【摘要】：VPS34(Vacuolar protein-sorting 34)在自噬和內(nèi)體轉(zhuǎn)運中發(fā)揮了重要的作用。在AD患者腦組織及其病理模型鼠APP/PS1小鼠腦組織中,VPS34激酶活性降低,并且VPS34會影響APP內(nèi)吞轉(zhuǎn)運。提示VPS34與AD發(fā)病機(jī)制有關(guān)。我們推測VPS34泛素化會改變其蛋白水平。但是,我們研究發(fā)現(xiàn)VPS34泛素化并不影響其蛋白水平。使用泛素野生型質(zhì)粒及其各位點突變質(zhì)粒與VPS34瞬時共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)VPS34可以發(fā)生各種類型的多聚泛素化修飾。泛素野生型及各突變位點質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK393細(xì)胞,內(nèi)源性VPS34蛋白水平?jīng)]有改變。并且,我們發(fā)現(xiàn)VPS34既可以通過蛋白酶體也可以溶酶體途徑降解,使用蛋白酶體抑制劑MG132或溶酶體抑制劑氯喹的干預(yù)下,VPS34蛋白水平在12和18小時沒有改變,但在24小時明顯升高,表明VPS34在18小時內(nèi)相對穩(wěn)定。在6、12月齡APP/PS1小鼠腦組織中,Vps34蛋白水平保持不變,但是VPS34的泛素化水平明顯降低,表明VPS34的泛素化和蛋白水平的改變在APP/PS1小鼠中不一致。這些結(jié)果表明VPS34泛素化修飾不改變其蛋白水平。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R749.16
【圖文】：

⑹ 取上述 DNA 模板，配置反應(yīng)體系，跑 PCR，PCR 程序為 95℃ 5min，95℃15S 60℃ 15S 72℃ 20 S，72℃ 10min，PCR 體系為：Taq mix 2* 10ul滅菌雙蒸水 6 ul引物 F/R 2ul鼠尾 DNA 2ul⑺ 配置 1.5%瓊脂糖膠：0.5* TBE 100ml瓊脂糖 1.5ggoldview 5ul入微波爐高火 2min，取出，待溫度降至 60-70℃左右倒入制膠模具。⑻ 上樣，按順序加入 100bp DNA maker，PCR 產(chǎn)物。電泳 120 V，30min。于Fusion 成像顯影，350bp 與 608bp 均有條帶即為 APP/PS1 雙轉(zhuǎn)小鼠。

圖 1 泛素化修飾不改變 VPS34 蛋白水平Figure1 Ubiquitnation does not alter Vps34 protein levels(A) Representative Western blots of HA-tagged ubiquitin (top) and Flag-tagged VPS34 (bottn HEK293 cells co-transfected with VPS34 and ubiquitin constructs WT, K0, K6, K11, K29, K48 and K63, respectively.After 44 h of transfection, cells were treated with MG132 (20 M) for efore harvest. (B) Representative Western blots of HA-tagged ubiquitin (top) and Flag-taggPS34 (bottom) in cell extracts immunoprecipitated by Flag-Vps34 antibody. Samples were takrom A. (C) Representative Western blots of ubiquitin (HA-tag) in HEK293 cells transienxpressing vector, or ubiquitin constructs WT, K0, K6, K11,K27,K29, K33, K48 and Kespectively. Cells were treated with MG132 (20 M) for 4 h before sample was harvested. (epresentative Western blots (top) and quantification (bottom) of endogenous Vps34 in sampaking from C.

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 裴培;成翕悅;王蕾;林燁;王珊;張霆;;組蛋白的類泛素化修飾與發(fā)育調(diào)控研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2016年35期

2 鄭慶偉;;呂東平研究組在細(xì)菌中實現(xiàn)植物泛素化途徑的重建[J];農(nóng)藥市場信息;2017年15期

3 劉文斌;;去泛素化酶研究進(jìn)展[J];武漢輕工大學(xué)學(xué)報;2016年03期

4 艾永興;趙程程;鄭海南;吳山力;張玉靜;;病毒編碼的泛素化酶與去泛素化酶的研究進(jìn)展[J];畜牧與獸醫(yī);2012年S1期

5 王春梅;李楠;;USP10通過去泛素化P53調(diào)控P53的定位和穩(wěn)定性[J];中國腫瘤生物治療雜志;2010年03期

6 周蕊,余澤華;泛素化途徑與細(xì)胞周期的關(guān)系[J];生命科學(xué);2003年03期

7 趙佳楠;陳嘉婧;楊世平;張子丁;;小鼠蛋白質(zhì)泛素化位點的預(yù)測及分析[J];中國科技論文;2017年06期

8 劉石娟;秦宗燕;王雪;顏梅;張靜;梁超超;;植物去泛素化酶研究進(jìn)展[J];植物生理學(xué)報;2016年08期

9 唐時s

本文編號：2736644