【摘要】：背景中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)在認(rèn)知功能中扮演著重要的角色,乙酰膽堿功能下調(diào)目前被認(rèn)為是癡呆的重要病因。A型肉毒毒素(BoNT/A)是由革蘭陽(yáng)性厭氧梭狀肉毒桿菌分泌的一種神經(jīng)毒素。由于其能特異性裂解神經(jīng)肌肉接頭處膽堿能神經(jīng)末梢上突觸相關(guān)蛋白25 kDa(SNAP-25),而致使突觸囊泡無(wú)法與突觸前膜融合,從而抑制乙酰膽堿等神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。另外,與傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為的BoNT/A僅局限在注射局部不同,目前越來(lái)越多的研究認(rèn)為BoNT/A可逆向軸漿運(yùn)輸并通過(guò)轉(zhuǎn)胞吞作用跨神經(jīng)元運(yùn)輸至更高一級(jí)神經(jīng)系統(tǒng),但目前尚存在爭(zhēng)議。而B(niǎo)oNT/A外周局部注射是否會(huì)影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能而致使空間學(xué)習(xí)能力的缺損目前仍未可知。目的闡明BoNT/A面部注射后注射點(diǎn)肌肉的運(yùn)動(dòng)狀態(tài),研究BoNT/A面部局部注射對(duì)小鼠空間學(xué)習(xí)能力的影響,并對(duì)BoNT/A逆向軸漿運(yùn)輸和跨神經(jīng)元轉(zhuǎn)胞吞作用進(jìn)行探討。方法利用漢密爾頓微量注射器分別將低于臨床應(yīng)用劑量(2 U/kg),臨床應(yīng)用劑量(10 U/kg),以及高于臨床應(yīng)用劑量的小鼠最大耐受劑量(50 U/kg)BoNT/A和無(wú)菌生理鹽水(5 μl,對(duì)照組)對(duì)小鼠的單側(cè)觸須墊進(jìn)行注射,觀察雙側(cè)觸須墊的運(yùn)動(dòng)狀態(tài);藥物注射后3天,4周及6周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)(MWM),以檢測(cè)各組小鼠的空間學(xué)習(xí)能力;行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束行免疫組化檢測(cè)BoNT/A特異性蛋白水解產(chǎn)物BoNT/A-cleaved SNAP-25的中樞表達(dá)情況。結(jié)果1.BoNT/A單側(cè)觸須墊注射后2天,注射側(cè)觸須墊肌肉出現(xiàn)弛緩性癱瘓,表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)不能,伴隨觸須向后倒塌,擺動(dòng)減弱或消失,其癱瘓程度在研究劑量范圍內(nèi)與注射劑量呈正相關(guān)。2.BoNT/A注射后3天及4周,MWM實(shí)驗(yàn)反映動(dòng)物空間學(xué)習(xí)能力的指標(biāo)在各BoNT/A亞組與對(duì)照亞組中相比均無(wú)顯著性差異;6周MWM實(shí)驗(yàn)中,各BoNT/A亞組較對(duì)照亞組均表現(xiàn)出更短的平均逃避潛伏期和平均運(yùn)動(dòng)路徑總長(zhǎng)度;任意時(shí)間點(diǎn),反映空間記憶能力的指標(biāo)在各亞組中均無(wú)顯著性差異。3.不同劑量的BoNT/A觸須墊注射均可于6周后在中樞同側(cè)面神經(jīng)核(FN)區(qū)域檢測(cè)到 BoNT/A-cleaved SNAP-25 的表達(dá)。結(jié)論1.BoNT/A注射側(cè)觸須墊的肌肉麻痹程度在研究劑量范圍內(nèi)與注射劑量呈正相關(guān)。2.BoNT/A可跨神經(jīng)元從外周注射部位逆向運(yùn)輸至更高一級(jí)神經(jīng)系統(tǒng)。3.BoNT/A在注射后3天和4周不改變小鼠的空間學(xué)習(xí)能力;于注射后6周,BoNT/A注射亞組小鼠表現(xiàn)出更好的空間學(xué)習(xí)能力,這一現(xiàn)象證實(shí)了 BoNT/A外周注射的中樞安全性。
【圖文】：

結(jié)果逡逑ｏＮＴ／Ａ注射側(cè)觸須墊麻痹，觸須后傾倒塌，伴運(yùn)動(dòng)不能逡逑判斷ＢｏＮＴ／Ａ是否成功起效，我們對(duì)小鼠雙側(cè)觸須墊的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)進(jìn)行們發(fā)現(xiàn)ＢｏＮＴ／Ａ注射２天后，ＢｏＮＴ／Ａ注射組小鼠注射同側(cè)的觸須墊同程度的弛緩性癱瘓，伴隨觸須位置明顯后傾呈倒塌狀（如圖ｌａ－ｃ所弱甚至消失，且觸須的倒塌程度（觸須墊肌肉的麻痹程度）及運(yùn)動(dòng)障究劑量范圍內(nèi)與ＢｏＮＴ／Ａ的注射劑量呈正相關(guān)；而對(duì)側(cè)未行藥物注運(yùn)動(dòng)如常。反之，對(duì)照組（生理鹽水注射組）小鼠的觸須墊運(yùn)動(dòng)如，未出現(xiàn)觸須后傾倒塌或運(yùn)動(dòng)減弱的現(xiàn)象（如圖Ｉｄ所示）。該現(xiàn)象表完成了對(duì)各小鼠觸須墊的ＢｏＮＴ／Ａ注射，并且于注射第２天藥物成功

為研究ＢｏＮＴ／Ａ單側(cè)觸須墊注射后３天是否影響小鼠的空間學(xué)習(xí)能力，小鼠逡逑在藥物注射后３天進(jìn)行ＭＷＭ測(cè)試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各劑量實(shí)驗(yàn)亞組小鼠的平均逃逡逑避潛伏時(shí)間在訓(xùn)練階段隨訓(xùn)練天數(shù)的遞增逐漸下降（如圖２ａ所示），其學(xué)習(xí)曲線逡逑（即平均逃避潛伏時(shí)間隨訓(xùn)練天數(shù)遞增的下降曲線）與對(duì)照俎相比，無(wú)顯著性差逡逑異（Ｐ＞邋０．０５，如圖２ａ所示）。對(duì)各亞組小鼠的平均運(yùn)動(dòng)路徑總長(zhǎng)度進(jìn)行分析，我逡逑們發(fā)現(xiàn)各實(shí)驗(yàn)亞姐與對(duì)照亞俎相比，均無(wú)顯著性差異（戶＞0．0５，如圖２ｂ所示）。逡逑另外，我們通過(guò)觀察各亞組小鼠在訓(xùn)練階段的第一天和第四天的運(yùn)動(dòng)軌跡，證實(shí)逡逑各亞組小鼠均可通過(guò)４天訓(xùn)練成功定位隱蔽平臺(tái)的所在位置（如圖２ｃ－ｄ所示）。圖逡逑３ａ顯示５０邋Ｕ／ｋｇ邋ＢｏＮＴ／Ａ組小鼠的平均運(yùn)動(dòng)速度在訓(xùn)練第一天顯著性低于對(duì)照亞組逡逑（Ｐ＜邋０．０５，如圖３所示），但在其余訓(xùn)練日里與對(duì)照亞組相比均未表現(xiàn)出顯著性逡逑差異（尸＞邋０．０５）。上述結(jié)果綜合表明ＢｏＮＴ／Ａ注射后３天，小鼠的空間學(xué)習(xí)能力逡逑未出現(xiàn)變化。逡逑ａ邐ｂ逡逑Ｔｒａｉｎｉｎｇ邐Ｔｒａｉｎｉｎｇ逡逑一邋８０］邋１
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R749.16

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本文編號(hào)：2709395