【摘要】：背景中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)在認(rèn)知功能中扮演著重要的角色,乙酰膽堿功能下調(diào)目前被認(rèn)為是癡呆的重要病因。A型肉毒毒素(BoNT/A)是由革蘭陽性厭氧梭狀肉毒桿菌分泌的一種神經(jīng)毒素。由于其能特異性裂解神經(jīng)肌肉接頭處膽堿能神經(jīng)末梢上突觸相關(guān)蛋白25 kDa(SNAP-25),而致使突觸囊泡無法與突觸前膜融合,從而抑制乙酰膽堿等神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。另外,與傳統(tǒng)觀點認(rèn)為的BoNT/A僅局限在注射局部不同,目前越來越多的研究認(rèn)為BoNT/A可逆向軸漿運輸并通過轉(zhuǎn)胞吞作用跨神經(jīng)元運輸至更高一級神經(jīng)系統(tǒng),但目前尚存在爭議。而BoNT/A外周局部注射是否會影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能而致使空間學(xué)習(xí)能力的缺損目前仍未可知。目的闡明BoNT/A面部注射后注射點肌肉的運動狀態(tài),研究BoNT/A面部局部注射對小鼠空間學(xué)習(xí)能力的影響,并對BoNT/A逆向軸漿運輸和跨神經(jīng)元轉(zhuǎn)胞吞作用進(jìn)行探討。方法利用漢密爾頓微量注射器分別將低于臨床應(yīng)用劑量(2 U/kg),臨床應(yīng)用劑量(10 U/kg),以及高于臨床應(yīng)用劑量的小鼠最大耐受劑量(50 U/kg)BoNT/A和無菌生理鹽水(5 μl,對照組)對小鼠的單側(cè)觸須墊進(jìn)行注射,觀察雙側(cè)觸須墊的運動狀態(tài);藥物注射后3天,4周及6周三個時間點分別進(jìn)行Morris水迷宮實驗(MWM),以檢測各組小鼠的空間學(xué)習(xí)能力;行為學(xué)實驗結(jié)束行免疫組化檢測BoNT/A特異性蛋白水解產(chǎn)物BoNT/A-cleaved SNAP-25的中樞表達(dá)情況。結(jié)果1.BoNT/A單側(cè)觸須墊注射后2天,注射側(cè)觸須墊肌肉出現(xiàn)弛緩性癱瘓,表現(xiàn)為運動不能,伴隨觸須向后倒塌,擺動減弱或消失,其癱瘓程度在研究劑量范圍內(nèi)與注射劑量呈正相關(guān)。2.BoNT/A注射后3天及4周,MWM實驗反映動物空間學(xué)習(xí)能力的指標(biāo)在各BoNT/A亞組與對照亞組中相比均無顯著性差異;6周MWM實驗中,各BoNT/A亞組較對照亞組均表現(xiàn)出更短的平均逃避潛伏期和平均運動路徑總長度;任意時間點,反映空間記憶能力的指標(biāo)在各亞組中均無顯著性差異。3.不同劑量的BoNT/A觸須墊注射均可于6周后在中樞同側(cè)面神經(jīng)核(FN)區(qū)域檢測到 BoNT/A-cleaved SNAP-25 的表達(dá)。結(jié)論1.BoNT/A注射側(cè)觸須墊的肌肉麻痹程度在研究劑量范圍內(nèi)與注射劑量呈正相關(guān)。2.BoNT/A可跨神經(jīng)元從外周注射部位逆向運輸至更高一級神經(jīng)系統(tǒng)。3.BoNT/A在注射后3天和4周不改變小鼠的空間學(xué)習(xí)能力;于注射后6周,BoNT/A注射亞組小鼠表現(xiàn)出更好的空間學(xué)習(xí)能力,這一現(xiàn)象證實了 BoNT/A外周注射的中樞安全性。
【圖文】：

結(jié)果逡逑ｏＮＴ／Ａ注射側(cè)觸須墊麻痹，觸須后傾倒塌，伴運動不能逡逑判斷ＢｏＮＴ／Ａ是否成功起效，我們對小鼠雙側(cè)觸須墊的運動狀態(tài)進(jìn)行們發(fā)現(xiàn)ＢｏＮＴ／Ａ注射２天后，ＢｏＮＴ／Ａ注射組小鼠注射同側(cè)的觸須墊同程度的弛緩性癱瘓，伴隨觸須位置明顯后傾呈倒塌狀（如圖ｌａ－ｃ所弱甚至消失，且觸須的倒塌程度（觸須墊肌肉的麻痹程度）及運動障究劑量范圍內(nèi)與ＢｏＮＴ／Ａ的注射劑量呈正相關(guān)；而對側(cè)未行藥物注運動如常。反之，對照組（生理鹽水注射組）小鼠的觸須墊運動如，未出現(xiàn)觸須后傾倒塌或運動減弱的現(xiàn)象（如圖Ｉｄ所示）。該現(xiàn)象表完成了對各小鼠觸須墊的ＢｏＮＴ／Ａ注射，并且于注射第２天藥物成功

為研究ＢｏＮＴ／Ａ單側(cè)觸須墊注射后３天是否影響小鼠的空間學(xué)習(xí)能力，小鼠逡逑在藥物注射后３天進(jìn)行ＭＷＭ測試。實驗結(jié)果顯示各劑量實驗亞組小鼠的平均逃逡逑避潛伏時間在訓(xùn)練階段隨訓(xùn)練天數(shù)的遞增逐漸下降（如圖２ａ所示），其學(xué)習(xí)曲線逡逑（即平均逃避潛伏時間隨訓(xùn)練天數(shù)遞增的下降曲線）與對照俎相比，無顯著性差逡逑異（Ｐ＞邋０．０５，如圖２ａ所示）。對各亞組小鼠的平均運動路徑總長度進(jìn)行分析，我逡逑們發(fā)現(xiàn)各實驗亞姐與對照亞俎相比，均無顯著性差異（戶＞0．0５，如圖２ｂ所示）。逡逑另外，我們通過觀察各亞組小鼠在訓(xùn)練階段的第一天和第四天的運動軌跡，證實逡逑各亞組小鼠均可通過４天訓(xùn)練成功定位隱蔽平臺的所在位置（如圖２ｃ－ｄ所示）。圖逡逑３ａ顯示５０邋Ｕ／ｋｇ邋ＢｏＮＴ／Ａ組小鼠的平均運動速度在訓(xùn)練第一天顯著性低于對照亞組逡逑（Ｐ＜邋０．０５，如圖３所示），但在其余訓(xùn)練日里與對照亞組相比均未表現(xiàn)出顯著性逡逑差異（尸＞邋０．０５）。上述結(jié)果綜合表明ＢｏＮＴ／Ａ注射后３天，小鼠的空間學(xué)習(xí)能力逡逑未出現(xiàn)變化。逡逑ａ邐ｂ逡逑Ｔｒａｉｎｉｎｇ邐Ｔｒａｉｎｉｎｇ逡逑一邋８０］邋１
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R749.16

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭慶杰;;A型肉毒毒素防治偏頭痛的研究進(jìn)展[J];濱州職業(yè)學(xué)院學(xué)報;2017年Z1期

2 代月娥;劉柳;;A型肉毒毒素治療帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛的療效觀察[J];當(dāng)代醫(yī)藥論叢;2018年11期

3 Joseph L.Ferreira ,馮潔;檢測A型肉毒毒素的單克隆抗體[J];微生物學(xué)免疫學(xué)譯刊;1988年04期

4 張萍;宋朝暉;;A型肉毒毒素治療不同時期腦卒中后肢體痙攣20例[J];醫(yī)藥導(dǎo)報;2018年02期

5 陳萌萌;孫越;房磊;;A型肉毒毒素早期干預(yù)顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病的臨床研究[J];世界復(fù)合醫(yī)學(xué);2019年06期

6 張東亮;趙舒煊;王明;陳鐵戈;張海鴻;;A型肉毒毒素在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的臨床應(yīng)用[J];臨床與病理雜志;2018年07期

7 蘇振民;汪城河;林文雄;吳雅瑩;;A型肉毒毒素治療先天性肌性斜頸的初步觀察[J];中國美容整形外科雜志;2018年07期

8 Wang T;;中國研究:A型肉毒毒素治療青少年腋臭的安全性及有效性的長期觀察[J];中國醫(yī)療美容;2018年07期

9 李越;王文鮮;董桂霞;;5%復(fù)方利多卡因乳膏緩解眼瞼痙攣患者注射A型肉毒毒素相關(guān)疼痛的效果[J];眼科;2019年03期

10 紀(jì)紅;許莉莎;宮為大;張鳳平;許鳳麗;;A型肉毒毒素與復(fù)方倍他米松序貫治療帶狀皰疹后神經(jīng)痛的療效觀察[J];浙江醫(yī)學(xué);2019年08期

相關(guān)會議論文 前10條

1 饒嬈;韓永升;韓詠竹;薛本春;汪煒民;杜益剛;王偉;;以痙攣性斜頸為表現(xiàn)的遲發(fā)性肌張力障礙5例及A型肉毒毒素療效分析[A];華東六省一市第二十三次神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨2016年浙江省神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2016年

2 李雪莉;;A型肉毒毒素聯(lián)合玻尿酸注射在下面部年輕化中的應(yīng)用[A];2018全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2018年

3 劉之力;陳麗華;邢媛媛;王寧;蘇明瑛;;A型肉毒毒素聯(lián)合光電嫩膚在皮膚光老化中的臨床應(yīng)用[A];2016全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2016年

4 劉福平;劉建華;;A型肉毒毒素與類固醇激素治療骶髂關(guān)節(jié)疼痛的臨床療效比較[A];中華醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會第十一屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2014年

5 李迪森;肖禮祖;;A型肉毒毒素對神經(jīng)病理性疼痛小鼠中施旺細(xì)胞髓鞘形成的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會第十二屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2016年

6 李旭;杜偉;周末;房柔妤;孫秋寧;;A型肉毒毒素治療系統(tǒng)性硬化癥繼發(fā)雷諾現(xiàn)象的療效[A];2019全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2019年

7 謝尚;蔡志剛;許慧;吳立玲;;A型肉毒毒素誘導(dǎo)大鼠頜下腺細(xì)胞自噬流改變的作用及機(jī)制探索[A];第十四次中國口腔頜面外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2018年

8 劉富甲;余云舟;;A型肉毒毒素功能結(jié)構(gòu)域表位抗原免疫保護(hù)作用與免疫保護(hù)機(jī)制研究[A];第十四屆生物毒素毒理學(xué)術(shù)大會暨第一屆生物毒素——從生存適應(yīng)到轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)專題學(xué)術(shù)會議會刊[C];2019年

9 米霞;;注射用A型肉毒毒素治療腋窩多汗癥和腋臭[A];2017全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2017年

10 連亞軍;任志平;張璐;;A型肉毒毒素治療經(jīng)典三叉神經(jīng)痛患者血漿SOM、GLU、IL-1β濃度變化[A];中華醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會第十二屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2016年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 趙和云;A型肉毒毒素致局部性肌張力障礙性疾病[N];中國醫(yī)藥報;2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 周末;A型肉毒毒素治療系統(tǒng)性硬化癥繼發(fā)雷諾現(xiàn)象的療效及皮膚鏡評估[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

2 萬新華;A型肉毒毒素治療局限性肌張力障礙和肌肉痙攣的應(yīng)用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1998年

3 楊雄;A型肉毒毒素治療良性前列腺增生癥的實驗研究[D];華中科技大學(xué);2011年

4 李莉;內(nèi)鏡下胃壁注射A型肉毒毒素治療單純性肥胖的臨床研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 倪琳慧;A型肉毒毒素面部注射對小鼠空間學(xué)習(xí)能力的影響研究[D];浙江大學(xué);2019年

2 徐國山;A型肉毒毒素對人毛發(fā)生長及毛囊免疫豁免的影響[D];延邊大學(xué);2019年

3 唐小焰;A型肉毒毒素單獨或聯(lián)合類固醇激素對瘢痕疙瘩和增生性瘢痕治療效果的Meta分析[D];川北醫(yī)學(xué)院;2018年

4 劉玉瑩;不同劑量A型肉毒毒素對治療腋部臭汗癥的影響[D];吉林大學(xué);2018年

5 章坤燃;A型肉毒毒素（衡力）治療腦卒中后上肢痙攣的安全性和有效性的隨機(jī)、雙盲、安慰劑平行對照臨床研究[D];華中科技大學(xué);2015年

6 王敏;國產(chǎn)A型肉毒毒素治療帕金森病流涎的臨床療效研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2017年

7 秦軒;A型肉毒毒素治療腋臭單組率的Meta分析[D];山西醫(yī)科大學(xué);2017年

8 韓笑;注射用A型肉毒毒素預(yù)防和治療病理性瘢痕的研究及臨床應(yīng)用[D];東南大學(xué);2017年

9 賀彩紅;A型肉毒毒素治療三叉神經(jīng)痛及其伴發(fā)焦慮、抑郁及睡眠障礙臨床研究[D];鄭州大學(xué);2013年

10 袁麗平;A型肉毒毒素注射治療結(jié)合康復(fù)訓(xùn)練對腦癱（痙攣型偏癱）兒童平衡功能的影響[D];南華大學(xué);2017年

，

本文編號：2709395