【摘要】：研究背景人腦組織庫(kù)在收集、儲(chǔ)存腦組織的同時(shí)能夠向研究者提供腦組織,使研究者能直接使用患有阿爾茲海默病(Alzheimer's disease,AD)和帕金森病(Parkinson's disease,PD)等神經(jīng)退行性病變的腦組織與健康人腦組織進(jìn)行基因轉(zhuǎn)錄相關(guān)研究,探尋能影響這些神經(jīng)退行性疾病的基因。在使用RT-qPCR研究基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的過(guò)程中,需要選擇合適的內(nèi)參基因來(lái)定量靶向基因的表達(dá)情況,由于相同的內(nèi)參基因在不同條件下的樣本中可能存在較大的轉(zhuǎn)錄差異,因此選擇在不同條件下表達(dá)量都較為穩(wěn)定的內(nèi)參基因,能更加精準(zhǔn)的定量靶向基因在不同樣本間的表達(dá)情況。研究目的本次研究通過(guò)比對(duì)不同條件下額葉組織中七個(gè)常用的內(nèi)參基因(18s ACTB,CYC1,GAPDH,HPRT1,UBC和TBP)的表達(dá)量和穩(wěn)定性之間的差異,探索影響腦組織樣本mRNA表達(dá)量的因素和選擇用于腦組織轉(zhuǎn)錄分析的合適內(nèi)參基因。研究方法本次研究將中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院人腦組織庫(kù)收集的163例腦組織按照不同的遺體捐獻(xiàn)者年齡(Age of donors),取材延誤時(shí)間(Postmortem interval,PMI),樣本保存時(shí)間(Storage time,ST)和遺體捐獻(xiàn)者的疾病史(Anamnesis of donors,DA)進(jìn)行分組后,通過(guò)RT-qPCR的方法檢測(cè)這樣組織中18s,ACTB,CYC1,GAPDH,HPRT1,UBC和TBP等常用內(nèi)參基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量并比較差異,然后使用geNorm和NormFinder軟件比對(duì)這些內(nèi)參基因在不同條件下的表達(dá)穩(wěn)定性。研究結(jié)果我們的結(jié)果顯示隨著捐獻(xiàn)者年齡和樣本PMI的增加,ACTB,CYC1,GAPDH,HPRT1,UBC和TBP等基因的mRNA表達(dá)量有下降的趨勢(shì);通過(guò)geNorm和NormFinder軟件的比對(duì),CYC1和TBP在163個(gè)不同腦組織中mRNA表達(dá)量最穩(wěn)定。研究結(jié)論腦組織mRNA的表達(dá)量可能會(huì)隨著捐獻(xiàn)者年齡和PMI的增加而出現(xiàn)降低的現(xiàn)象;在不同的腦組織中CYC1和TBP兩個(gè)基因的mRNA表達(dá)量與GAPDH、ACTB、HPRT1、UBC和18s相比有較高穩(wěn)定性,更適合作為腦組織轉(zhuǎn)錄研究的內(nèi)參基因。研究背景阿爾茲海默病(Alzheimer' s disease,AD)和路易體癡呆(Lewy body dementias,LBD)是最常見(jiàn)的兩種導(dǎo)致老年人癡呆的神經(jīng)退行性疾病。AD的病理過(guò)程是β淀粉樣蛋白(amyloid beta,Aβ)和Tau蛋白在腦內(nèi)形成神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles,NFTs)引起神經(jīng)元的死亡。LBD的病理過(guò)程是由α-synuclein蛋白在腦內(nèi)形成包涵體沉淀,從而引起震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、嗅覺(jué)功能障礙等癥狀,晚期可出現(xiàn)視幻覺(jué)和癡呆癥狀。AD與LBD的病理過(guò)程可能存在一定聯(lián)系,合并AD病理的LBD患者可能會(huì)出現(xiàn)更嚴(yán)重的認(rèn)知損傷。研究目的本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)探究人腦組織中AD和LBD的相關(guān)病理改變,來(lái)觀察AD和路易體相關(guān)病理改變(Lewy-related pathology,LRP)在捐獻(xiàn)者人群中的分布情況,并探索AD和LBD病理過(guò)程對(duì)捐獻(xiàn)者生前認(rèn)知功能的影響。研究方法本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院人腦組織庫(kù)的127例腦組織進(jìn)行相關(guān)的AD病理(Aβ、磷酸化Tau蛋白和神經(jīng)炎癥斑塊)和LBD病理(α-synuclein蛋白)染色并給予相應(yīng)評(píng)分,將這些腦組織的病理診斷結(jié)果與捐獻(xiàn)者生前的日常認(rèn)知(Everyday cognition,Ecog)情況進(jìn)行比較分析,觀察AD和LRP病理改變對(duì)捐獻(xiàn)者生前日常認(rèn)知功能的影響。研究結(jié)果在本次實(shí)驗(yàn)中127例腦組織中,有44例腦組織是AD陽(yáng)性,有22例腦組織有LRP改變,AD陽(yáng)性合并LRP的腦組織有12例(54.5%);5例皮質(zhì)彌散型LRP的腦組織中有4例(80%)合并AD陽(yáng)性病理改變。隨著LRP的發(fā)展,捐獻(xiàn)者生前認(rèn)知能力有下降趨勢(shì),皮質(zhì)彌散型LRP合并AD病理改變的捐獻(xiàn)者生前認(rèn)知能力要顯著的低于其他類(lèi)型LRP合并AD陽(yáng)性病理的捐獻(xiàn)者(P0.01)。研究結(jié)論根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,約有一半(54.5%)的LRP的腦組織合并AD陽(yáng)性病理改變,當(dāng)LRP發(fā)展到皮質(zhì)區(qū)域,大多數(shù)(80%)的LRP腦組織合并了 AD陽(yáng)性病理改變,這部分捐獻(xiàn)者的生前認(rèn)知能力顯著的低于其他AD陽(yáng)性病理改變的捐贈(zèng)者。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16
【圖文】：

神經(jīng)系統(tǒng)疾病（ＤＮＳ）、癌癥（Ｃａｎｃｅｒ）、心肺系統(tǒng)疾�。ǎ龋蹋模�、多器官衰竭（ＭＯＦ）、逡逑糖尿病和高血壓（Ｄ＆Ｈ）以及其他疾�。ǎ希簦瑁澹颍┝鶄�(gè)組別，檢測(cè)的七個(gè)內(nèi)參基因在捐逡逑獻(xiàn)者生前患有糖尿病和高血壓的腦組織中有較高的平均Ｃｑ值（圖２Ａ）。的ｍＲＮＡ逡逑水平在ＤＮＳ、Ｃａｎｃｅｒ和Ｄ＆Ｈ這三個(gè)組的腦組織中平均Ｃｑ值略高于另外三個(gè)疾病組逡逑（圖２Ｂ）�；虻模恚遥危帘磉_(dá)量在不同的疾病分組的腦組織中也存在差異，ＨＬＤ逡逑和Ｄ＆Ｈ這兩個(gè)組的腦組織中，灰７＾９的平均Ｃｑ值略高于其余四個(gè)疾病組（圖２Ｃ）。逡逑基因的ｍＲＮＡ水平在ＨＬＤ和Ｄ＆Ｈ這兩個(gè)組的平均Ｃｑ值高于其余四個(gè)疾病組逡逑（圖２Ｄ）。ＯＴ７、７ＳＰ和他Ｗ７１基因的ｍＲＮＡ水平在ＨＬＤ、Ｄ＆Ｈ和Ｏｔｈｅｒ這三個(gè)組的逡逑平均Ｃｑ值略高于其余三個(gè)疾病組（圖２Ｅ－Ｇ）。１６３例人腦組織中，【奴：基因的ｍＲＮＡ逡逑表達(dá)水平在Ｄ＆Ｈ組要略高于其他五個(gè)疾病分組（圖２Ｈ）。逡逑Ａ邐Ｂ邐Ｃ邐Ｄ逡逑．邋１８ｓ邐ＡＣＴＢ邐ＧＡＰＤＨ逡逑＇ｐ邋．ｍｓ逡逑？邐Ｉ邐？邋ＣＡＮＣＥＲ邋？邐？邐？逡逑｜■，廣逡逑Ｉｔ．”邐Ｖ邋／邋＂邋／

中ｍＲＮＡ表達(dá)穩(wěn)定性最高，７？°在ＰＭＩ小于２４小時(shí)和大于３６小時(shí)的腦組織中ｍＲＮＡ逡逑表達(dá)穩(wěn)定值和ＣＹＣ１相同，ＰＭＩ在２４－３６小時(shí)之間的腦組織沉＇表達(dá)穩(wěn)定值低于逡逑７ＳＰ邋（圖３Ｃ）。根據(jù)腦組織樣本在－８０°Ｃ的保存時(shí)間的不同分組，７ＳＰ和相較逡逑于其他五個(gè)內(nèi)參基因，有最低的ｍＲＮＡ表達(dá)穩(wěn)定值（圖３Ｄ）。綜上所述，在ｇｅＮｏｒｍ逡逑算法中ｎｒ／和７ＳＰ基因在不同的人腦組織中表達(dá)穩(wěn)定性較好，在使用人腦組織進(jìn)逡逑行相關(guān)研究時(shí)，選擇ｎｒｉ和ｚｇｐ作為內(nèi)參基因較為合適。逡逑Ａ邐Ａｎａｍｎｅｓｉｓ邋ｏｆ邋ｄｏｎｏｒｓ邐Ｂ邐Ａｇｅ邋ｏｆ邋ｄｏｒｎｏｒｓ逡逑§邋２邋０１邐ｓ２－０＇逡逑Ｓ１５．邐卜NB＇：：逡逑卜．Ｘ／邐ｎ．邐．ｒ逡逑Ｓ邐，邐Ｔ邐ＣＹＣ１邋？邐＾邐？邋ＣＹＣ１逡逑Ｉ邋：：邐＂ＴＢＰ邋Ｉ邋＾邐＂ＴＢＰ逡逑ｉ0－５１邐｜？ｊ邐．．逡逑ＤＮＳ邋ＣＡＮＣＥＲ邋ＨＬＤ邋ＭＯＦ邋Ｄ＆Ｈ邋ＯＴＨＥＲ邐＜７0邐７０＿ｇ０邐８0．９0邐＞９０邋（ｙ）逡逑Ｃ邐Ｐｏｓｔｍｏｒｔｅｍ邋ｉｎｔｅｒｖａｌ邐Ｄ邐Ｓｔｏｒａｇｅ邋ｔｉｍｅ逡逑0，邋２．０邋ｉ邐0，邋２．０邋ｎ逡逑．邐．邋邐邐逡逑ｉｎ邐二？你�。酰姡蓿ⅲ�，邐

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