【摘要】： 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是目前導(dǎo)致癡呆最常見(jiàn)的原因,其發(fā)病機(jī)制尚不清楚,并且缺乏有效的治療方法。富含丙氨酸的豆蔻�；鞍准っ窩的作用底物(myristoylated alanine-rich C-kinase substrate, MARCKS)是在大腦中表達(dá)豐富的聯(lián)系神經(jīng)元表面信號(hào)與樹(shù)突棘可塑性的重要膜蛋白,與學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān)。β-淀粉樣蛋白(βamyloid, Aβ)在神經(jīng)元外沉積形成的老年斑是AD的特征性病理表現(xiàn),同時(shí)它又是導(dǎo)致其它病理表現(xiàn)和癡呆癥狀的原因,AD除了老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié),樹(shù)突棘可塑性降低也是AD的重要病理表現(xiàn)之一。樹(shù)突棘可塑性決定于細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白的運(yùn)動(dòng),該過(guò)程受細(xì)胞膜表面4,5二磷酸磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate, PIP2)的控制。PIP2可以激活多種肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,導(dǎo)致細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白的運(yùn)動(dòng),進(jìn)而使樹(shù)突棘可塑性發(fā)生變化。MARCKS通過(guò)其效應(yīng)區(qū)(effector domain, ED)分別與PIP2和纖維狀肌動(dòng)蛋白(fibrous actin, F-actin)結(jié)合。MARCKS在蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)磷酸化或Ca2+的作用下,離開(kāi)細(xì)胞膜,并釋放PIP2和f-actin,使肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白被PIP2激活,并導(dǎo)致f-actin依賴(lài)性樹(shù)突棘可塑性變化。故本研究以MARCKS為切入點(diǎn),探索具有神經(jīng)元毒性作用的Aβ(1-40)作用下老齡大鼠海馬MARCKS的表達(dá)變化,并進(jìn)一步探討MARCKS變化導(dǎo)致的樹(shù)突棘可塑性變化以及中藥復(fù)方蓯蓉益智膠囊對(duì)這一變化的作用,探討中藥治療AD的新途徑。 目的： 1.建立側(cè)腦室一次性注射Aβ(1-40)至癡呆老齡大鼠模型,并評(píng)價(jià)該模型作為老年癡呆動(dòng)物模型的有效性。 2.研究Aβ(1-40)對(duì)癡呆老齡大鼠海馬MARCKS表達(dá)的影響,進(jìn)一步探索MARCKS介導(dǎo)的樹(shù)突棘可塑性的變化以及復(fù)方蓯蓉益智膠囊對(duì)Aβ致癡呆老齡大鼠海馬MARCKS表達(dá),及其介導(dǎo)的樹(shù)突棘可塑性變化的作用機(jī)制。 3.根據(jù)本研究結(jié)果,深入探討AD的中醫(yī)發(fā)病機(jī)制。 方法： 1對(duì)18-20月齡的老齡大鼠一次性側(cè)腦室注射聚集態(tài)Aβ(1-40)建立模型,通過(guò)Morris水迷宮檢測(cè)模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能,通過(guò)免疫組化檢測(cè)海馬Aβ(1-40)含量,通過(guò)病理檢測(cè),觀察其海馬病理變化,評(píng)價(jià)其表面效度；根據(jù)乙酰膽堿酯酶抑制劑安理申改善該模型學(xué)習(xí)記憶功能的有效性評(píng)價(jià)其預(yù)測(cè)效度；根據(jù)其導(dǎo)致癡呆的機(jī)理評(píng)價(jià)其結(jié)構(gòu)效度。 2將大鼠隨機(jī)分為年輕組、老齡組、假手術(shù)組、模型組、安理申組以及中藥組,模型組、安理申組以及中藥組一次性側(cè)腦室注射聚集態(tài)Aβ(1-40)建立老齡大鼠癡呆模型。中藥和安理申組分別予口服復(fù)方蓯蓉益智膠囊和安理申溶液14d。通過(guò)行為學(xué)、ELISA、RT-PCR和westernblotting等檢測(cè)方法,觀察模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能、Aβ(1-40)、MARCKS mRNA和樹(shù)突棘可塑性標(biāo)記蛋白drebrin含量的變化。 結(jié)果： 1該模型的表面效度成立：該模型可以模擬AD樣記憶障礙、海馬Ap含量增多以及神經(jīng)元丟失等病理表現(xiàn)；預(yù)測(cè)效度成立：乙酰膽堿酯酶抑制劑可以改善該模型的學(xué)習(xí)記憶功能,減少模型大鼠海馬Ap的含量,減少其海馬神經(jīng)元的變性和凋亡；結(jié)構(gòu)效度成立：Ap(1-40)導(dǎo)致的病理變化符合淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)假說(shuō)。 2行為學(xué)檢測(cè)表明模型組的學(xué)習(xí)記憶功能明顯低于年輕組,安理申組和中藥組大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能明顯高于模型組；模型組海馬MARCKS mRNA比年輕組、老齡組及假手術(shù)組均明顯升高(P0.01)；模型組海馬drebrin含量較年輕組、老齡組及假手術(shù)組均明顯降低(P0.01)；中藥組海馬MARCKS mRNA比模型組明顯降低(P0.01),安理申組海馬MARCKS mRNA沒(méi)有明顯變化；中藥組和安理申組海馬drebrin含量與模型組相比無(wú)明顯差別。 結(jié)論： 1側(cè)腦室注射Ap(1-40)致癡呆老齡大鼠模型是用于研究AD發(fā)病機(jī)制以及新療法的有效工具,尤其適合與Aβ相關(guān)的病理機(jī)制以及針對(duì)Aβ神經(jīng)毒性治療方法的研究。 2側(cè)腦室注射Ap(1-40)可以明顯增加老齡大鼠海馬MARCKS mRNA的表達(dá),降低樹(shù)突棘可塑性,并且導(dǎo)致老齡大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙。根據(jù)MARCKS與樹(shù)突棘可塑性之間的關(guān)系,推斷MARCKS升高,導(dǎo)致與樹(shù)突棘可塑性變化的游離態(tài)PIP2減少,很可能是Ap(1-40)致神經(jīng)元可塑性降低的關(guān)鍵環(huán)節(jié)�；凇岸緭p腦絡(luò)”理論研制的具有益腎補(bǔ)肝,解毒通絡(luò)作用的復(fù)方蓯蓉益智膠囊能夠降低腦室注射Ap(1-40)致癡呆老齡大鼠海馬MARCKS mRNA的表達(dá),從而改善癡呆老齡大鼠學(xué)習(xí)記憶功能。其是否能夠通過(guò)調(diào)節(jié)MARCKS的含量來(lái)增加樹(shù)突棘可塑性,還需要進(jìn)一步的證明。 3.根據(jù)“毒損腦絡(luò)”理論,對(duì)AD中醫(yī)病機(jī)的探討,發(fā)現(xiàn)Ap由人體產(chǎn)生,并可以導(dǎo)致神經(jīng)元丟失,具有敗壞形體的特征,屬于中醫(yī)“內(nèi)生毒邪”的范疇。進(jìn)一步思考“絡(luò)”的含義,發(fā)現(xiàn)隨年齡的增長(zhǎng),富含脂質(zhì)的神經(jīng)元細(xì)胞膜最易受到氧化損傷,并且細(xì)胞膜是聯(lián)系細(xì)胞表面信號(hào)和細(xì)胞內(nèi)功能變化的途徑,是人體氣機(jī)的重要通路,屬于“絡(luò)”的范疇。所以“毒損腦絡(luò)”是AD的重要病機(jī)。
【圖文】：

曰月日................潛伏期，

本文編號(hào)：2709077