【摘要】：目的:觀察H102對(duì)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD小鼠AMPK-mTOR自噬相關(guān)通路中相關(guān)蛋白表達(dá)及學(xué)習(xí)記憶能力的影響,探討H102是否可以通過AMPK-mTOR自噬相關(guān)通路清除Aβ。方法:1.將30只六月齡的APP/PS1 AD小鼠隨機(jī)分為兩組,每組15只,將同背景同月齡15只C57BL/6J正常雄性小鼠設(shè)為對(duì)照組。均在SPF級(jí)動(dòng)物中心飼養(yǎng)和給藥,H102給藥干預(yù)組的小鼠每天同一時(shí)間段經(jīng)鼻腔給予H102溶液5μl(5.8mg/kg),對(duì)照組和AD組小鼠每日給予同劑量的的輔料溶液。持續(xù)不間斷的給藥30天后進(jìn)行水迷宮和新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn),測試三組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。2.行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,25%的烏拉坦(4 ml/Kg)腹腔注射麻醉,磷酸鹽緩沖液心臟灌流,斷頭冰上取腦,一半腦組織取出后放入4%的多聚甲醛中,用于石蠟包埋、切片,用免疫組化方法來檢測p-AMPK、p-mTOR、p-ULK1、P62、LC3Ⅱ/Ⅰ、Aβ蛋白的表達(dá);另一半腦組織將海馬與皮層分離單獨(dú)包裝暫時(shí)放入液氮中冷卻,后集中放入-80℃冰箱里保存,用Western blot方法檢測p-AMPK、p-mTOR、p-ULK1、P62、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表達(dá),用ELISA檢測方法檢測Aβ蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.定位航行實(shí)驗(yàn):AD組小鼠的逃避潛伏期與正常對(duì)照組小鼠相比,顯著增加(P0.05);H102組小鼠的逃避潛伏期與AD組小鼠相比顯著減少(P0.05);與正常對(duì)照組相比,H102組小鼠的逃避潛伏期無顯著性差異(P0.05)。2.空間探索實(shí)驗(yàn):與正常對(duì)照組小鼠相比,AD組小鼠在第一象限停留的時(shí)間顯著縮短(P0.05),跨越隱匿平臺(tái)的次數(shù)顯著減少(P0.05),初始角顯著增大(P0.05);H102組小鼠在第一象限停留的時(shí)間及跨越隱匿平臺(tái)的次數(shù)與AD組小鼠相比顯著增加(P0.05),初始角與AD組小鼠相比顯著減小(P0.05);與正常對(duì)照組相比,H102組小鼠在第一象限停留的時(shí)間、跨越隱匿平臺(tái)的次數(shù)、初始角均無顯著性差異(P0.05)。3.新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn):AD組小鼠新物體識(shí)別指數(shù)(RI)與正常對(duì)照組小鼠相比明顯降低(P0.05);H102組小鼠RI與AD組小鼠相比較顯著提高(P0.05);與正常對(duì)照組小鼠相比較,H102組小鼠RI無顯著性差異(P0.05)。4.免疫組織化學(xué)檢測:與正常對(duì)照組相比,AD組小鼠腦組織中p-AMPK、p-ULK1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表達(dá)顯著降低(P0.05),p-mTOR、P62蛋白表達(dá)顯著升高(P0.05);與AD組小鼠相比,H102組小鼠腦組織中p-AMPK、p-ULK1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表達(dá)顯著升高(P0.05),p-mTOR、P62蛋白表達(dá)顯著降低(P0.05);與正常對(duì)照組小鼠相比,H102組小鼠腦組織中p-mTOR蛋白顯著降低(P0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表達(dá)顯著升高(P0.05),p-AMPK、p-ULK1、P62蛋白的表達(dá)量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.Western blot檢測:與正常對(duì)照組相比,AD組小鼠腦組織中p-AMPK、p-ULK1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表達(dá)均顯著降低(P0.05),p-mTOR、P62蛋白表達(dá)顯著升高(P0.05);與AD組小鼠相比,H102組小鼠腦組織中p-AMPK、p-ULK1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表達(dá)均顯著升高(P0.05),p-mTOR、P62蛋白表達(dá)顯著降低(P0.05);與正常對(duì)照組小鼠相比,H102組小鼠腦組織中LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表達(dá)顯著升高(P0.05),H102組小鼠海馬中p-mTOR蛋白表達(dá)與正常對(duì)照組小鼠相比顯著降低(P0.05),皮層中p-mTOR蛋白表達(dá)與正常對(duì)照組小鼠相比無顯著性差異(P0.05),H102組小鼠腦組織中p-AMPK、p-ULK1、P62蛋白的表達(dá)與正常組相比均無顯著性差異(P0.05)。6.Aβ蛋白檢測結(jié)果:免疫組化和ELISA檢測結(jié)果均表明,AD組小鼠腦組織中Aβ蛋白的表達(dá)量與正常對(duì)照組小鼠相比,顯著升高(P0.05);與AD組小鼠相比,H102組小鼠腦組織中Aβ蛋白的表達(dá)量顯著降低(P0.05);與正常對(duì)照組小鼠相比,H102組小鼠腦組織中Aβ蛋白的表達(dá)量無顯著性差異(P0.05)。結(jié)論:β片層阻斷肽H102可能通過AMPK-mTOR自噬通路促進(jìn)腦內(nèi)Aβ的清除,提高小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R749.16
【圖文】：

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖 1.1、表 1.1、和圖 1.2 所示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，經(jīng)過五天的游泳訓(xùn)練，三組小鼠的平均逃避潛伏期的時(shí)間均有縮短，但程度不同，正常對(duì)照組與H102 干預(yù)組的時(shí)間縮短更為明顯。AD 組小鼠的平均逃避潛伏期與正常對(duì)照組相比，時(shí)間顯著延長（P<0.05），H102 組小鼠的平均逃避潛伏期與 AD 組小鼠相比，時(shí)間顯著縮短（P<0.05），與正常對(duì)照組相比，H102 組的平均逃避潛伏期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

圖 1.2 各組小鼠定位航行實(shí)驗(yàn)平均逃避潛伏期的比較與正常組比較：*P<0.05；與 AD 組比較：#P<0.051.2.2 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果表 1.2 Comparison of RFQ in the space exploration experiment, the number of timesacross the hidden platform, and the orientation angle of the water in each group（n=15, x ±s）Group RFQ(S) 跨越隱匿平臺(tái)次數(shù)（次/90 s）入水朝向角（°）control 29.84±2.21 2.57±0.17 42.98±4.93AD 16.07±3.53*0.67±0.12*74.49±6.09*H102 24.48±1.68＃1.69±0.32＃50.39±5.04＃*P<0.05 vs control;#P<0.05 vs AD（1） 第一象限停留時(shí)間（RFQ）的比較

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本文編號(hào)：2730163