【摘要】：抑郁癥尤其是難治性抑郁癥的研究是目前世界上最具有挑戰(zhàn)性的課題之一。抑郁癥是一種慢性、反復發(fā)作性疾病,以持續(xù)性情緒低落為主要臨床特征,包括對生活毫無興趣、快感缺乏、注意力不集中、記憶力下降、思維遲緩、食欲睡眠障礙以及反復的自殺念頭等。目前,我國抑郁癥的發(fā)病率為29%～35%,世界范圍內(nèi)有超過10%的人正經(jīng)受著“抑郁”的煎熬,預計到2020年抑郁癥將成為繼冠心病之后的世界第二大疾病。目前臨床常用抗抑郁藥物幾乎均靶向增強腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)如5-羥色胺(5-HT)和去甲腎上腺素(NE)功能,大約60%的病人在長期治療后可以得到緩解,另有超過30%治療無效或者收效甚微,這部分病人臨床稱之為難治性抑郁癥。目前針對難治性抑郁的治療策略包括增加原有抗抑郁藥的劑量和療程、聯(lián)合應用或者換用其它種類抗抑郁藥物、聯(lián)合使用抗抑郁藥物增效劑如鋰劑等以及合并使用非藥物治療的手段如心理治療、電休克療法等,雖然數(shù)據(jù)顯示電休克療法(ECT)對難治性抑郁癥患者療效確切,但是需要反復刺激以保持療效,同時還伴有明顯的記憶缺失,這都限制了ECT作為長期抗抑郁治療的手段。藥物難治性抑郁不僅影響了患者的生活質(zhì)量,同時也明顯增加了糖尿病、心腦血管等慢性疾病的發(fā)病率,重要的是,藥物難治性抑郁成為自殺的重要原因。因此,探討難治性抑郁的發(fā)生機制成為目前亟待解決的課題。 炎性激活作為抑郁癥尤其難治性抑郁癥的可能發(fā)病機制的假說日益受到人們的關注。臨床難治性抑郁癥患者外周血檢測發(fā)現(xiàn)IL-1β、IL-6等炎癥因子的濃度明顯高于治療有效者,而伴有外周炎癥因子高表達的抑郁癥患者其抗抑郁治療效果往往不佳。為更深入的探討炎癥反應在難治性抑郁癥發(fā)生發(fā)展中的可能作用,本研究通過應用慢性不可預見性溫和刺激建立抑郁模型,綜合運用現(xiàn)代神經(jīng)生物學研究手段,序貫性展開以下四部分研究。期望通過本研究的完成,1.為臨床上難治性抑郁的診斷提供了一個生物標志物IL-1β; 2.為臨床上難治性抑郁的治療提供了一個新的治療策略:阿司匹林聯(lián)用氟西汀;3.建立了一個新的藥物難治性抑郁的動物模型:LPS+CUMS,為篩選新的抗難治性抑郁藥物提供了實驗平臺。 1.炎性因子在氟西汀難治性抑郁大鼠高表達 研究表明:部分臨床難治性抑郁患者其外周炎癥因子IL-1β等表達明顯升高。那么,在動物模型上能否觀察到同樣的現(xiàn)象呢? 本實驗通過慢性不可預見性溫和刺激(Chronic Unpredictable Mild Stress, CUMS)建立大鼠抑郁模型,借助行為學分析技術篩選氟西汀治療效果不佳(難治性)抑郁大鼠,運用免疫組化、Western Blot以及ELISA等手段檢測外周及中樞IL-1β等炎性因子的表達。 結果如下: (1)通過慢性不可預見性溫和刺激成功制備大鼠抑郁模型。 (2)氟西汀能夠明顯改善70-80%的抑郁大鼠的行為學指標:糖水消耗量及糖水偏愛比值增加、強迫游泳不動時間明顯縮短、新奇環(huán)境中主動攝食行為增強。 (3)大約20-30%的抑郁大鼠,氟西汀治療效果不佳,即為難治性抑郁大鼠。 (4) ELISA試劑盒檢測氟西汀難治性抑郁大鼠外周血和腦內(nèi)海馬IL-1β水平明顯高于對照組以及氟西汀治療有效大鼠。 (5)氟西汀難治性抑郁大鼠腦內(nèi)海馬COX-2免疫組織化學染色和蛋白質(zhì)定量分析以及其誘導產(chǎn)物PGE2表達水平均明顯高于對照組和氟西汀治療有效大鼠。 以上結果提示:4周的氟西汀抗抑郁治療對大約20%的抑郁大鼠治療效果不佳,即為氟西汀難治性抑郁大鼠,與以往臨床試驗結果一致,我們的動物試驗也發(fā)現(xiàn)在難治性抑郁模型動物腦內(nèi)及外周均存在炎癥因子的表達增高。這些均提示:炎性因子持續(xù)激活可能與抗抑郁藥物治療效果不佳有一定關系;同時,IL-1β可能作為臨床上某些難治性抑郁的診斷的一個生物標志物。 2.阿司匹林輔助抗抑郁作用前一試驗結果提示在難治性抑郁大鼠腦內(nèi)及外周均存在顯著激活的炎性因子表達,腦內(nèi)海馬COX-2定性、定量分析以及COX-2誘導產(chǎn)物PGE2表達均升高,在本實驗中我們以實驗一篩選的氟西汀難治性抑郁大鼠為模型,觀察給予非甾體類抗炎藥物-阿司匹林輔助抗炎治療是否增強氟西汀抗抑郁治療的效果。 結果如下: (1)阿司匹林輔助抗抑郁治療能夠明顯改善氟西汀難治性抑郁大鼠行為學表現(xiàn)。 (2)阿司匹林輔助抗抑郁治療降低腦內(nèi)海馬COX-2和PGE2表達水平。 以上結果提示:在氟西汀難治性抑郁大鼠,阿司匹林具有輔助抗抑郁治療的作用,且這一作用可能和降低腦內(nèi)COX-2和PGE2的表達有關。本部分試驗進一步驗證炎癥反應是氟西汀抗抑郁治療效果不佳的可能原因之一;也為臨床上難治性抑郁的治療提供了一個新的治療策略:氟西汀+阿司匹林。 3.炎癥預處理影響氟西汀抗抑郁效果 在以上的試驗結果我們發(fā)現(xiàn):炎性因子在氟西汀難治性抑郁大鼠的腦內(nèi)及外周均高表達,而且輔助抗炎治療有效。這均提示炎癥在難治性抑郁的形成中發(fā)揮一定作用。臨床試驗中,外周炎癥因子表達增高的抑郁癥患者其臨床治療效果往往不佳,在本實驗中我們通過腹腔注射LPS誘導炎癥因子的高表達,進行炎癥預處理,觀察炎癥反應對氟西汀的抗抑郁作用的影響。 結果提示: (1) LPS(100μg/kg)腹腔注射引起外周IL-1β水平明顯增加而沒有引起明顯的行為學的改變。 (2)強迫游泳試驗,氟西汀明顯縮短大鼠強迫游泳不動時間,急性給予LPS不影響氟西汀作用。 (3)慢性給予LPS改良慢性不可預見性溫和刺激模型,氟西汀的抗抑郁效果明顯減弱。 (4) LPS炎癥預處理CUMS抑郁模型,阿司匹林輔助增強氟西汀的抗抑郁治療效果。 以上結果提示:慢性炎癥反應影響氟西汀的抗抑郁治療效果;同時,建立了一個新的藥物難治性抑郁的動物模型:LPS+CUMS,為篩選新的抗難治性抑郁藥物提供了實驗平臺。 4.可能機制的探討 有研究顯示:氟西汀的抗抑郁作用可能和其促進海馬新生細胞的增殖有關。而實驗三中我們也發(fā)現(xiàn)只有慢性炎癥反應才會影響氟西汀的抗抑郁作用,那么我們考慮是否炎癥反應通過干預氟西汀的促神經(jīng)發(fā)生作用而影響其抗抑郁效果的呢?在本實驗中,我們以BrdU腹腔注射標記新生細胞,觀察炎癥對氟西汀促新生細胞增殖、分化的影響。 結果提示: (1) CUMS抑郁大鼠海馬新生細胞數(shù)量明顯下降 (2)氟西汀治療有效后新生細胞數(shù)量增加。 (3)氟西汀難治性抑郁大鼠海馬新生細胞的數(shù)量明顯少于對照組和氟西汀治療有效組。 (4)阿司匹林輔助抗抑郁治療后氟西汀難治性抑郁大鼠海馬新生細胞的數(shù)量明顯增加。 (5)炎癥預處理本身對新生細胞的增殖影響不大,也沒有明顯干預CUMS對新生細胞的作用,但卻顯著影響了氟西汀對新生細胞的促增殖的作用。 (6)新生細胞的神經(jīng)元分化比率,各組之間無差別。 以上結果提示:慢性炎癥反應可能通過干預氟西汀的促神經(jīng)發(fā)生作用而影響其抗抑郁效果。 綜上所述:通過慢性不可預見性溫和刺激模型篩選氟西汀難治性抑郁大鼠,發(fā)現(xiàn)其外周血和腦內(nèi)炎癥因子高表達,說明炎癥反應可能參與了難治性抑郁的發(fā)生過程。而后給予阿司匹林輔助氟西汀抗抑郁治療有效更進一步說明炎癥因子表達與抗抑郁治療效果關系密切。最后LPS炎癥預處理明顯影響氟西汀的抗抑郁治療的效果,且這一作用可能與炎癥影響氟西汀的促神經(jīng)發(fā)生有關。這一部分試驗從另一個角度闡述了炎癥與難治性抑郁發(fā)生發(fā)展的關系,同時LPS炎癥預處理改良經(jīng)典慢性不可預見性溫和刺激模型為篩選新的抗難治性抑郁藥物提供了實驗平臺。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R749.4
【圖文】：

圖 1. CUMS 和氟西汀抗抑郁治療對大鼠體重和進食量的影響A，體重，B，日攝食量。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001 與對照組相比。

-47-圖 2. 4 周氟西汀抗抑郁對抑郁大鼠行為學指標的影響A，大鼠基礎糖水偏愛指數(shù)和 4 周刺激及氟西汀治療后的糖水偏愛值，B，強迫游泳試驗各組大鼠不動時間，C，D, E,各組大鼠在新奇抑制攝食試驗中的表現(xiàn)：C，在新奇環(huán)境中大鼠到光亮中心的主動取食時間，D，返回自己籠中后開始進食的時間，E，返回籠中后 15min 內(nèi)大鼠取食的鼠糧的質(zhì)量。*P<0.05，**P<0.01 與對照組相比，#P<0.05，##P<0.01 與氟西汀治療有效大鼠相比。

-48-圖 3. 抑郁大鼠氟西汀治療后海馬齒狀回 COX-2 標記陽性細胞。A，對照組，B，抑郁模型組（CUMS），C，氟西汀治療有效組 FLX（+）, D，氟西汀治療無效組 FLX(-)。E，Western blot COX-2 蛋白統(tǒng)計分析結果，示抑郁大鼠海馬 COX-2 表達明顯升高（P<0.01）氟西汀治療有效后明顯下降，而氟西汀治療無效大鼠 COX-2 表達明顯高于氟西汀治療有效（P<0.01）。F，海馬 PGE2 濃度，結果提示：CUMS 大鼠海馬 PGE2 濃度明顯高于對照組（P<0.05）,氟西汀治療有效后基本恢復正常水平。標尺：100μm。*P<0.05，**P<0.01 與對照組相比，#P<0.05，##P<0.01 與氟西汀治療有效大鼠相比。

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