62蛋白明顯減少(P0.05)。3-MA組與NBP組相比,IL-1β、IL-6mRNA表達增加,ATG5、Beclin1 mRNA和LC3B-Ⅱ蛋白表達降低,p62蛋白表達增加(P0.05)。結(jié)論:Aβ_(25-35)處理BV2小膠質(zhì)細(xì)胞后相關(guān)促炎因子顯著表達,說明Aβ_(25-35)是小膠質(zhì)細(xì)胞活化的誘發(fā)因素。丁苯酞能夠降低Aβ_(25-35)誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)水平,亦可上調(diào)自噬相關(guān)基因和蛋白的表達,并且自噬效應(yīng)受到抑制時促炎因子的表達量明顯增加,說明丁苯酞可通過誘導(dǎo)自噬下調(diào)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)水平進而發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R749.16
【圖文】：

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果和 Aβ25-35對 BV2 小膠質(zhì)細(xì)胞活力的影響CK-8 法檢測 NBP 和 Aβ25-35對 BV2 小膠質(zhì)細(xì)胞生存率的次設(shè)為 0 mol/L、10 mol/L、20 mol/L、40 mol/L、60 m是 0 mol/L、10 mol/L、20 mol/L、40 mol/L。研究發(fā) 時，細(xì)胞活力無明顯變化，因此本實驗選取 40 mol/L 作圖 1a）。Aβ25-35濃度為 10 mol/L 時細(xì)胞輕微受損，但不度的增加細(xì)胞損傷越來越重，本實驗將 20 mol/L 定為細(xì)（圖 1b）。

圖 1b 梯度濃度的 Aβ25-35對 BV2 小膠質(zhì)細(xì)胞存活率的影響*vs 0 mol/L P＜0.05ern Blot 檢測 NBP 對 BV2 小膠質(zhì)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白顯示，與 Model 組相比，NBP 組自噬蛋白 LC3B-Ⅱ表達量量減少，自噬水平上調(diào)。給予自噬抑制劑 3-MA 聯(lián)合處理后LC3B-Ⅱ蛋白水平比 NBP 組明顯降低，同時 p62 蛋白水平顯有統(tǒng)計學(xué)意義（圖 2）。

圖 1b 梯度濃度的 Aβ25-35對 BV2 小膠質(zhì)細(xì)胞存活率的影響*vs 0 mol/L P＜0.05stern Blot 檢測 NBP 對 BV2 小膠質(zhì)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的顯示，與 Model 組相比，NBP 組自噬蛋白 LC3B-Ⅱ表達量增量減少，自噬水平上調(diào)。給予自噬抑制劑 3-MA 聯(lián)合處理后檢 LC3B-Ⅱ蛋白水平比 NBP 組明顯降低，同時 p62 蛋白水平顯有統(tǒng)計學(xué)意義（圖 2）。

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